GÉLOSE TRYPTICASÉINE SOJA: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

L' agar de soja tryptone ou Trypticase Soy Agar est un milieu de culture solide et nutritionnel non sélectif. Il est désigné par les lettres TSA pour son acronyme en anglais Trypticase Soy Agar. Il est composé de triptein, de peptone de soja, de chlorure de sodium et d'agar-agar.

En raison de son pouvoir nutritionnel élevé, il est idéal pour la culture de micro-organismes modérément exigeants et non exigeants. Le milieu sans suppléments supplémentaires n'est pas recommandé pour les cultures primaires, mais il est très utile pour la sous-culture de souches pures et les maintenir viables, entre autres utilisations.

Quartiers de gélose trypticaséine soja dans des tubes avec bouchons en bakélite. Source: Photographie prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil.

En outre, cette gélose sert de base pour la préparation de milieux enrichis tels que la gélose au sang, en particulier lorsqu'il est nécessaire d'observer les schémas d'hémolyse et de monter les taxons optoquine et bacitracine, nécessaires dans le diagnostic de Streptococcus pneumoniae et Streptococcus pyogenes respectivement.

D'autre part, lorsqu'il est combiné avec des antibiotiques, il est utile d'isoler des microorganismes anaérobies facultatifs et stricts cliniquement importants à partir d'échantillons à flore mixte.

Enfin, la composition de la gélose trypticaséine soja et ses performances répondent aux exigences établies par les différentes pharmacopées (européenne, japonaise et nord-américaine).

Base

Pour le bon développement des bactéries, la présence de sources d'énergie est nécessaire, comme les acides aminés, les vitamines, les bases puriques et pyrimidiques.

En ce sens, la triptein et la peptone de soja fournissent ces nutriments aux microorganismes, permettant ainsi leur plein développement. Cependant, pour les bactéries exigeantes, il est nécessaire de compléter cette gélose avec du sang défibriné ou du sang réchauffé pour augmenter son enrichissement.

En revanche, si des antibiotiques sont ajoutés au milieu, celui-ci devient un milieu sélectif. 0,6% d'extrait de levure peut également être ajouté pour favoriser l'isolement des espèces du genre Listeria, tandis que l'ajout de tellurite de cystine et de sang d'agneau est idéal pour Corynebacterium diphteriae.

Enfin, le chlorure de sodium assure l'équilibre osmotique du milieu et la gélose donne la consistance solide.

préparation

Plaques de gélose trypticaséine soja

Pour préparer la gélose trypticaséine soja, 40 g du milieu commercial déshydraté doivent être pesés sur une balance numérique. Il est dissous dans un litre d'eau distillée contenu dans un ballon.

Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes, puis il est porté à une source de chaleur pour aider à dissoudre le milieu. Il doit être remué fréquemment et bouilli pendant 1 à 2 minutes. Par la suite, le milieu est stérilisé dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Laisser refroidir à 50 ° C et répartir dans des boîtes de Pétri stériles. Laisser solidifier, inverser, commander en plaqueros et conserver au réfrigérateur.

Le pH final du milieu doit être de 7,3 ± 0,2.

Il est à noter que la couleur du milieu de culture déshydraté est beige clair et doit être conservé entre 10 et 35 ° C, dans un endroit sec.

De son côté, la gélose préparée est de couleur ambre clair. Les assiettes préparées doivent être conservées au réfrigérateur (2-8 ° C) jusqu'à leur utilisation.

Les plaques doivent atteindre la température ambiante avant utilisation.

Plaques de gélose trypticaséine soja supplémentées en sang

La gélose au sang est préparée en ajoutant 5% de sang défibriné au moment du refroidissement de la gélose trypticaséine soja à 50 ° C. Le mélange est homogénéisé par rotation avec des mouvements doux.

Servir dans des boîtes de Pétri stériles. La couleur du milieu doit être rouge cerise.

