GÉLOSE SABOURAUD: FOND DE TEINT, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose Sabouraud, également appelée gélose Sabouraud dextrose, est un milieu solide, notamment enrichi pour l'isolement et le développement de champignons, tels que levures, moisissures et dermatophytes.

Par conséquent, ce milieu ne peut manquer dans un laboratoire de microbiologie pour enquêter sur la présence de champignons pathogènes ou opportunistes, que ce soit à partir d'échantillons cliniques ou non cliniques. De même, il est également idéal pour la croissance de bactéries filamenteuses telles que Streptomyces et Nocardias. Son utilisation est très large, car elle peut être utilisée en mycologie humaine, animale, végétale et industrielle.

A. Gélose Sabouraud non ensemencée. Gélose de B. Sabouraud ensemencée avec une levure. Source: Photos prises par l'auteur MSc. Marielsa gil

Ce médium a été créé en 1896 par l'éminent dermatologue Raimond Sabouraud, qui est devenu un spécialiste de renommée mondiale des troubles du cuir chevelu, principalement causés par les dermatophytes.

Sa création était si importante qu'elle a été utilisée depuis et reste aujourd'hui, bien qu'avec quelques modifications.

Bien que ce soit spécial pour les champignons, les bactéries peuvent se développer dans ce milieu, par conséquent, pour les échantillons à flore mixte, l'inclusion d'antibiotiques dans leur préparation est nécessaire pour inhiber la croissance de la flore bactérienne qui peut être présente.

Le choix de l'antibiotique doit être fait avec soin et en tenant compte du type de champignon à récupérer, car certains sont inhibés en présence de certaines substances.

Base

La gélose Sabouraud dextrose est un milieu qui dans sa formulation d'origine est faiblement sélectif, du fait de son pH acide de 5,6 ± 0,2, cependant, des bactéries peuvent encore se développer, principalement lors d'incubations prolongées.

Le milieu contient de la caséine peptone et un digestat pancréatique de tissus animaux, qui fournissent la source de carbone et d'azote pour la croissance des micro-organismes.

Il contient également une concentration élevée de glucose, qui agit comme une source d'énergie, favorisant la croissance des champignons sur les bactéries. Tout cela mélangé à de l'agar-agar, un composant qui lui donne la bonne consistance.

En revanche, la gélose Sabouraud dextrose peut être sélective si des antibiotiques sont ajoutés.

Avec les antibiotiques, il est particulièrement utile dans les échantillons de plaies, d'ulcères ouverts ou de tout échantillon dans lequel une forte contamination bactérienne est suspectée.

Combinaisons les plus couramment utilisées de gélose Sabouraud dextrose avec des antibiotiques

-Gélose Saburaud au chloramphénicol: idéale pour la récupération des levures et champignons filamenteux.

- Gélose Sabouraud à la gentamicine et au chloramphénicol: la quasi-totalité des champignons filamenteux et levures poussent dans ce milieu, et elle inhibe un grand nombre de bactéries, dont les entérobactéries, les pseudomonas et les staphylocoques.

- Gélose de Sabouraud au cycloheximide: elle est particulièrement utile pour les prélèvements cutanés ou des voies respiratoires, à condition que la suspicion soit des champignons dimorphes.

Le cycloheximide doit être utilisé avec prudence; Bien qu'il soit utilisé pour inhiber la croissance de champignons et de levures non pathogènes ou environnementaux qui peuvent être présents comme contaminants dans un échantillon, il inhibe également la croissance de certains champignons tels que Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp et d'autres champignons opportunistes.

- Gélose de Sabouraud au chloramphénicol plus cycloheximide: elle est principalement utilisée pour isoler les dermatophytes et les champignons dimorphes. Elle présente l'inconvénient d'inhiber certaines espèces de champignons opportunistes comme Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes ou C. neoformans.

- Gélose de Sabouraud au chloramphénicol, streptomycine, pénicilline G et cycloheximide: elle est idéale pour les échantillons extrêmement contaminés par des bactéries et champignons saprophytes, mais présente l'inconvénient d'inhiber la croissance des Actinomyces et des Nocardias, en plus des champignons opportunistes mentionnés ci-dessus.

préparation

Si vous avez les ingrédients séparément, il peut être préparé comme suit:

Gélose Sabouraud dextrose

Peser:

- 40 gr de dextrose

- 10 g de peptone

- 15 gr d'agar-agar

- Mesurez 1000 ml d'eau distillée

Tous les ingrédients sont mélangés, le pH est ajusté à 5,6. Les solutés sont dissous par ébullition, 20 ml du milieu sont répartis dans des tubes de 25 x 150 mm, sans rebord et de préférence avec un capuchon en coton.

Tubes avec capuchon en coton. Source: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa gil

D'autres tailles de tube peuvent également être utilisées, selon la disponibilité.

Ils sont autoclavés pendant 10 minutes sous une atmosphère de pression (121 ° C). Le temps d'autoclavage ne doit pas être dépassé. A la sortie de l'autoclave, les tubes sont inclinés à l'aide d'un support jusqu'à se solidifier dans un bec de cannelure.

