MÉDIUM STUART: FOND DE TEINT, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le milieu Stuart est une gélose semi-solide ou un bouillon sans nutriments, utilisé pour le transport d'échantillons biologiques. Son but est de maintenir viables les souches présentes dans l'échantillon pendant un certain temps, mais sans augmenter la population microbienne.

Il a été créé par Moffet, Young et Stuart en 1948, puis modifié par Toshach et Patsula. Il est composé de glycérophosphate de sodium, de thioglycolate de sodium, de chlorure de calcium et d'agar-agar. Ce dernier est présent dans le milieu semi-solide et absent dans le liquide. Certains laboratoires y ajoutent du bleu de méthylène.

Culturette avec transport Stuart. Source: Par: CDC / Dr. Gilda Jones, avec l'aimable autorisation de: Public Health Image Library

Ils sont généralement utilisés lorsqu'il n'est pas possible de semer l'échantillon immédiatement. Dans ce cas, l'échantillon est placé dans le milieu de transport, tandis qu'il est transféré au laboratoire qui traitera la culture.

De cette manière, il est garanti que les microorganismes présents restent vivants jusqu'à ce qu'ils soient inoculés dans les milieux de culture correspondants.

Initialement, son utilisation était destinée au transport d'échantillons urétraux ou vaginaux où la présence de Neisseria gonorrhoeae était suspectée. Plus tard, ils ont réalisé que son utilité pouvait être plus large.

Le milieu Stuart s'est avéré très efficace dans la préservation des microorganismes labiles et exigeants tels que Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis, entre autres. En plus d'autres micro-organismes non gênants tels que les entérobactéries.

Le milieu Stuart empêche essentiellement la dessiccation de l'échantillon, maintient l'équilibre osmotique et préserve les micro-organismes à un pH idéal. D'un autre côté, stratégiquement ce milieu ne contient pas de nutriments, empêchant ainsi les micro-organismes de se multiplier.

Sur le marché, il existe des dispositifs spéciaux de transport d'échantillons contenant ce moyen de transport ou d'autres, appelés culturette. Ils peuvent également être préparés en laboratoire.

Base

L'objectif du mode de transport Stuart est de maintenir les échantillons au plus près de leur état d'origine jusqu'à ce qu'ils soient traités.

Le glycérophosphate de sodium et le chlorure de calcium sont un système tampon qui fonctionne en maintenant le pH et l'osmolarité.

Pendant ce temps, le thioglycollate de sodium agit comme un réducteur et dans le cas de la gélose contenant, il lui donne une consistance semi-solide, pour retarder l'oxygénation du milieu. Enfin, le bleu de méthylène est un indicateur d'oxydation, c'est-à-dire qu'il détecte la présence d'oxygène.

Le milieu semi-solide avec indicateur redox est idéal pour le transport d'échantillons où la présence de bactéries anaérobies est suspectée.

Caractéristiques du moyen de transport

Le support Stuart, comme tout moyen de transport, répond à certaines caractéristiques, dont:

-Maintient les souches microbiennes viables présentes sans se multiplier.

-Ne contient pas de nutriments; Ses composés visent à maintenir l'échantillon hydraté, dans des conditions de pH et d'osmolarité adéquates.

-Inhibe l'autolysat de certains micro-organismes délicats, tels que le pneumocoque.

-Son utilisation est temporaire, elle ne doit pas être prolongée trop longtemps.

préparation

Milieu Stuart semi-solide avec indicateur redox

Préparation à domicile

Ingrédients

Glycérophosphate de sodium 10 gr

Thioglycollate de sodium 1.0 gr

Chlorure de calcium 0,1 gr

Bleu de méthylène 0,002 gr

Agar-agar 3 gr

Eau distillée 1 L

Mélanger les composants et chauffer jusqu'à dissolution complète. Verser dans des tubes ou des écouvillons spéciaux. Ils sont introduits dans l'autoclave et stérilisés à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser refroidir les tubes en position verticale (en forme de bloc). Conserver à température ambiante.

Préparation avec milieu commercial

Peser 14,1 g du milieu dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer en agitant fréquemment jusqu'à dissolution complète, il peut être bouilli. Le reste de la procédure comme déjà décrit.

Le milieu déshydraté est de couleur crème et préparé doit être bleu sur sa surface. Cela est dû à la présence de bleu de méthylène.

