GÉLOSE XLD: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose XLD ou gélose désoxycholate xylose lysine est une culture solide sélective et différentielle pour l'isolement des entéropathogènes. Taylor a conçu la formule de gélose XL (Xylose, Lysine) afin d'améliorer l'isolement du genre Shigella.

Il a observé que ce genre était inhibé dans la plupart des milieux destinés à l'isolement des entéropathogènes. Par la suite, du désoxycholate de sodium, du thiosulfate de sodium et du citrate d'ammonium ferrique ont été ajoutés pour augmenter sa sélectivité. Cette formule s'est avérée utile à la fois pour l'isolement de Shigella et de Salmonella.

Différences des colonies de Shigella, Salmonella et coliformes sur gélose XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Sources: A. Par: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, avec l'aimable autorisation de: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Par: CDC / Dr. JJ farmer, avec l'aimable autorisation de: Public Health Image Library

La gélose XLD est composée d'extrait de levure, de désoxycholate de sodium, de xylose, de lysine, de lactose, de saccharose, de thiosulfate de sodium, de citrate d'ammonium ferrique, de chlorure de sodium, de rouge de phénol et d'agar. Le duo de gélose XLD et d'agar SS est utilisé dans la plupart des laboratoires de bactériologie pour étudier les échantillons fécaux de Shigella et Salmonella.

D'autres laboratoires préfèrent la combinaison de CHROMagar Salmonella et de la gélose XLD, entre autres options disponibles. Ces duos peuvent être préparés dans des boîtes de Pétri doubles. D'un côté, ils placent de la gélose XLD et de l'autre côté du milieu choisi.

Base

-Puissance nutritive

La gélose XLD contient de l'extrait de levure, qui sert de source de nutriments pour les micro-organismes qui poussent sur cette gélose. De plus, la présence de glucides (xylose, saccharose et lactose) fournit de l'énergie aux bactéries qui peuvent les fermenter.

-Sélectivité du milieu

En tant que substance inhibitrice, il présente du désoxycholate de sodium; Cela empêche la croissance des bactéries Gram positives, donnant au milieu un caractère sélectif.

-Puissance différentielle

Colonies typiques de Shigella

Comme déjà mentionné, la gélose XLD contient du xylose; Ce glucide est fermenté par toutes les bactéries qui poussent dans ce milieu à l'exception du genre Shigella.

C'est l'une des caractéristiques qui lui confère son caractère différentiel, puisque les colonies de Shigella se distinguent des autres en développant des colonies rouges, tandis que les autres bactéries produisent des colonies jaunes.

Colonies typiques de Salmonella

Le genre Salmonella fermente également le xylose, générant initialement des colonies jaunes. Cependant, après avoir épuisé le xylose glucidique, il attaque la lysine pour son enzyme lysine décarboxylase. La décarboxylation de la lysine génère des alcalis qui transforment la couleur de la colonie et du milieu environnant en rouge d'origine.

Ce comportement n'est réalisé que par Salmonella, car les coliformes qui décarboxylent la lysine ne peuvent pas alcaliniser le milieu. En effet, les coliformes fermentent également le lactose et le saccharose présents; par conséquent, la production d'acides est très élevée, laissant la colonie jaune dans ces bactéries.

Il est à noter que le genre Salmonella ne fermente ni le saccharose ni le lactose.

Production de H

La gélose XLD permet également la détection des espèces de Salmonella productrices de H ₂ S; Pour cela, il s'appuie sur la source de soufre représentée par le thiosulfate de sodium et un révélateur de réaction, qui est le citrate d'ammonium ferrique.

Ce dernier réagit avec H ₂ S (gaz incolore) et forme un précipité noir insoluble visible de sulfate de fer. En ce sens, les caractéristiques des colonies de salmonelles seront rouges avec un centre noir.

Il convient de noter que pour que la réaction de formation de H ₂ S se produise, un pH alcalin est nécessaire. C'est pourquoi d'autres entérobactéries qui forment H ₂ S ne le peuvent pas ou le font mal dans cet environnement, car la forte acidité produite par la fermentation des glucides présents inhibe ou gêne la réaction.

-Chlorure de sodium, gélose et rouge de phénol

Enfin, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique; l'agar est l'agent de solidification et le rouge de phénol détecte les changements de pH, changeant la couleur des colonies et du milieu.

préparation

Peser 55 g de milieu XLD déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Chauffer et remuer le mélange jusqu'à ce qu'il atteigne le point d'ébullition. Ne pas surchauffer, car la chaleur endommage le milieu et crée un précipité qui modifie la morphologie des colonies typiques.

