GÉLOSE POMME DE TERRE AU DEXTROSE: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATION - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose dextrose de pomme de terre est une culture nutritive non sélective moyenne et solide. Des espèces bactériennes et fongiques peuvent s'y développer, mais son utilisation est particulièrement indiquée pour l'isolement des champignons filamenteux et des levures. Il est également connu sous le nom de milieu PDA pour l'expression anglaise Potato Dextrose Agar.

Il est particulièrement utile pour l'isolement des champignons phytopathogènes, c'est-à-dire ceux qui affectent les plantes. Pour semer les échantillons de légumes infectés, d'autres moyens tels que la gélose Sabouraud ou l'agar malta peuvent être utilisés, cependant, pour une utilisation de routine, la gélose pomme de terre dextrose est préférée car une plus grande sporulation est obtenue.

Aspergillus niger et Sinemas sur gélose dextrose de pomme de terre respectivement. Source: Alextrevelian 006 sur Wikipedia anglais / Joselrojas

Il est également utilisé pour le comptage des colonies fongiques dans des échantillons de cosmétiques, de produits pharmaceutiques et de certains produits laitiers. De même, il convient pour semer des échantillons de raclures de peau à la recherche de dermatophytes, qui poussent très bien dans ce milieu, développant leurs pigments caractéristiques.

Le milieu de dextrose de pomme de terre est un milieu très simple et facile à préparer en laboratoire. Il contient, comme son nom l'indique, une infusion de pomme de terre, de dextrose et d'agar-agar. De plus, des substances inhibitrices peuvent être ajoutées pour empêcher la croissance bactérienne et augmenter la sélectivité pour les espèces fongiques.

Base

La gélose pomme de terre au dextrose est un milieu de culture qui fournit les éléments nutritionnels nécessaires au développement des champignons filamenteux et des levures.

La combinaison de l'infusion de pomme de terre avec du glucose fournit la source d'énergie parfaite pour une croissance satisfaisante des champignons. Alors que la gélose est celle qui donne la consistance au milieu.

Le milieu seul n'inhibe pas la croissance des bactéries, c'est donc un milieu non sélectif. Pour le rendre sélectif, il nécessite l'ajout de substances inhibitrices telles que l'acide tartrique ou des antibiotiques.

préparation

-Préparation maison (non commerciale) de gélose dextrose de pomme de terre

des boîtes de Pétri

Il est préparé comme suit:

En premier lieu, les pommes de terre sont très bien lavées, enlevant la terre qu'elles possèdent. Ils sont coupés en fines tranches avec tout et coque. 200 grammes de pommes de terre sont pesés et bouillis dans un litre d'eau distillée pendant une demi-heure.

À la fin du temps, filtrez ou filtrez toute la préparation à travers une étamine.

Le liquide obtenu est complété par de l'eau distillée jusqu'à un litre. Ajouter 20 g d'agar-agar et 20 g de dextrose à l'infusion, bien mélanger et autoclave à 121 ° C, à 15 livres de pression pendant 15 minutes.

Laisser refroidir à 50 ° C et servir dans des boîtes de Pétri stériles. Les assiettes préparées sont conservées au réfrigérateur.

Cales

Des quartiers d'agar dextrose de pomme de terre peuvent également être préparés.

Dans ce cas, avant de stériliser à l'autoclave, 12 à 15 ml de milieu sont placés dans des tubes, plus tard ils sont autoclavés et en partant ils reposent sur des supports spéciaux jusqu'à ce qu'il se solidifie. Conserver au réfrigérateur.

Le milieu reste à un pH de 5,6 ± 0,2, cependant, certains laboratoires ajoutent 10% d'acide tartrique pour abaisser le pH à 3,1 ± 0,1 afin d'inhiber la croissance bactérienne.

Dans ce même sens, d'autres laboratoires préfèrent ajouter des antibiotiques pour le rendre sélectif pour la culture de champignons et empêcher la croissance bactérienne.

-Préparation commerciale de gélose dextrose de pomme de terre

Peser 39 g du milieu déshydraté disponible dans le commerce et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laissez reposer 5 minutes.

Le mélange est chauffé sous agitation fréquente jusqu'à dissolution complète. Ensuite, il est stérilisé dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Des plaques ou des coins peuvent être préparés. Procédez comme décrit ci-dessus.

Le pH reste à 5,6 ± 0,2. Si un pH de 3,1 est souhaité, 14 ml d'acide tartrique stérile à 20% doivent être ajoutés avant de servir dans les assiettes.

Le milieu brut est beige et le milieu préparé est ambre clair avec un aspect légèrement trouble ou opalescent.

Applications

Procédé de semis d'échantillons de plantes sur gélose dextrose de pomme de terre

-Pour les feuilles tachées

Les feuilles sont coupées en morceaux.

Dans un verre de 50 cm3 avec 50% d'alcool, placez les morceaux de feuilles (morceaux tachés et sains), pour désinfecter la surface pendant 20 à 30 secondes. Jetez l'alcool et ajoutez 20% d'hypochlorite de sodium pendant 40 à 50 secondes s'il s'agit de feuilles minces et augmentez le temps à 80 secondes s'il s'agit d'écorce et de bûches.

