BIURET: JUSTIFICATION, RÉACTIFS, MODE OPÉRATOIRE, UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2024

Le biuret est un réactif utilisé pour la détermination des protéines à chaîne longue et à chaîne courte. Il est particulièrement utilisé dans le domaine de la chimie analytique et des analyses d'urine pour étudier la concentration de protéines totales dans le sérum, le plasma et l'urine.

Les valeurs protéiques peuvent être augmentées ou diminuées dans certaines pathologies. Les symptômes d'hypoprotéinémie surviennent généralement chez les patients atteints d'insuffisance rénale, chez les patients souffrant de malnutrition et chez les patients souffrant d'infections chroniques.

Structure chimique du complexe formé lors de la réaction Biuret Test positif au Biuret. Source: Yikrazuul / flickr

Alors que l'hyperprotéinémie est observée dans des pathologies telles que le myélome multiple, le lupus érythémateux systémique, l'endocardite bactérienne, la méningite bactérienne, la macroglobulinémie de Waldenström, entre autres.

En revanche, la présence de protéines dans l'urine est due à la filtration de l'albumine par le rein. C'est un comportement pathologique qui doit être étudié.

En ce sens, le Biuret est très utile, car il permet de quantifier la présence de protéines dans le sérum, le plasma, l'urine, parmi de nombreux autres échantillons.

Même le Biuret peut être utilisé pour étudier la présence et la concentration de protéines dans des échantillons mal explorés ou des échantillons de composition inconnue. Par conséquent, il est largement utilisé dans le domaine de la recherche.

Le test Biuret est basé sur la détection de liaisons peptidiques. Le test a lieu en milieu alcalin. L'échantillon doit contenir au moins deux liaisons peptidiques pour qu'un complexe violet-violet se forme. Le complexe est formé par l'union des liaisons et de l'ion cuivre.

Base

Le réactif de Biuret est composé d'hydroxyde de potassium, de sulfate cuivrique et de tartrate de sodium et de potassium. L'hydroxyde de sodium est utilisé pour alcaliniser le milieu, car cette condition est essentielle pour que la réaction ait lieu.

La substance qui réagit avec les protéines est le sulfate de cuivre, tandis que le tartrate de sodium a pour fonction de ne pas permettre la formation d'hydroxyde de cuivre, qui a tendance à précipiter et interfère avec la réaction.

Si des substances avec des liaisons peptidiques (polypeptides ou protéines) sont trouvées dans l'échantillon, le test sera positif.

Une réaction est interprétée comme positive lorsque la solution devient violette. La couleur est produite par la formation d'un complexe entre au moins deux liaisons peptidiques qui ont le groupe CO-NH et les cations cuivriques.

Le complexe violet peut être formé de deux manières: l'une est par la perte de protons des groupes amide qui se lient au métal (dépronotation), et l'autre par l'union des électrons d'oxygène et d'azote qui sont libres et se lient avec du cuivre.

Cette réaction peut varier en intensité et en couleur selon le type de protéine.

Le test peut être effectué qualitativement ou quantitativement. Dans la forme qualitative, il est signalé comme positif ou négatif. Alors que sous forme quantitative, la concentration peut être mesurée par la méthode spectrophotométrique.

La réaction est lue entre 540-560 nm. L'intensité de la couleur est directement proportionnelle à la concentration de liaisons peptidiques dans l'échantillon.

Réactifs

-20% d'hydroxyde de sodium (NaOH)

-Sulfate de cuivre pentahydraté 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Mélange de tartrate de sodium et de potassium tétrahydraté (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Stabilité des réactifs Biuret

-Il doit être conservé au réfrigérateur.

Processus

Technique

-Placer 100 µl de l'échantillon ou du standard à analyser dans un tube à essai.

-Ajouter 2 ml d'hydroxyde de sodium.

-Mélangez très bien.

-Ajouter 5 ml de réactif Biuret.

-Mélanger et laisser reposer 25 minutes à température ambiante, couvrir et protéger de la lumière.

-Observer la formation ou non de la couleur et mesurer par spectrophotométrie.

Courbe d'étalonnage

L'albumine de sérum bovin peut être utilisée comme étalon pour réaliser la courbe d'étalonnage. Différentes concentrations en sont préparées. Par exemple 25, 50, 75, 100, 125 et 150%.

