GÉLOSE SALMONELLA-SHIGELLA: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2024

La gélose Salmonella Shigella également connue sous le nom de gélose SS est un milieu sélectif et différentiel modérément, spécialement conçu pour l'isolement des bactéries entéropathogènes des genres Salmonella et Shigella, tous deux environnementaux tels que cliniques.

L'agar SS a une composition complexe; Il est composé d'extrait de viande, de peptone, de lactose, de sels biliaires, de citrate de sodium, de thiosulfate de sodium, de citrate ferrique, d'agar, de rouge neutre, de vert vif et d'eau distillée. Compte tenu de sa grande sélectivité, des échantillons avec une flore mixte abondante peuvent être semés.

Gélose SS avec colonies de Salmonella sp. Source: Manurx27, de Wikimedia Commons

Dans les laboratoires de microbiologie, le milieu Salmonella-Shigella est largement utilisé pour étudier la présence de Salmonella et de Shigella dans les échantillons de selles diarrhéiques, les eaux usées, l'eau potable et les aliments.

Parfois, il est nécessaire d'utiliser un bouillon de pré-enrichissement (bouillon de lactose) et un bouillon d'enrichissement (bouillon de sélénite cystine) pour récupérer les souches de Salmonella.

Ces étapes sont nécessaires lorsque l'on soupçonne l'existence de Salmonella en très faible quantité ou lorsque la souche peut être abusée par des procédés typiques de la production industrielle, principalement des aliments transformés. Il est également conseillé d'enrichir les échantillons de selles de patients traités avec des antibiotiques.

Par la suite, le bouillon enrichi peut être ensemencé sur de la gélose Salmonella-Shigella et d'autres milieux similaires, tels que la gélose au xylose, le désoxycholate de lysine (XLD) et la gélose Hektoen entérique (HE).

Base

Chaque composant du milieu de culture Salmonella-Shigella a une fonction spécifique et le mélange dans son ensemble lui confère les propriétés qui le caractérisent.

Pouvoir nourrissant

L'extrait de viande et la peptone (digérés avec de la caséine et du tissu animal) fournissent les nutriments nécessaires (azote, carbone et vitamines) pour le développement de microorganismes capables de tolérer le reste des composants.

Cohérence

L'agar-agar est chargé de fournir la consistance solide au milieu.

Sélectif

Ce milieu est très sélectif car il contient des sels biliaires, du citrate de sodium et du vert vif. Par conséquent, il inhibe la croissance de toutes les bactéries à Gram positif et de la plupart des bacilles à Gram négatif, y compris certains coliformes.

Alors que les bactéries du genre Salmonella et certaines souches de Shigella soutiennent ces composés.

Surtout, le genre Salmonella est très résistant aux sels biliaires, à tel point qu'ils sont capables de vivre dans la vésicule biliaire de certains patients porteurs qui excrètent constamment les bactéries dans leurs selles.

Différentiel

Le lactose est le glucide fermentescible qui aide à différencier les souches fermentant le lactose des souches non fermentantes. Cette propriété est mise en évidence par la présence de l'indicateur de pH, qui dans ce milieu est le rouge de phénol.

Les souches fermentant le lactose donnent des colonies rouges, tandis que les souches non fermentantes sont incolores. Cette caractéristique est importante, car Salmonella et Shigella ne fermentent pas le lactose.

En revanche, ce milieu contient du thiosulfate de sodium comme source de sulfure et du citrate ferrique comme source de fer. Les deux composés sont capables de différencier les bactéries capables de produire du sulfure d'hydrogène. Ceux-ci réagissent pour former un précipité de sulfure ferrique noir visible, insoluble.

Cette propriété se retrouve dans certaines souches du genre Salmonella. Normalement, leurs colonies sont plates et incolores avec un point noir au centre. Le reste des salmonelles ne produit pas de H ₂ S et se développe sous forme de colonies incolores.

En revanche, les colonies du genre Shigella sont plates et incolores sans noircir.

préparation

Ce support est très simple à préparer.

Peser 63 g du milieu commercial déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Chauffez la solution et remuez. Le mélange peut bouillir jusqu'à quelques minutes.

Ce milieu ne doit pas être autoclavé. Après dissolution, il est servi directement sur des assiettes stériles simples ou doubles.

Lorsqu'elles se solidifient, elles sont disposées de façon inversée sur les plaquettes et conservées au réfrigérateur (2-8 ° C) jusqu'à utilisation.

Le milieu après préparation doit rester à pH 7,2 ± 0,2 et de couleur rouge orangé.

Il est important de laisser les plaques se réchauffer avant de semer les échantillons. L'échantillon d'origine peut être semé directement, en déchargeant le matériau sur une partie de la gélose, puis en faisant des stries à partir de là.

En cas d'utilisation de bouillons enrichis, passer une partie du bouillon de sélénite et semer avec une spatule drigalski.

Incuber à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.

Gardez à l'esprit que le nombre de grammes à peser et le pH final du milieu peuvent varier d'une maison commerciale à l'autre. La base médiane apporte toujours les indications pour sa préparation.

Utilisation

Il est fréquemment utilisé dans l'analyse des cultures de selles et dans l'étude microbiologique d'échantillons d'eaux usées, d'eau potable et d'aliments.

Fréquemment, des plaques doubles sont préparées, d'un côté de la gélose Salmonella-Shigella et de l'autre de la gélose XLD.

Limites

-Certaines souches de Shigella ne poussent pas dans ce milieu. Par conséquent, il n'est pas recommandé pour l'isolement primaire de ce genre.

- Toutes les colonies transparentes avec un centre noir ne sont pas indicatives de Salmonella; Des tests biochimiques doivent être effectués pour procéder à une identification correcte, car les colonies de certaines souches de Proteus sont indiscernables de celles de Salmonella.

-Le milieu déshydraté doit prendre soin de l'exposition à l'environnement, car il est très hygroscopique. Par conséquent, il doit être conservé dans un environnement sec et bien fermé. Ouvert pour de très courtes périodes.

-Au fil du temps, les sels biliaires dans le milieu peuvent précipiter, formant une image similaire à un tapis dans la gélose, mais cela n'affecte pas les résultats.

-Certaines souches de Shigella peuvent fermenter lentement le lactose.

Contrôle de qualité

Pour prouver que le milieu fonctionne correctement, il est conseillé de planter des souches témoins connues ou certifiées et d'observer si la croissance répond aux caractéristiques attendues.

Pour cela, des souches d'E. Coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis peuvent être utilisées.

Les résultats attendus sont:

Enterobacter et Klebsiella ------ grandes colonies et mucoïdes rouges ou roses.

Shigella flexneri ---------- colonies plates transparentes ou incolores.

Salmonella typhimurium ------ colonies incolores avec des centres noirs.

Enterococcus faecalis -------- inhibition totale.

Références

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5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.