La gélose au sel de mannitol ou sel de manitol est une culture sélective et différentielle en milieu solide. Il a été créé par Chapman pour l'isolement des cocci pathogènes à Gram positif, en particulier Staphylococcus aureus.
Cependant, il est également utile d'isoler Staphylococus epidermidis, qui peut parfois être présent en tant que pathogène opportuniste, et Staphylococcus saprophyticus, un pathogène urinaire reconnu, parmi d'autres espèces.
A. Fiola avec milieu gélose au mannitol salé préparé. B. Boîtes de gélose au mannitol salé ensemencées avec des souches bactériennes de mannitol fermentées et non fermentées. Source: A et B: Photos prises par l'auteur MSc. Marielsa Gil.
Certains Enterococcus sont capables de croître sur ce milieu, ainsi que certains bâtonnets à Gram positif formant des spores.
Ce milieu est très utile dans l'analyse d'échantillons cliniques, mais il est également utilisé dans l'étude microbiologique des aliments et dans le contrôle qualité de produits industriels, tels que les cosmétiques, les médicaments, entre autres.
La gélose salée au mannitol est composée d'extraits et de peptones de bœuf, de tripteine, de mannitol, de chlorure de sodium, de rouge de phénol et d'agar.
Base
La gélose au mannitol est sélective grâce à sa forte concentration en sel. La salinité agit comme une substance inhibitrice et empêche la croissance des bactéries à Gram négatif.
Il est également différentiel en raison de la présence du glucide mannitol et de l'indicateur de pH au rouge phénol. A partir de là, les bactéries capables de fermenter le mannitol produisent des acides, acidifiant le milieu, jaunissant les colonies et le milieu.
En revanche, les colonies qui ne fermentent pas le mannitol se développent dans le milieu en prenant les nutriments apportés par les extraits et peptones de viande et de triptein. De là, les bactéries extraient le carbone, l'azote, les vitamines et les minéraux nécessaires à leur croissance.
Les colonies dans ce cas peuvent être rose faible ou fort, et le milieu reste de la même couleur ou change en fuchsia.
L'agar est la substance qui assure la consistance du milieu.
préparation
Pour préparer un litre de gélose mannitol salée, 111 g du milieu déshydraté de la société commerciale préférée sont pesés et dissous dans 1000 ml d'eau distillée, à l'aide d'un ballon.
La chaleur est appliquée avec une agitation fréquente du milieu pour améliorer le processus de dissolution. Faites bouillir pendant une minute.
Le ballon est placé dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
À la fin du temps, retirer le flacon de l'autoclave, laisser reposer et servir entre 15 à 20 ml sur des boîtes de Pétri stériles lorsque la température est d'environ 50 à 55 ° C.
Il est permis de se solidifier, de commander de manière inversée en plaqueros et de se conserver au réfrigérateur jusqu'à son utilisation. Avant de semer un échantillon, attendez que la plaque atteigne la température ambiante.
Les plaques sont ensemencées par stries ou par semis en surface avec une spatule drigalski. Le pH final du milieu préparé doit être de 7,4 ± 0,2
La couleur du milieu déshydraté est beige clair et la couleur du milieu préparé est le rouge orangé.
Applications
En raison de sa haute sélectivité, ce milieu est idéal pour semer des échantillons à flore mixte dans lesquels la présence de Staphylococus aureus, comme principal pathogène de ce genre, est recherchée.
En ce sens, l'une de ses utilisations les plus fréquentes est l'analyse microbiologique des exsudats pharyngés et des échantillons d'écoulement nasal, notamment pour détecter les porteurs asymptomatiques de S. aureus.
Certains pays ont mis en œuvre cette analyse comme une exigence obligatoire pour les personnes qui souhaitent travailler comme vendeurs de produits alimentaires.
Ce contrôle empêche la contraction des personnes porteuses de S. aureus, évitant ainsi une intoxication alimentaire massive, due à la consommation d'aliments contaminés par l'entérotoxine staphylococcique.
Il peut également être inclus dans l'ensemencement des infections des plaies, les hémocultures, le LCR, le lavage bronchoalvéolaire, entre autres.
La gélose au mannitol salée est utile pour ré-isoler des colonies à partir de cultures d'urine à partir de gélose CLED ou de gélose au sang dont le Gram a révélé des amas Gram positifs de cocci.
Il est également valable dans l'analyse microbiologique des aliments, de l'eau potable, des sols, entre autres applications.
Contrôle de qualité
Une fois qu'un lot de plaques avec de la gélose au mannitol salé a été préparé, il est conseillé d'effectuer un contrôle qualité. Des souches témoins sont semées pour montrer s'il y a croissance ou non.
Les souches connues de Staphylococcus aureus peuvent être utilisées comme contrôle positif. Il devrait pousser de manière satisfaisante en développant des colonies jaunes et le milieu prend également la même couleur.
De même, il convient d'inclure une souche connue de Staphylococcus epidermidis. Il devrait pousser de manière satisfaisante en développant des colonies roses, et le milieu reste de la même couleur ou s'assombrit en un rose plus fort.
Comme contrôle négatif, on utilise des souches qui ne devraient pas pousser sur ce milieu. Par exemple, une souche connue d'Escherichia coli ou de Klebsiella pneumoniae peut être cultivée. Le résultat attendu est une inhibition complète, c'est-à-dire aucune croissance.
De plus, une plaque non inoculée doit être incubée. Il ne devrait y avoir ni croissance ni changement de couleur.
Il est important que la plaque ne soit pas utilisée s'il y a des signes de détérioration, tels que contamination, déshydratation, décoloration, entre autres.
Dernières pensées
Lors de l'utilisation d'un milieu gélose au mannitol salé, certains aspects importants doivent être pris en compte:
- L'obtention d'une croissance de colonies jaunes n'indique pas qu'il s'agit de Staphylococcus aureus. Il faut rappeler que certaines souches d'Enterococcus sont capables de croître dans ce milieu et de fermenter du mannitol, ainsi que certains bâtonnets Gram positifs sporulants.
Par conséquent, il est important d'effectuer un Gram sur la colonie et un test de catalase.
-D'autre part, il faut considérer que d'autres espèces de Staphylococcus autres qu'aureus sont également capables de fermenter le mannitol. Par conséquent, il est important de repiquer la colonie dans un bouillon nutritif à prélever et d'effectuer le test de coagulase.
Parmi les espèces de Staphylococcus d'importance clinique pour l'homme qui fermentent le mannitol, on trouve: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, entre autres.
D'autres peuvent donner une réaction variable, c'est-à-dire parfois positive et parfois négative. Certains sont S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre autres.
-Il n'est pas recommandé de prélever des colonies directement sur de la gélose au mannitol pour effectuer le test de la coagulase, car la forte concentration de sel dans le milieu peut interférer avec le résultat.
-Enfin, il est recommandé d'incuber les plaques ensemencées de mannitol salé jusqu'à 48 heures, car certaines souches de S. aureus peuvent lentement fermenter le mannitol, bien que ce ne soit pas très fréquent.
Références
- Laboratoires Britannia. Gélose au mannitol salé. 2015. Disponible sur: britanialab.com
- "Agar salé au mannitol". Wikipedia, l'encyclopédie libre. 31 octobre 2018, 19:08 UTC. 17 janvier 2019, 20:55, disponible sur: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. (5e éd.). Argentine, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA
- Laboratoires BD. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Disponible sur: bd.com.