Ce milieu ne doit pas être autoclavé. Lors de sa dissolution, il doit être passé dans un bain-marie à 50 ° C. Lors du refroidissement, il doit être servi directement sur des boîtes de Pétri stériles. Ils peuvent être versés dans des assiettes simples ou doubles. Ils sont laissés à se solidifier et sont conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation.

Revenu avant utilisation. Comme il s'agit d'un milieu non stérile, il est recommandé de le préparer près de la date d'utilisation.

Le pH final du milieu doit être de 7,4 ± 0,2. La couleur du milieu préparé est rouge orangé, translucide, sans précipité.

Si vous avez une gélose à base de xylose lysine (XL), vous pouvez ajouter du désoxycholate de sodium, du thiosulfate de sodium et du citrate de fer-ammonium. De cette manière, la formule de gélose XLD est obtenue.

Applications

La gélose XLD est utilisée pour la récupération des entéropathogènes, principalement du genre Shigella et secondairement du genre Salmonella. Il est utile pour évaluer les échantillons de selles, d'eau et d'aliments.

Types d'échantillons

Les matières fécales

Les échantillons de selles peuvent être semés directement sur de la gélose XLD, faisant une bonne distribution du matériel pour obtenir des colonies isolées.

Pour améliorer la récupération de Salmonella, la gélose XLD peut être striée du milieu d'enrichissement Salmonella.

Aliments

Dans le cas des aliments, des bouillons d'enrichissement pour Salmonella et Shigella peuvent être utilisés. Pour Salmonella, vous pouvez utiliser entre autres un bouillon de sélénite cystine, un bouillon tétrathionate vert vif.

Dans le cas de Shigella, il peut être enrichi en bouillon de Shigella avec 0,5 µ / ml de novobiocine, incubé à 42 ° ± 1 ° C pendant 16-20 heures.

Eau

Dans l'analyse de l'eau, la technique de filtration sur membrane et l'utilisation de gélose XLD sont recommandées, entre autres.

Conditions de plantation et d'identification

Le milieu ensemencé est incubé en aérobiose à 35 ° C pendant 24 à 48 heures.

Les colonies typiques de chaque genre sont observées, les colonies suspectes doivent subir des tests biochimiques pour leur identification.

Contrôle de qualité

Pour évaluer le contrôle de la qualité du milieu, les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Le genre Salmonella se caractérise par la présentation de colonies rouges à centre noir ou de colonies complètement noires sur ce milieu. Alors que, dans le genre Shigella, les colonies doivent être rouges, c'est-à-dire la couleur du milieu.

Dans le cas d'Escherichia coli, on s'attend à ce qu'il soit totalement ou partiellement inhibé; s'il grandit, les colonies sont jaunes. Pour Proteus mirabilis, une faible croissance est attendue avec des colonies roses avec ou sans centre noir. Finalement, le genre Klebsiella se développera sous forme de colonies jaunes.

Dernières pensées

La gélose XLD est largement utilisée dans les laboratoires de bactériologie pour sa haute efficacité pour la récupération de Shigella et a également une bonne récupération du genre Salmonella.

Rall et al. (2005) dans leurs travaux intitulés «Evaluation de trois bouillons d'enrichissement et de cinq milieux solides pour la détection de Salmonella chez la volaille» ont démontré celui des 3 milieux classiques testés (gélose vert clair, gélose SS et gélose XLD), La gélose XLD avait le meilleur taux de récupération.

Les pourcentages de récupération étaient les suivants: 13,8% pour la gélose vert clair, 27,6% pour le SS et 34,5% pour le XLD. La gélose Rambach avec 48% de récupération et CHROMagar avec 79,3% n'a été dépassée que par les milieux chromogènes.

Références

1. Maladies d'origine alimentaire. Shigellose. Disponible sur: anmat.gov.ar
2. «Gélose XLD». Wikipedia, l'encyclopédie libre. 9 févr.2019, 11:46 UTC. 10 avril 2019, 19:25 wikipedia.org
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4. Lab. Neogen. Gélose XLD. Disponible sur: foodsafety.neogen
5. Laboratoire Francisco Soria Melguizo. Gélose XLD. Disponible sur:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Évaluation de trois bouillons d'enrichissement et de cinq milieux de placage pour la détection de Salmonella chez la volaille. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Disponible sur: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.