Plaques de gélose trypticaséine soja supplémentées avec du sang réchauffé

Pour préparer la gélose au sang à base de TSA, procédez de la même manière que les procédures déjà décrites, mais en quittant l'autoclave, il est laissé au repos jusqu'à ce que la température du milieu soit approximativement comprise entre 56 et 70 ° C. À ce moment-là, le sang est placé et mélangé jusqu'à ce que le milieu vire au brun.

Servir dans des boîtes de Pétri stériles. La couleur du support est brun chocolat.

Quartiers de gélose trypticaséine soja

La procédure de préparation de la gélose est la même que celle décrite pour les plaques, à la différence qu'au lieu de servir le milieu sur des boîtes de Pétri, il est réparti entre 10 à 12 ml dans des tubes avec couvercle en bakélite avant stérilisation.

Ensuite, les tubes sont autoclavés à 121 ° C pendant 15 minutes. Quand ils partent, ils sont inclinés à l'aide d'un support et autorisés à se solidifier.

Les coins préparés sont semés par surface et servent à maintenir viables certains micro-organismes non exigeants pendant un temps spécifié.

Applications

La Trypticasein Soy Agar est utilisée dans les cas suivants:

-Comme base pour préparer la gélose au sang classique qui est utilisée en routine dans la plupart des laboratoires.

-L'isolement des bactéries exigeantes.

-Observation du schéma d'hémolyse.

-Exécution de tests diagnostiques.

-Comme base pour préparer une gélose au sang spéciale pour Corynebacterium diphteriae, avec de la tellurite de cystine et du sang d'agneau.

-Comme base pour préparer de la gélose au sang d'agneau, plus kanamycine-vancomycine pour la croissance des anaérobies, en particulier Bacteroides sp.

- Pour le maintien de souches non exigeantes (Bacterioteca).

- Comptage microbien aérobie dans l'étude de la limite microbienne d'échantillons d'eau, d'environnement, d'aliments et de cosmétiques.

Semé

Les échantillons peuvent être semés directement sur la surface de la Trypticasein Soy Agar additionnée de sang ou d'autres additifs. Il est semé d'épuisement.

Alors que les plaques de gélose trypticaséine soja sans additifs sont généralement utilisées pour repiquer des souches microbiennes (bactéries ou levures).

Contrôle de qualité

Contrôle de la stérilité

Pour vérifier la stérilité des différents milieux préparés avec la Trypticasein Soy Agar, il est recommandé de procéder comme suit: à partir de chaque lot préparé, 1 ou 2 plaques ou tubes non ensemencés doivent être incubés à 37 ° C pendant 24 heures pour démontrer leur stérilité. Dans tous les cas, il doit rester sans croissance.

En cas de contamination, le lot entier doit être jeté.

Contrôle de la croissance

Les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées pour étudier le bon fonctionnement de la gélose trypticaséine soja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 et Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Les souches sont ensemencées et incubées en aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures.

Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante.

On peut également utiliser des champignons tels que Candida albicans Complex ATCC 10231 et Aspergillus niger ATCC 16404. Une bonne croissance est attendue pour les deux souches.

Contrôle de la croissance et schéma d'hémolyse de la gélose trypticaséine soja supplémentée en sang

Pour vérifier le bon fonctionnement de la gélose au sang préparée avec cette base, les souches suivantes peuvent être utilisées: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 et Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Ils sont ensemencés et incubés à 37 ° C en microaérophilie pendant 24 heures.

Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante, en tenant compte du fait que la bêta-hémolyse (halo léger autour de la colonie) doit être observée chez S. pyogenes et une hémolyse alpha (halo verdâtre autour de la colonie) doit être observée chez les deux souches de S. pneumoniae. colonies).

Références

1. Contributeurs Wikipedia. Trypticase Je suis agar. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 17 décembre 2018, 15:47 UTC. Disponible sur:
2. Laboratoires Britannia. Agar de soja triptein. 2015. Disponible sur: britanialab.com
3. Laboratoires Neogen. Gélose tryptique de soja. Disponible sur: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA
5. Laboratoires BD. Trypticase I am Agar. 2014. Disponible sur:.bd.com