ROSE DU BENGALE: JUSTIFICATION, PROCÉDURE, CONTRÔLE QUALITÉ - MÉDICAMENT - 2025

Rose Bengal est un test de laboratoire basé sur une réaction antigène-anticorps pour le diagnostic de la brucellose. La technique permet la détection d'anticorps spécifiques contre la bactérie Brucella abortus dans des échantillons de sérum humain. Le résultat peut être rapporté qualitativement ou semi-quantitativement.

La forme qualitative exprime si le patient est positif ou négatif pour le test, c'est-à-dire s'il y a ou non des anticorps. Pendant ce temps, le rapport semi-quantitatif est rapporté en UI / ml et indique la quantité approximative d'anticorps présents. Il est à noter que les anticorps ne seront produits que si le patient a été en contact avec le micro-organisme.

Réaction à la rose du Bengale dans une plaque d'agglutination. Source: tirée de la vidéo

En raison de sa grande simplicité, de sa grande sensibilité et de sa spécificité, c'est l'une des techniques de séroagglutination les plus utilisées en médecine comme test initial pour le diagnostic de cette maladie.

Certains chercheurs ont comparé l'efficacité du test Rose Bengal avec d'autres techniques, telles que la séroagglutination (antigènes fébriles) et ont observé que bien qu'il y ait une bonne corrélation, ils ont vu des cas isolés dans lesquels le test d'antigène fébrile était négatif et Rose de Flare positive.

La différence obtenue était due au fait que ces patients avaient une sous-classe d'anticorps IgG contre Brucella abortus avec une meilleure capacité de liaison à pH acide, ils pouvaient donc réagir avec le réactif Rose Bengal mais pas avec celui des antigènes fébriles.

En ce sens, ils ont suggéré que les réactifs de la technique de l'antigène fébrile soient modifiés à un pH acide afin de pouvoir détecter ce type de cas.

Base

Le réactif Rose Bengal se compose d'une suspension antigénique. Il est composé de la souche S99 de Brucella abortus, diluée dans un tampon lactate acide (pH 3,6), plus du phénol et du colorant Rose Bengal.

Par conséquent, dans l'échantillon ce qui est recherché sont des anticorps anti-Brucella, s'ils sont présents, ils réagiront avec l'antigène réactif et une réaction d'agglutination visible macroscopiquement sera observée. Le test détecte des anticorps IgM ou des anticorps IgG.

Cela signifie qu'il peut détecter la maladie à la fois dans son stade aigu où les anticorps IgM prévalent ou dans son stade chronique où les anticorps IgG prédominent.

Ceci représente un avantage car cela augmente la sensibilité du test, mais en même temps c'est un inconvénient car il ne fait pas de distinction entre une étape et une autre, car la réaction avec les anticorps IgM et IgG est identique.

Le test doit toujours être effectué avec un contrôle négatif et un contrôle positif. Le contrôle négatif contient du sérum animal sans anticorps et le contrôle positif contient du sérum d'origine animale avec 50 UI / ml d'anticorps anti-Brucella.

Utilisation

La brucellose est une maladie grave qui a tendance à être chronique et dangereuse, il est donc très important qu'elle soit diagnostiquée tôt. C'est une zoonose et les humains peuvent être infectés par contact direct avec du matériel contaminé, les personnes les plus vulnérables étant les vétérinaires et les gardiens d'animaux.

L'infection peut également survenir en mangeant de la viande crue infectée, entre autres formes d'infection.

Cette maladie attaque localement ou systématiquement. La forme systémique est la plus grave, car divers organes peuvent être affectés, dont le système endothélial du réticulum (foie, rate, moelle osseuse), la peau (cellulite et lymphadénopathie), le système respiratoire (pneumonie), le système musculo-squelettique (arthrite, sacro-iliite et spondylarthrite), entre autres.

Le test Rose Bengal est une technique très utile pour effectuer un premier dépistage, car il est très peu coûteux, facile à utiliser et possède une grande spécificité et sensibilité.

Les cas de faux négatifs et de faux positifs sont très rares et peuvent survenir chez les personnes ayant des titres d'anticorps très faibles (<25 UI / ml) ou extrêmement élevés (> 1000 UI / ml) respectivement.