Une autre façon est de dissoudre les ingrédients en chauffant jusqu'à ébullition. Autoclave pendant 10 minutes dans le même flacon puis répartir 20 ml dans des boîtes de Pétri.

Si vous disposez d'un milieu gélose Sabouraud dextrose qui contient déjà tous les ingrédients, procédez à la pesée de la quantité indiquée par la société commerciale pour un litre d'eau. Les autres étapes sont les mêmes que celles décrites ci-dessus.

Gélose Sabouraud dextrose (modification Emmons)

Peser:

- 20 gr de dextrose

- 10 g de peptone

- 17 gr d'agar-agar

- Mesurez 1000 ml d'eau distillée

Tous les ingrédients sont mélangés, le pH est ajusté à 6,9. Procédez de la même manière que dans le cas précédent.

Il existe des maisons commerciales qui offrent le milieu avec tous les ingrédients. Dans ce cas, pesez et préparez comme décrit sur la notice.

Gélose Sabouraud dextrose (modification Emmons) au chloramphénicol

Solution mère de chloramphénicol

- Peser 500 mg de chloramphénicol base

- Mesurer 100 ml d'éthanol à 95%

- Mélanger

Le milieu gélose Sabouraud dextrose (Emmons) est préparé comme décrit précédemment et en plus pour chaque litre de milieu ajouter 10 ml de solution mère de chloramphénicol avant l'autoclavage.

Gélose Sabouraud Emmons Dextrose avec cycloheximide

Solution mère de cycloheximide

- Peser 5 gr de cycloheximide

- Mesurer 100 ml d'acétone

- Mélanger

Le milieu gélose Sabouraud dextrose (Emmons) est préparé comme déjà décrit et en plus pour chaque litre de milieu ajouter 10 ml de solution mère de cycloheximide avant l'autoclavage.

Gélose Sabouraud dextrose (Emmons) avec chloramphénicol et cycloheximide

Le milieu gélose Sabouraud dextrose (Emmons) est préparé comme décrit précédemment et en plus pour chaque litre de milieu ajouter 10 ml de solution mère de chloramphénicol et 10 ml de solution mère de cycloheximide avant autoclavage.

Autres antibiotiques pouvant être ajoutés

20 000 à 60 000 unités de pénicilline par litre de milieu.

30 mg de streptomycine par litre de milieu.

Les deux doivent être incorporés après que le milieu a été autoclavé, légèrement refroidi (50-55 ° C).

0,04 g de néomycine par litre de milieu.

0,04 g de gentamicine par litre de milieu.

Considérations particulières

Pour des raisons de sécurité, il est préférable de semer la gélose Sabouraud dextrose dans des tubes cunéiformes (inclinés en bec de flûte) plutôt que dans des boîtes de Pétri, pour éviter la dispersion et l'inhalation des spores.

Il est important que les tubes de gélose Sabouraud soient recouverts de coton et non d'un bouchon à vis, car des conditions semi-anaérobies inhibent la formation de spores dans certaines souches, par exemple Coccidioides immitis. En outre, la plupart des champignons sont aérobies.

En cas d'utilisation d'un bouchon à vis, ne fermez pas hermétiquement.

Contrôle de qualité

Le support préparé doit subir un contrôle de qualité pour vérifier son bon fonctionnement. Pour cela, certaines souches témoins sont semées.

Pour la gélose Sabouraud dextrose avec chloramphénicol, des souches ATCC de Candida albicans peuvent être utilisées, qui doivent avoir une excellente croissance. Une autre plaque est inoculée avec des souches d'Escherichia coli, qui doivent être complètement inhibées.

Une plaque non inoculée est également incubée dans laquelle aucun micro-organisme ne doit se développer.

Pour la gélose Sabouraud dextrose avec chloramphénicol et cycloheximide, des souches de Trichophyton mentagrophytes peuvent être utilisées et elles devraient bien se développer. Une autre plaque est inoculée avec une souche d'Aspergillus flavus, dans laquelle il doit y avoir peu ou pas de croissance. De plus, une plaque non inoculée est incubée pour démontrer sa stérilité.

Pour la gélose Sabouraud dextrose avec cycloheximide, on utilise des souches de Candida albicans, Trichophyton rubrum ou Microsporum canis, qui doivent présenter une bonne croissance.

De même, une souche d'Aspergillus flavus est incluse, montrant peu ou pas de croissance. Enfin, incubez une plaque non inoculée pour contrôler la stérilité.

Applications

Culture primaire

La gélose Sabouraud dextrose classique contient 4 grammes de dextrose et est excellente comme milieu d'isolement primaire, car elle montre la morphologie caractéristique de chaque champignon.

Il est également excellent pour démontrer la production de pigments. Cependant, ce n'est pas le meilleur moyen d'observer la sporulation.

Il n'est pas non plus recommandé pour la culture de Blastomyces dermatitidis, qui est inhibée par la forte concentration de glucose présente.