Le pH du milieu doit être ajusté à 7,4 ± 0,2

Milieu Stuart modifié liquide (fait maison)

Ingrédients

Glycérophosphate de sodium 10 gr

Thioglycollate de sodium 1 gr

Chlorure de calcium dihydraté 0,1 gr

Eau distillée 1000 ml

Il contient les mêmes ingrédients que le semi-solide, mais il ne contient ni agar, ni bleu de méthylène. Dans ce cas, les composants sont mélangés sans chauffage et 0,5 ml est distribué dans des tubes de 16 x 125 mm avec des bouchons à vis.

Il est stérilisé en autoclave à 121 ° C pendant 10 minutes. Pour l'échantillonnage, des écouvillons en dacron doivent être utilisés si l'échantillon est destiné à la PCR ou à la rayonne s'il est destiné à la culture.

Les tubes sont conservés à température ambiante.

Applications

Il existe dans le commerce des dispositifs spéciaux de transport d'échantillons appelés culturette; Cet appareil est un tube allongé et mince qui a un écouvillon à l'intérieur et à l'extrémité il y a un segment qui contient le milieu Stuart semi-solide ou liquide.

L'appareil est ouvert et l'échantillon est prélevé avec l'écouvillon. Il est ensuite réintroduit dans le tube jusqu'à ce que la pointe de l'écouvillon soit insérée dans le milieu de transport semi-solide; Certains apportent une éponge en polyuréthane imprégnée du milieu liquide Stuart, avec laquelle l'échantillon est conservé lorsqu'il est maintenu humide.

Dans le cas où la présence de micro-organismes délicats est suspectée, des cotons-tiges avec du charbon de bois doivent être utilisés pour prélever l'échantillon.

Les échantillons qui peuvent être prélevés avec des écouvillons ou des écouvillons et transférés dans ce milieu sont des exsudats pharyngés, des écouvillons rectaux et diverses sécrétions, notamment: vaginal, urétral, plaie, oculaire, oreille et abcès.

Lors du transfert de l'échantillon dans le milieu de transport vers le laboratoire, il faut éviter de soumettre le milieu à des conditions environnementales extrêmes (trop froid ou trop chaud). Les changements brusques de pression atmosphérique doivent également être évités.

Le temps pendant lequel le milieu est capable de maintenir un microorganisme viable dépendra de la souche en question. Par exemple, pour les microorganismes du genre Neisserias et Haemophilus, ils peuvent rester viables jusqu'à 24 heures, mais des souches telles que Salmonella ou Shigella peuvent durer des jours, voire des semaines.

Si l'on estime que le traitement de l'échantillon peut prendre plus de 4 jours, il est préférable de congeler l'échantillon à -70 ° C.

Identification de l'échantillon dans les moyens de transport

Le moyen de transport préparé ou la culturette commerciale doit porter une étiquette sur laquelle seront apposées les informations suivantes:

Prénom et nom du patient: évite la confusion des échantillons.

Numéro d'identification: il est pratique de conserver une commande au travail.

Source de prélèvement des échantillons: aide le bactériologiste à choisir les milieux de culture appropriés.

Médecin traitant: Parfois, il est nécessaire pour d'éventuelles consultations.

Date et heure du prélèvement de l'échantillon: il est nécessaire pour l'acceptation ou le rejet de l'échantillon en fonction du temps écoulé entre le prélèvement de l'échantillon et la réception au laboratoire.

D'autres informations qu'il serait très utile de joindre sont:

Le diagnostic présomptif: guide l'ajout de milieux de culture spéciaux en fonction du diagnostic suspecté.

Traitement antibiotique: il est utile d'être annexé à l'antibiogramme.

Toutes ces informations sont vitales pour garantir un traitement correct des échantillons.

Contrôle de qualité

Pour évaluer les performances du milieu Stuart, des souches connues peuvent être inoculées et conservées à 25 ° C, telles que: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

Dans tous les cas, on attend de récupérer le microorganisme en question, conservé pendant 24 heures.

D'autre part, d'autres souches peuvent être utilisées telles que: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 et Escherichia coli ATCC 11775.

Dans tous les cas, une récupération abondante est attendue jusqu'à 96 heures.

Limites

Certaines études assurent que le glycérophosphate présent dans le milieu Stuart peut être métabolisé par certains coliformes, parmi d'autres bactéries à Gram négatif, et donc se multiplier dans ce milieu.

Ce risque augmente plus le traitement de l'échantillon est retardé. De même, l'exposition du milieu Stuart à des températures élevées pendant le transport influence cela.

Références

1. "Moyen de transport (microbiologie)." Wikipedia, l'encyclopédie libre. 13 avril 2018, 10:36 UTC. 1er avril 2019. Disponible sur: es.wikipedia.org
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