La réaction est mise en place avec toutes ces concentrations connues et l'absorbance est lue à une longueur d'onde de 540 nm. Avec les données des concentrations connues et les lectures d'absorbance, la courbe d'étalonnage est établie.

Dans chaque détermination ou lot d'échantillons traités, il est recommandé de monter un étalon. L'albumine de sérum bovin 0,1-2 mg / ml peut être utilisée comme standard d'étalonnage.

Les mesures sont effectuées sur un spectrophotomètre à 540 nm.

La linéarité est satisfaite jusqu'à une concentration de 12 g / dl.

Ingérence

Substances qui interfèrent avec le test Biuret

Bien que ce ne soit pas très fréquent, il faut noter que certaines substances peuvent interférer lors de l'exécution de ce test. Par exemple, la présence d'ammoniac peut inhiber la formation de couleur.

De même, d'autres substances pourraient absorber à la même longueur d'onde, comme certains pigments.

D'autre part, des interférences peuvent être générées lorsqu'une substance autre que la liaison peptidique forme un complexe avec le sel cuivrique. Exemple: certains glucides et certains lipides.

Dans le cas où l'échantillon à analyser présente un certain type de précipité, il doit être filtré ou centrifugé avant de monter le test.

Substances qui n'interfèrent pas avec le test Biuret

Le test n'est pas affecté par la présence de:

-Bilirubine jusqu'à une concentration de 20 mg / dl.

-Hémoglobine jusqu'à une concentration de 750 mg / dl.

-Dextran jusqu'à une concentration de 30 g / L.

-Triglycérides jusqu'à une concentration de 4000 mg / dl.

avantage

-C'est une méthode simple à exécuter.

-C'est un test économique.

-Il a une spécificité élevée pour les protéines.

-Peu d'interférence.

Désavantages

Il a une faible sensibilité pour détecter de faibles quantités de protéines. Les travaux menés par Fuentes et al.affirment que la méthode d'essai Biuret a une limite de détection de 1 mg / ml de protéine et une limite de quantification de 3 mg / ml.

Cependant, d'autres recherches menées à l'Université d'Amazonie rapportent des valeurs bien inférieures. La limite de détection rapportée par l'étude est de 0,020 mg / ml et la limite de quantification est de 1,33 mg / ml.

Applications

Le réactif ou test Biuret est utilisé pour la détermination des protéines dans les échantillons cliniques et non cliniques dans les laboratoires de routine et de recherche.

Pathologies qui se produisent avec une augmentation ou une diminution de

Dans de nombreuses pathologies, il est important de déterminer la concentration de protéines totales dans les échantillons cliniques, qui peut être élevée ou diminuée.

Ils sont élevés en:

-Myélome multiple, -Le lupus érythémateux disséminé, -Endocardite bactérienne, -Méningite bactérienne, Macroglobulinémie de Waldenström, entre autres.

Il est diminué en:

-Insuffisance rénale, -Personnes souffrant de malnutrition sévère, -Patients atteints d'infections chroniques, entre autres.

Échantillons cliniques

Les échantillons cliniques les plus courants sont le sérum, le plasma et l'urine. La valeur normale des protéines dans le sérum ou le plasma est de 6,0 à 8,8 gr / dl.

La concentration de protéines dans l'urine chez l'adulte ne dépasse pas le chiffre de 150 mg / 24 heures.

Valeur normale du rapport protéines urinaires / créatinine urinaire

Nourrissons: <0,50 mg

Enfants de 2 ans et plus: indice: 0,20 mg

Adultes: <0,2 mg

Échantillons non cliniques

La réaction Biuret peut être utilisée pour de nombreux types d'échantillons non cliniques, tels que les produits laitiers, les antivenins ou toute substance inconnue pour laquelle vous souhaitez rechercher la présence de protéines.

Références

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Caractérisation physico-chimique et teneur en protéines d'extraits fluides de l'huître de mangrove (Crassostrearizophorae). Journal cubain de chimie, 26 (1), 66-74. Extrait le 26 juin 2019 de http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Caractérisation fonctionnelle de l'amande des graines de mangue (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. «Biuret». Wikipedia, l'encyclopédie libre. 19 juin 2019, 16:37 UTC. 26 juin 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Standardisation de la méthode Biuret pour quantifier les protéines totales dans le sérum antibotrope polyvalent produit au Centre national INS pour les produits biologiques. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Disponible sur: repositorio.ins.gob.pe
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