D'autre part, pour la culture, certaines considérations doivent être prises en compte.

Certains champignons poussent mieux à température ambiante, comme les moisissures, d'autres avec succès à 37 ° C, comme certaines levures, et d'autres peuvent se développer aux deux températures (champignons dimorphes).

Pour cette raison, il est parfois nécessaire d'utiliser plusieurs plaques de gélose Sabouraud pour le même échantillon, car des semis en double sont souvent effectués pour incuber une plaque à température ambiante et une autre à 37 ° C.

Par exemple, Sporothrix schenckii est semé en deux plaques; l'un est incubé à température ambiante pour obtenir la phase de moisissure et l'autre est incubé à 37 ° C pour obtenir la phase de levure, mais dans cette dernière il est nécessaire d'ajouter 5% de sang au milieu.

Dans d'autres cas, comme les échantillons de mycétome, deux plaques de gélose Sabouraud sont ensemencées, l'une avec du chloramphénicol et l'autre avec du cycloheximide. Le premier permettra la croissance des agents responsables du mycétome d'origine fongique (Eumycetoma) et le second des agents responsables du mycétome d'origine bactérienne, tels que les actinomycétomes.

Sporulation

La gélose au dextrose Sabouraud modifié Emmons contient 2 grammes de dextrose et est non seulement utilisée pour l'isolement, mais aussi pour la sporulation et la conservation des champignons.

Dans ce milieu, des souches de Blastomyces dermatitidis peuvent être récupérées.

Préservation

Pour conserver les cultures de champignons, ils peuvent être conservés au réfrigérateur (2-8 ° C). Le temps de conservation peut varier de 2 à 8 semaines. Passé ce délai, ils doivent être sous-cultivés pour répéter le processus.

Certains champignons se conservent mieux à la température ambiante, comme Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum et Microsporum audounii.

Le maintien de la souche peut être allongé pour éviter le pléomorphisme si le dextrose est complètement éliminé de la gélose et si la quantité d'agar dans le milieu est réduite pour éviter la sécheresse.

Microcultures

Pour l'identification de certains champignons filamenteux, il est nécessaire de réaliser des microcultures à l'aide de la gélose Sabouraud ou d'autres moyens spéciaux pour observer les structures de reproduction sexuée et asexuée.

En mycologie humaine

Il est principalement utilisé pour le diagnostic des maladies fongiques, en particulier celles qui affectent la peau et ses attaches (cheveux et ongles).

Les échantillons peuvent être des sécrétions, des exsudats, de la peau, des cheveux, des ongles, des expectorations, du LCR ou de l'urine. Les agents pathogènes couramment isolés sont les dermatophytes, des champignons qui provoquent des mycoses sous-cutanées et systémiques.

Mycologie animale

Les animaux sont souvent affectés par des infections fongiques, c'est pourquoi la gélose Sabouraud est aussi utile en mycologie animale que chez l'homme.

Par exemple, les dermatophytes peuvent souvent affecter les animaux. C'est le cas du Microsporum canis var distortum, qui infecte fréquemment les chiens, les chats, les chevaux, les porcs et les singes. De même, Microsporum gypseum infecte les chiens, les chats et le bétail.

Les oiseaux tels que les poulets, les coqs et les poulets sont affectés par Microsporum gallinae.

D'autres champignons, tels que Zymonema farciminosum, sont également à l'origine de maladies chez les animaux, principalement chez les chevaux, les mulets et les ânes, provoquant une inflammation importante des vaisseaux lymphatiques.

Sporothrix schenkii et Histoplasma capsulatum affectent les animaux domestiques et les humains.

Mycologie environnementale

De nombreux champignons pathogènes ou opportunistes peuvent se concentrer à tout moment dans un environnement donné, en particulier dans les salles d'opération et les unités de soins intensifs (USI) des cliniques et des hôpitaux. Il est donc nécessaire de les contrôler.

D'autres espaces vulnérables sont les bibliothèques et les bâtiments anciens, qui peuvent être affectés par la concentration de champignons environnementaux.

Dans les études environnementales, la gélose Sabouraud dextrose est utilisée pour l'isolement des champignons.

Mycologie industrielle

La gélose Sabouraud dextrose ne peut être absente pour l'étude des champignons contaminants dans la production de produits cosmétiques, alimentaires, boissons, cuir, textiles, entre autres.

Mycologie végétale

Les plantes souffrent également de maladies causées par des champignons, affectant différentes parties de la plante, ce qui peut même mettre fin à la récolte, entraînant de grandes pertes en agriculture.

Références

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Diagnostic microbiologique des mycoses et études de sensibilité aux antifongiques. Recommandations de la Société espagnole des maladies infectieuses et de microbiologie clinique. Disponible à: coesant-seimc.org
2. Laboratoire ValteK. (2009). Gélose Sabouraud dextrose avec cycloheximide. Disponible sur: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Mycologie vétérinaire. Université nationale agraire. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Mycologie générale. 1994. 2e éd. Université centrale du Venezuela, éditions de la bibliothèque. Venezuela Caracas.