- Base
- Approvisionnement en nutriments
- Puissance sélective
- Puissance différentielle
- Equilibre osmotique et agent solidifiant
- préparation
- Solution de tellurite de potassium à 1% p / v
- Milieu de base de gélose Vogel-Johnson
- Utilisation
- Contrôle de qualité
- Références
L' agar Vogel-Johnson est une culture sélective et différentielle en milieu solide, spécialement formulée pour l'isolement de Staphylococcus aureus. Ce milieu a été créé par Vogel et Johnson en 1960 à partir de la modification de la gélose tellurite glycine formulée en 1955 par Zebovitz, Evans et Niven.
La modification a consisté à augmenter la concentration de mannitol présent dans le milieu et à incorporer un indicateur de pH. La formule actuelle est composée de triptein, d'extrait de levure, de mannitol, de phosphate dipotassique, de chlorure de lithium, de glycine, de rouge de phénol, d'agar, de solution de tellurite de potassium à 1% et d'eau.
Source: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.
Il est à noter qu'il existe d'autres milieux qui, comme la gélose Vogel-Johnson, sont sélectifs pour l'isolement de S. aureus, comme la gélose au mannitol salé et la gélose Baird Parker. En ce sens, on pourrait dire que la base de la gélose Vogel-Johnson est un mélange entre la gélose salée au mannitol et la gélose Baird Parker.
Dans le premier, les colonies de S. aureus se distinguent en faisant fermenter le mannitol et en faisant passer l'indicateur de pH au jaune. D'autre part, dans le second, S. aureus se caractérise par la réduction de la tellurite en tellure et la formation de colonies grises à noires. Les deux propriétés sont observées dans la gélose Vogel-Johnson.
Ce milieu, comme ses homologues, est utile pour la détection de Staphylococcus aureus dans les échantillons alimentaires, les contrôles sanitaires des produits industriels et dans les échantillons cliniques.
Base
Approvisionnement en nutriments
Le milieu Vogel-Johnson contient de la tripteine et de l'extrait de levure; Les deux substances fournissent des acides aminés à longue chaîne qui servent de sources de carbone et d'azote nécessaires à la croissance bactérienne. Les bactéries capables de se développer dans ce milieu prendront les nutriments de ces substances.
Puissance sélective
La gélose Vogel-Johnson est capable d'inhiber la croissance des bactéries Gram négatives et même de certaines bactéries Gram positives, favorisant le développement de staphylocoques à coagulase positive. Les substances inhibitrices sont le tellurite de potassium, le chlorure de lithium et la glycine.
Puissance différentielle
Les substances qui composent ce milieu différentiel sont le mannitol et le tellurite de potassium. Le mannitol est un hydrate de carbone, et lorsqu'il est fermenté, des acides sont produits qui font passer le milieu du rouge au jaune, ce qui se produit grâce à la présence de l'indicateur de pH phénol rouge.
Alors que la tellurite incolore, lorsqu'elle est réduite en tellure métallique libre, prend une couleur gris foncé à noire.
Staphylococcus aureus fermente le mannitol et réduit la tellurite en tellure. Pour cette raison, les colonies typiques de S. aureus dans ce milieu sont grises ou noires entourées d'un milieu jaune.
Les bactéries qui poussent dans ce milieu et ne réduisent pas la tellurite ou fermentent le mannitol formeront des colonies transparentes entourées d'un milieu de couleur rouge, encore plus intense que la couleur d'origine, du fait de l'alcalinisation du milieu par l'utilisation de peptones.
D'autre part, les bactéries qui réduisent la tellurite mais ne fermentent pas le mannitol se développeront sous forme de colonies grises ou noires entourées d'un milieu rouge foncé.
Si le milieu était préparé sans addition de tellurite de potassium, les colonies de S. aureus se développeraient sous forme de colonies jaunes, entourées d'un milieu jaune, comme dans la gélose au mannitol salée.
Equilibre osmotique et agent solidifiant
Le phosphate dipotassique maintient l'équilibre osmotique du milieu et ajuste le pH à la neutralité 7,2. Alors que l'agar donne la consistance solide au milieu de culture.
préparation
Solution de tellurite de potassium à 1% p / v
Cette solution n'est pas incluse dans le milieu déshydraté, car elle ne peut pas être stérilisée en autoclave. Pour cette raison, il est préparé séparément et ajouté au milieu déjà stérilisé.
Certaines maisons commerciales vendent la solution de tellurite de potassium à 1% prête à l'emploi. Si vous souhaitez vous préparer en laboratoire, procédez comme suit:
Pesez 1,0 g de tellurite de potassium et mesurez 100 ml d'eau distillée. Dissoudre le tellurite de potassium dans une partie d'eau puis compléter la quantité d'eau jusqu'à atteindre 100 ml. Stérilisez la solution par la méthode de filtration.
Milieu de base de gélose Vogel-Johnson
Peser 60 gr de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange est chauffé à ébullition pour faciliter la dissolution complète. Pendant le processus de dissolution, le milieu est fréquemment agité.
Stériliser en autoclave à 15 livres de pression et 121 ° C pendant 15 minutes. Retirer de l'autoclave et laisser reposer jusqu'à ce que le milieu atteigne une température d'environ 45 à 50 ° C. Ajouter 20 ml de la solution de tellurite de potassium à 1% préalablement préparée.
Mélanger et verser dans des boîtes de Pétri stériles. Laisser solidifier et commander à l'envers sur des supports d'assiettes pour conserver plus tard au réfrigérateur jusqu'à utilisation.
Le pH final du milieu préparé doit être de 7,2 ± 0,2.
Avant de semer un échantillon, attendez que la plaque atteigne la température ambiante.
La couleur du milieu préparé est rouge.
Utilisation
Bien qu'il puisse être utilisé pour l'isolement de S. aureus dans tout type d'échantillons, il est principalement utilisé pour l'analyse microbiologique de produits pharmaceutiques, cosmétiques et alimentaires.
Il est recommandé que l'inoculum soit dense. L'ensemencement peut se faire par rainurage avec un manche en platine ou par surface avec une spatule Drigalski.
Les plaques sont incubées à 35-37 ° C pendant 24 à 48 heures d'aérobiose.
Contrôle de qualité
Les souches témoins suivantes peuvent être utilisées pour effectuer le contrôle qualité sur le milieu Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071.
Le résultat attendu est le suivant: pour les souches de S. aureus, la croissance est satisfaisante avec des colonies noires entourées de milieu jaune. Pour S. epidermidis, croissance régulière avec des colonies translucides ou noires entourées de milieu rouge.
De même, une inhibition totale est attendue pour E. coli et une inhibition partielle ou totale pour Proteus mirabilis; s'il pousse, il le fera avec parcimonie et les colonies seront noires entourées d'une couleur rouge.
Références
- Laboratoires BD. VJ (Vogel et Johnson Agar). 2006. Disponible sur: bd.com
- Laboratoires Britannia. Agar Vogel-Johnson. 2015. Disponible sur: britanialab.com
- Laboratoires Britannia. Tellurite de potassium. 2015. Disponible sur: britania.com
- Laboratoire Himedia. Milieu de gélose Vogel-Johnson. 2018. Disponible sur: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Base d'agar de Vogel-Johnson. Manuel de microbiologie Merck. 12e édition, pp 502-503. Disponible sur: Utilisateurs / Équipe / Téléchargements
- Contributeurs de Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia une encyclopédie gratuite, disponible sur: wikipedia.org.
- Covenin standard vénézuélien 1292-89. (1989). Nourriture. Isolement et dénombrement de Staphylococcus aureus. Disponible sur: sencamer.gob.ve