GÉLOSE VERT VIF: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

L' agar vert brillant est un milieu de culture solide avec un haut degré de sélectivité. Il est utilisé exclusivement pour l'isolement des souches du genre Salmonella, cependant il existe quelques exceptions, comme les espèces typhi et paratyphi qui ne poussent pas sur ce milieu.

La recherche du genre Salmonella est fréquente dans les échantillons de selles, d'eau ou d'aliments. En ce sens, ce support peut être très utile. Cette gélose a été créée en 1925 par Kristensen, Lester et Jurgens, plus tard elle a été modifiée par Kauffmann.

Agar vert vif. Colonies en fermentation et non en fermentation respectivement. Source: MJ Richardson / Exposition Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Il est composé de pluripeptones de digestion peptique de tissu animal et de digestion pancréatique de caséine, il contient également de l'extrait de levure, du chlorure de sodium, du lactose, du saccharose, du rouge phénol, du vert vif et de l'agar-agar.

Il se caractérise par être un environnement plutôt inhospitalier pour la plupart des bactéries, favorisant la croissance de Salmonella, cependant certains coliformes sont capables d'y subsister, se développant faiblement.

Il est important de noter que le genre Shigella ne pousse pas sur ce milieu, pas plus que Salmonella typhimurium ou Salmonella paratyphi. Par conséquent, si vous souhaitez isoler ces micro-organismes, d'autres milieux doivent être utilisés, tels que la gélose XLD, entre autres.

Base

Agar vert vif

Chacun des composants qui composent le milieu remplit une fonction spécifique qui détermine les caractéristiques et les propriétés de la gélose.

Les pluripeptones et l'extrait de levure sont la source de nutriments à partir desquels les micro-organismes prennent l'azote et les minéraux nécessaires à leur développement. Le lactose et le saccharose sont des sources d'énergie pour les micro-organismes capables de les fermenter.

Le vert clair est la substance inhibitrice qui empêche la croissance des bactéries Gram positives et d'un grand nombre de microorganismes Gram négatifs.

Le chlorure de sodium confère une stabilité osmotique au milieu. Bien que le rouge de phénol soit l'indicateur de pH, il vire à la couleur lors de la détection de la production d'acide à partir de la fermentation des glucides.

Des colonies non fermentantes de lactose et de saccharose poussent sur ce milieu de couleur blanche rosâtre ou transparente, sur fond rouge. Par exemple, les bactéries du genre Salmonella.

Tandis que les bactéries fermentant le lactose ou le saccharose capables de se développer sur ce milieu développent des colonies jaune-vert ou jaune-vert sur fond jaune verdâtre. Par exemple, Escherichia coli et Klebsiella pneumoniae.

Variantes d'agar vert vif (BGA)

Il existe d'autres variantes d'agar vert clair; Gélose Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) et Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Gélose au glucose vert vif Novobiocin

Contient de la gélose trypticase soja, du citrate d'ammonium ferrique, du thiosulfate de sodium pentahydraté, du rouge de phénol, du glucose, du vert vif, de la novobiocine et de l'eau distillée.

Il est utilisé pour l'isolement des colonies de Salmonella à partir d'échantillons de selles.

Dans ce cas, le vert vif et la novobiocine sont les substances inhibitrices qui empêchent la croissance des bactéries Gram positives et de certains microorganismes Gram négatifs.

Le thiosulfate de sodium est la source de sulfure et le citrate ferrique est la source de fer, tous deux nécessaires pour révéler la production de sulfure d'hydrogène par la formation d'un précipité de sulfure ferrique noir.

Le glucose est le glucide fermentescible et le rouge de phénol est l'indicateur de pH.

Sur ce milieu, les colonies de Salmonella se développent de grande taille avec un centre noir entouré d'un halo rougeâtre et suivi d'une zone bien visible. Certaines souches de Citrobacter freundii produisent des colonies identiques à celle de Salmonella.

Gélose Novobiocin Bright Green Glycérol Lactose (NBGL)

Ce milieu contient de la gélose trypticase soja, du citrate d'ammonium ferrique, du thiosulfate de sodium, du lactose, du glycérol, du vert vif, de la novobiocine et de l'eau distillée.

La différence entre ce milieu et le précédent est que le glucose est remplacé par du lactose et du glycérol et que le rouge de phénol n'est pas utilisé.

Le milieu est également utilisé pour isoler les espèces de Salmonella, les colonies développent du noir, en raison de la production de sulfure d'hydrogène.

Seules les colonies qui ne produisent pas d'acide à partir du glycérol ou du lactose atteignent une production suffisante de H ₂ S, car un pH bas interfère avec la formation de H ₂ S. Il en résulte des colonies incolores pour la plupart des espèces de Proteus et Citrobacter.

préparation

- Peser 58 grammes du milieu déshydraté du commerce. Ajoutez-le à un litre d'eau redistillée. Mélanger, laisser reposer quelques minutes et placer le mélange sur une source de chaleur jusqu'à dissolution complète.

-Autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, ne pas dépasser le temps de stérilisation.

-Laisser reposer et servir chaud dans des boîtes de Pétri stériles. Le pH final doit être de 6,9 ​​± 0,2.

-Laisser solidifier et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Avant de semer, les plaques doivent prendre la température ambiante.

-Le milieu en poudre est de couleur verte et préparé prend une couleur brun orangé ou vert rougeâtre, en fonction du pH et de l'entreprise commerciale. Une couleur très brune indique que la gélose a été surchauffée.

-Une fois la gélose solidifiée, il n'est pas recommandé de refondre, car le milieu se détériore.

Utilisations / applications

Ce milieu est utilisé pour rechercher des souches du genre Salmonella à partir d'échantillons de selles et de produits laitiers, entre autres.

Comme il s'agit d'un environnement plutôt inhospitalier, il est conseillé de semer un inoculum abondant si l'échantillon direct est utilisé. Sinon, un pré-enrichissement et un enrichissement des spécimens doivent être effectués avant le semis dans ce milieu.

Certaines souches de Salmonella étant inhibées ou se développant difficilement, il est conseillé d'accompagner ce milieu avec d'autres géloses sélectives pour Salmonella.

Chaque colonie présentant une caractéristique typique de Salmonella doit être soumise à des tests biochimiques pour son identification définitive.

Contrôle de qualité

Pour tester les bonnes performances du milieu gélose vert clair, des souches ATCC peuvent être utilisées pour observer leur développement sur celui-ci.

Les souches les plus fréquemment utilisées pour le contrôle qualité sont: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Les 3 premiers doivent donner des colonies blanches rosées ou transparentes sur fond rouge. Salmonella avec un bon développement et Proteus avec une croissance faible ou régulière.

Pour Klebsiella et Escherichia, des colonies jaune-vert avec un fond jaune sont attendues et dans le cas de Shigella et Staphylococcus, elles doivent être inhibées.

Le milieu déshydraté doit être conservé à température ambiante, dans un endroit sec, car le milieu est très hygroscopique.

Références

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Laboratoire Britannia. Agar vert brillant. 2015.
3. Laboratoire BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. (5e éd.). Argentine, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA