AGAR MRS: FONDATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

L' agar MRS est une culture en milieu solide sélectif utilisée pour l'isolement et le dénombrement des bactéries lactiques, notamment du genre Lactobacillus. Cette gélose a été créée en 1960 par Man, Rogosa et Sharpe, portant le même nom, mais en raison de sa complexité, l'abréviation MRS est souvent utilisée.

Il est composé de protéose peptone, d'extrait de viande, d'extrait de levure, de glucose, de monoléate de sorbitane, de phosphate dipotassique, d'acétate de sodium, de citrate d'ammonium, de sulfate de magnésium, de sulfate de manganèse et d'agar.

Gélose Man Rogosa et Sharpe (MRS) ensemencée avec Lactobacillus sp. Source: Photo fournie pour cet article par les auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Photo prise lors de l'enquête intitulée: Evaluation des bactéries lactiques et des bifidobactéries à potentiel probiotique dans le lait maternel et les selles infantiles.

Cette composition permet le bon développement des bactéries lactiques à partir d'échantillons cliniques, tels que les matières fécales, les pertes vaginales, les échantillons oraux et le lait maternel, ainsi que les produits laitiers et carnés.

Il n'est pas utilisé systématiquement dans les laboratoires cliniques, car les bactéries lactiques sont rarement impliquées dans les processus pathologiques. Cependant, dans le domaine de la microbiologie alimentaire, l'utilisation de la gélose MRS est plus fréquente.

En revanche, ce milieu est utilisé par certains centres de recherche dont l'objectif est l'étude des bactéries lactiques.

Base

La gélose Man, Rogosa et Sharpe a une composition assez complexe. En décomposant la fonction de chacun de ses composants, son fondement peut être expliqué.

La protéine peptone, l'extrait de viande, l'extrait de levure et le glucose sont des nutriments qui fournissent la source de carbone, d'azote, de vitamines et de minéraux nécessaires à la croissance bactérienne. De plus, le glucose est la source d'énergie universelle utilisée dans la plupart des milieux de culture.

Par contre, pour favoriser la croissance des bactéries lactiques, la présence de cofacteurs (cations) essentiels au métabolisme de Lactobacillus et des bactéries apparentées est nécessaire; Ces composés sont les sels de sodium, de magnésium et de manganèse.

De même, le monoléate ou le polysorbate de sorbitan 80 sont une source importante d'acides gras car ils sont absorbés en tant que nutriments.

De plus, le monoléate de sorbitan et le citrate d'ammonium agissent en inhibant le développement de la flore qui l'accompagne, notamment les bactéries Gram négatives, apportant le caractère sélectif de cette gélose.

Enfin, l'agar-agar est celui qui donne la consistance solide au milieu.

Il existe d'autres variantes de la gélose Man Rogosa Sharpe; l'un d'eux est complété par de la cystéine (MRSc), très utile pour l'isolement des bifidobactéries, entre autres microorganismes. D'autre part, il existe le milieu MRS supplémenté en néomycine, paromomycine, acide nalidixique et chlorure de lithium, spécial pour le comptage sélectif des bifidobactéries dans les produits laitiers.

préparation

Peser 68,25 grammes du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laisser reposer 5 minutes. Pour dissoudre complètement, utilisez une source de chaleur en remuant fréquemment et faites bouillir pendant 1 à 2 minutes. Stériliser dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

A la sortie de l'autoclave, laisser reposer quelques minutes et répartir encore chaud dans des boîtes de Pétri stériles.

Laisser solidifier et retourner les assiettes, commander en racks d'assiettes et réfrigérer jusqu'à utilisation. Laisser les assiettes se réchauffer à température ambiante avant utilisation.

Le pH du milieu doit être de 6,4 ± 0,2. Certaines maisons commerciales recommandent un pH compris entre 5,5 et 5,9.

Le milieu déshydraté est de couleur beige et préparé est ambre foncé.

Le milieu déshydraté et les plaques préparées doivent être conservés entre 2 et 8 ° C.

Applications

Les plaques de gélose MRS peuvent être ensemencées en surface (épuisement ou spatule Drigalski). Il peut également être semé en profondeur. Les plaques doivent être incubées à 37 ° C en microaérophilie (4% O ₂ et 5-10% CO ₂) pendant 24 à 72 heures.

La méthode de semis est choisie en fonction du but poursuivi (isolement ou comptage).

Caractéristiques des colonies

Les colonies présumées de Lactobacillus poussent de couleur blanchâtre et ont un aspect mucoïde ou crémeux sur cette gélose. Ils doivent ensuite être identifiés.

Isolement des bactéries lactiques

Pour cela, un semis de surface est utilisé. Les échantillons à semer nécessitent une procédure préalable.

Dans le cas d'échantillons de lait maternel, il est recommandé de centrifuger 1 ml de l'échantillon à 14 000 tr / min pendant 10 minutes, afin d'éliminer la couche grasse. 900 µl sont jetés et dans les 100 µl restants, le sédiment est mis en suspension et versé à la surface de la gélose MRS, puis réparti uniformément à l'aide d'une spatule Drigalski.