Jeter l'hypochlorite de sodium et prendre les pièces désinfectées avec une pince stérile et les placer sur la surface du milieu (un maximum de 10 pièces). Réglez la date et incubez entre 20 et 30 ° C.

-Pour les fruits et tubercules

Si le fruit est charnu, ouvrez le fruit affecté par le champignon et prélevez des morceaux avec un scalpel stérile des parties malades et saines et placez-les sur la surface de la gélose.

Si le fruit est un agrume, comme un citron ou une orange, il doit être ouvert et ses graines semées.

Lorsque la surface du fruit est affectée et que des spores sont observées, l'idéal est d'utiliser la méthode de râpage sur l'assiette; Cela consiste à toucher les spores avec une spatule en forme de «L» stérilisée et refroidie, puis à faire un ensemencement en zigzag 2 à 3 fois sur la gélose.

-Pour les céréales

Ils sont désinfectés comme décrit dans les feuilles et placés plus tard sur la gélose.

-Pour les branches et les tiges

L'écorce est grattée et des morceaux ultérieurs de la partie saine et malade sont prélevés et semés directement sur l'agar.

Les plaques ensemencées sont incubées en aérobiose à 20-30 ° C pendant 72 heures.

Procédé de semis d'échantillons d'écailles de peau, de cheveux ou d'ongles sur gélose dextrose de pomme de terre

L'échantillonnage doit être effectué à l'aide d'une lame de scalpel n ° 11, soit pour couper les cheveux, les écailles de peau ou les ongles affectés à la recherche de dermatophytes. Avant de prélever l'échantillon, la zone doit être désinfectée avec de l'alcool à 70%.

-Échantillon de peau

Dans les lésions squameuses, le bord de la lésion doit être gratté, car le champignon est plus susceptible de s'y trouver.

Dans les lésions exsudatives, l'échantillon est prélevé avec un tampon sec ou humide. Semer immédiatement sur gélose pomme de terre dextrose ou gélose Sabouraud. Évitez les moyens de transport.

Une autre méthode d'échantillonnage est la technique du carré de tapis de Mariat et Adan Campos. Dans ce cas, la zone touchée est frottée 5 fois avec un morceau de laine stérile pour une culture ultérieure.

L'échantillon peut être placé directement dans le milieu de culture.

-Échantillon de cheveux

Selon la pathologie, la partie affectée peut être coupée ou déracinée. Placer l'échantillon dans le milieu de culture.

-Échantillon d'ongle

Une partie spécifique de l'ongle affecté peut être grattée ou coupée. Cela dépendra du type de blessure.

Coupez l'échantillon en morceaux de 1 mm avant le semis afin d'augmenter la probabilité de contact du champignon avec le milieu de culture.

Procédure d'identification

Les colonies obtenues dans la plaque sont isolées dans des tubes contenant de la gélose pomme de terre dextrose pour réaliser l'étude macroscopique des colonies (aspect, couleur, consistance, degré de développement.

L'étude microscopique (observation des structures et de leurs formations) peut se faire par microcultures ou observation directe au microscope entre la lame et la lame.

Nombre de colonies

Ce milieu peut également être utilisé pour déterminer la charge fongique et levurienne présente dans des échantillons végétaux, alimentaires, cosmétiques ou médicamenteux. Pour cela, on utilise de la gélose dextrose de pomme de terre complétée par des antibiotiques, tels que: (chloramphénicol, chlorotétracycline ou les deux).

Verser 1 ml de l'échantillon - dilué de préférence - dans une boîte de Pétri stérile et vide, puis faire fondre un tampon de gélose pomme de terre au dextrose et laisser refroidir à 45 ° C. Verser sur la boîte de Pétri et faire tourner jusqu'à homogénéisation. Laissez reposer jusqu'à ce qu'il se solidifie.

Incuber en aérobie à 20-25 ° C (moisissures) ou 30-32 ° C (levures) pendant 5 à 7 jours ou plus, selon le type de champignon recherché et le type d'échantillon. Deux plaques peuvent être utilisées pour incuber dans les deux plages de température.

Comptage des colonies fongiques dans un échantillon alimentaire. Gélose au dextrose de pomme de terre complétée d'antibiotiques. Source: photo Pxhere.com / 777267

Entretien des souches fongiques

La gélose de dextrose de pomme de terre peut être utilisée pour maintenir des souches fongiques viables pendant plusieurs années.

Pour cela, le champignon est cultivé dans des quartiers d'agar dextrose de pomme de terre et une fois que le champignon a poussé, il est recouvert d'huile minérale. L'huile doit être stérilisée dans un autoclave pendant 45 minutes et avoir une viscosité d'environ 300 à 330 Saybolt. L'huile doit être de 1 à 2 cm au-dessus de la pointe du biseau.

Contrôle de qualité

A partir de chaque lot préparé, prélever 1 ou 2 plaques et les incuber à 25 ° C pendant 48 heures ou à 20 ° C pendant 96 heures. Un bon contrôle de stérilité est celui dans lequel le développement des colonies n'est pas observé.

Des souches de contrôle connues ou certifiées peuvent également être utilisées telles que:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Une bonne croissance est attendue dans tous les cas.

Références

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