Processus

matériaux

-Kit Rose Bengal

-Plaque d'agglutination fond blanc

-Pipette de 50 µl

-Rotateur (facultatif)

-Vortex

Technique (méthode qualitative)

Les kits commerciaux Rose Bengal sont livrés avec des réactifs prêts à l'emploi.

-Tempérez les réactifs avant de commencer à travailler.

-Les plaques d'agglutination ont des cercles dessinés, chacun pour un échantillon différent. Utilisez 3 cercles, le premier pour le contrôle négatif, le second pour l'échantillon et le troisième pour le contrôle positif.

-Placer une goutte ou 50 µl des contrôles et de l'échantillon dans leur cercle correspondant.

-Mélanger le réactif Rose Bengal à l'aide d'un vortex. Placez une goutte à côté de celles précédemment placées.

-Mélanger avec des cure-dents en bois (en utiliser un pour chaque échantillon ou contrôle). Faites des mouvements circulaires et étendez-vous pour couvrir tout le cercle.

Source: images tirées de la vidéo: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Mise en page de l'image modifiée.

-Placer la plaque sur un rotateur automatique à 80 à 100 tr / min ou tourner manuellement pendant 4 minutes. Lisez la preuve à la fin de ce temps.

-Vérifiez que les contrôles ont donné comme prévu. Comparez la réaction de l'échantillon à tester avec les contrôles. Signaler comme positif si une agglutination est observée et comme négatif s'il n'y a pas d'agglutination.

Un test positif indique que le patient a une quantité égale ou supérieure à 25 UI / ml d'anticorps anti-Brucella.

Interprétation d'une réaction positive (avec agglutination) et négative (sans agglutination). Source: Citrulline. Image modifiée.

Technique (semi-quantitative)

Si dans la réaction qualitative l'échantillon est fortement positif, il peut être semi-quantifié. Pour cela, des doubles dilutions en série de l'échantillon sont effectuées avec une solution saline physiologique. La procédure décrite précédemment est effectuée à chaque dilution.

Il est également interprété en observant l'agglutination macroscopiquement. Le résultat sera le titre de la dilution la plus élevée dans laquelle un résultat positif a été observé.

Pour calculer la valeur approximative des anticorps anti-Brucella, la formule suivante est utilisée:

25 UI / ml x titre de réaction = UI / ml

Exemple, si un patient dans le test semi-quantitatif est positif à la dilution ½, ¼ et 1/8 et commence à être négatif à partir de la dilution 1/16, cela signifie que le patient a un titre de 8.

Application de la formule:

25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml

Contrôle de qualité

-Les kits ont une date d'expiration et celle-ci doit être respectée. Ne doit pas être utilisé si le réactif a expiré.

-Pendant l'utilisation, assurez-vous que le réactif ne contient pas de particules solides, car c'est un signe de détérioration.

-Garder entre 2 et 8 ° C

-Ne pas congeler, cet acte endommage irrémédiablement le réactif.

-Effectuez toujours le test avec les contrôles négatifs et positifs.

-La technique tolère des échantillons de sérum avec un certain degré de lipémie et d'hémolyse, cependant il n'est pas recommandé d'utiliser des sérums exagérément lipémiques et hémolysés, les deux conditions altérant les résultats du test.

-Amenez toujours les réactifs à température ambiante avant de commencer l'analyse.

-Ne pas interpréter les réactions qui prennent plus de temps que le temps recommandé, car cela génère le rapport de faux positifs, car après un certain temps, le réactif précipite, simulant une réaction positive.

-La technique est 100% sensible et a une spécificité de 98%.

-Après une semi-quantification de 1000 UI / ml il y a la possibilité d'observer un effet prozone (faux négatif dû à un excès d'anticorps par rapport à la quantité d'antigènes).

Références

1. Rubio M, Barrio B et Díaz R. Valeur des tests de Rosa de Bengal, de Coombs et de contre-immunoélectrophorèse pour diagnostiquer les cas de brucellose humaine dans lesquels l'agglutination sérique est négative. Département de microbiologie. Service de microbiologie clinique. Clinique universitaire. Université de Navarre. 406-407. Disponible à: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
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