Dans le cas des échantillons de selles, un (1) gramme de selles est pesé et homogénéisé dans 9 mL d'eau peptonée stérile à 0,1%, correspondant à une dilution au 1/10. Ensuite, des dilutions en série sont effectuées, jusqu'à obtenir une dilution finale de 10 ^-4.

Enfin, 100 µl des dilutions 10 ^-2, 10 ^-3 et 10 ^-4 sont prélevés et chaque dilution est ensemencée sur gélose MRS, en répartissant uniformément avec une spatule Drigalski.

Comptage des bactéries lactiques

Dans ce cas, le semis se fait par profondeur.

Pour les échantillons de lait maternel, 1 ml est prélevé et placé dans un tube en plastique conique stérile. De la gélose MRS est ajoutée à une température approximative de 40 ° C jusqu'à un volume final de 25 mL, obtenant un mélange homogène. Ensuite, il est versé dans des boîtes de Pétri stériles de manière uniforme et laissé au repos jusqu'à la polymérisation.

Pour les échantillons de selles, des dilutions sont effectuées, comme décrit précédemment. Prenez 1 mL de chaque dilution et placez-le dans des tubes en plastique coniques stériles. De la gélose MRS fondue est ajoutée à un volume de 25 ml.

Le mélange de chaque dilution est versé uniformément dans des boîtes de Pétri stériles. Enfin, il est laissé au repos jusqu'à polymérisation.

Les colonies comptent sur la gélose Man Rogosa et Sharpe (MRS). Source: Photo offerte pour cet article. Auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Photo prise lors de la recherche intitulée: Évaluation des bactéries lactiques et des bifidobactéries à potentiel probiotique dans le lait maternel et les selles infantiles.

Niveau de recherche

Chaque jour, l'étude des bactéries lactiques suscite de plus en plus d'intérêt; Les chercheurs cherchent en particulier à se renseigner sur les nouvelles souches et leur potentiel en tant que ferments de départ pour la normalisation dans la fabrication de produits laitiers, entre autres utilisations.

En ce sens, Alvarado et al. (2007) ont utilisé de la gélose MRS pour mener une étude dans laquelle ils ont isolé, identifié et caractérisé des bactéries lactiques présentes dans un fromage vénézuélien fumé andin artisanal.

Dans le fromage, ils ont trouvé la présence de bactéries des genres Lactococcus et Lactobacillus, et ont conclu que les mélanges de souches isolées conviennent comme souches de départ dans la fabrication de fromages à partir de lait pasteurisé.

D'autre part, Sánchez et al. (2017) ont utilisé de la gélose MRS pour étudier la présence de bactéries lactiques dans le tube digestif des porcelets, afin de les utiliser comme probiotiques natifs qui augmentent la productivité des porcelets en bonne santé.

Avec ce milieu, ils ont réussi à isoler quatre espèces: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae et Pediococcus pentosaceus.

De même, Báez et al. (2019) ont utilisé de la gélose MRS pour évaluer les bactéries lactiques (LAB) et les bifidobactéries à potentiel probiotique dans le lait maternel et les selles infantiles.

Ils ont réussi à isoler 11 BAL et 3 Bifidobacteria sp dans le lait maternel, et 8 BAL et 2 Bifidobacteria sp. dans les matières fécales. Tous ont rencontré certains paramètres qui les prouvent comme des bactéries à activité probiotique.

Les auteurs ont conclu que le lait maternel et les excréments de nourrissons exclusivement allaités sont des sources naturelles de bactéries probiotiques.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité de la gélose MRS, des souches de contrôle telles que:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli et Bacillus cere.

Les résultats attendus sont une croissance satisfaisante pour les 6 premières bactéries, tandis que E. coli et Bacillus cereus doivent être complètement inhibés.

Références

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolement, identification et caractérisation des bactéries lactiques à partir d'un fromage artisanal andin fumé vénézuélien. Son utilisation comme culture de départ. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Disponible sur: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolement des bactéries lactiques du tube digestif du porcelet. Rev. investiga. vétérinaire. Pérou 2017; 28 (3): 730-736. Disponible sur: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Évaluation des bactéries lactiques et des bifidobactéries à potentiel probiotique dans le lait maternel et les matières fécales des nourrissons de la municipalité d'Acevedo, Miranda 2017. Travaux de premier cycle pour obtenir le baccalauréat en Bioanalyse. Université de Carabobo, Venezuela.
4. Laboratoire Britannia. Gélose MRS. 2015. Disponible sur: britanialab.com
5. Contributeurs Wikipedia. Gélose MRS. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 10 janvier 2018, 19:44 UTC. Disponible sur: wikipedia.org Consulté le 17 février 2019.
6. Roy D. Media pour l'isolement et le dénombrement des bifidobactéries dans les produits laitiers. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.