- Base
- Peptones et extrait de levure
- Glucose
- L-lysine
- Indicateur de pH (violet de bromocrésol)
- Citrate d'ammonium ferrique et thiosulfate de sodium
- Interprétation du test
- Décarboxylation de la lysine
- Désamination de la lysine
- Production de sulfure d'hydrogène (H
- Enregistrement des résultats
- préparation
- Applications
- Références
La gélose LIA (Lysine Iron) est un test biochimique utilisé pour identifier les bactéries de la famille des Enterobacteriaceae. Ce médium a été créé par Edwards et Fife, basé sur la formule de Falkow.
A l'origine, ce test était un bouillon contenant des peptones, un extrait de levure, du glucose, de la L-lysine, du violet de bromocrésol et de l'eau distillée. Edwards et Fife ont ajouté de l'agar-agar, du citrate d'ammonium ferrique et du thiosulfate de sodium.
Test positif et négatif pour la décarboxylation de la lysine. Source: Propriété photo et diagramme de l'auteur MSc. Marielsa gil
Le test consiste essentiellement à mettre en évidence la présence de l'enzyme lysine décarboxylase, capable de réagir avec le groupement carboxyle de l'acide aminé L-lysine. Une désamination de l'acide aminé peut également se produire en raison de la présence de l'enzyme lysine désaminase.
De plus, la composition du milieu montre la capacité de certains genres bactériens à produire du sulfure d'hydrogène. Enfin, il est également possible d'observer la génération ou non de gaz dans le milieu.
Base
Peptones et extrait de levure
Comme la plupart des milieux de culture, la Lysine Iron Agar contient des composants qui fournissent la source de nutriments nécessaires à la croissance bactérienne. Ces composants sont représentés par des peptones et un extrait de levure.
Glucose
De même, cette gélose contient du glucose en tant que glucide fermentescible. Toutes les bactéries de la famille des Enterobacteriaceae sont connues pour fermenter le glucose.
Cette étape est cruciale, car elle sera chargée d'acidifier le milieu, condition essentielle pour que l'enzyme lysine décarboxylase -si présente- agisse sur son substrat.
Dans certains genres bactériens, une production de gaz due à la fermentation du glucose peut être observée.
Le gaz est mis en évidence lorsqu'il y a un déplacement de la gélose dans le tube, laissant un espace vide au fond de celui-ci, ou en fracturant le milieu en deux ou plusieurs portions.
L-lysine
Une fois la lysine décarboxylée, une diamine (cadavérine) et du dioxyde de carbone se forment.
La décarboxylation se produit en présence du coenzyme pyridoxal phosphate. Cette réaction est irréversible.
Indicateur de pH (violet de bromocrésol)
Tous les changements de pH qui se produisent dans le milieu par les différentes réactions sont détectés par l'indicateur de pH du bromocrésol violet.
En ce sens, lorsqu'il y a acidification, le milieu devient jaune, et lorsqu'il y a alcalinisation, le milieu revient à sa couleur violette ou violette d'origine.
Lorsque la désamination de la lysine se produit en raison de la présence de l'enzyme lysine désaminase, une couleur rougeâtre se forme à la surface, typique des genres Proteus, Providencia et certaines espèces de Morganella.
Cela est dû au fait que l'acide alpha-céto-carbonique se forme pendant le processus de désamination, qui réagit avec le citrate d'ammonium en présence d'oxygène, provoquant la couleur susmentionnée.
Citrate d'ammonium ferrique et thiosulfate de sodium
D'autre part, les bactéries qui produisent du sulfure d'hydrogène seront mises en évidence par la présence de thiosulfate de sodium (source de soufre) et de citrate d'ammonium ferrique, qui est le révélateur de H 2 S.
Les bactéries qui ont l'enzyme thiosulfate réductase ont la capacité d'agir en réduisant le thiosulfate de sodium présent, formant du sulfite et du sulfure d'hydrogène (H 2 S).
Ce dernier est un gaz incolore, mais lorsqu'il réagit avec le sel de fer, il forme du sulfure métallique ferreux, qui est un composé insoluble (précipité noir visible).
Cependant, la capacité à former H 2 S avec ce milieu n'est pas très fiable, car certaines bactéries lysine décarboxylase négatives capables de produire H 2 S ne formeront pas le précipité noir, car l'acidité du milieu interfère. Par conséquent, il est recommandé de vérifier avec d'autres supports contenant du fer.
Interprétation du test
Décarboxylation de la lysine
Les tubes doivent être lus après les 24 heures d'incubation, sinon il y a un risque d'interprétation erronée de la réaction, signalant de faux négatifs.
Il faut se rappeler que la première réaction qui se produira sera la fermentation du glucose, donc tous les tubes après 10 à 12 heures deviendront jaunes.
Si à la fin du temps d'incubation (24 heures) un fond jaune avec une surface violette ou violette est observé, la réaction est négative. La couleur violette de la surface correspond à l'alcalinisation du milieu par l'utilisation de peptones.
Une réaction positive est celle où le fond et la surface du tube sont complètement violets, c'est-à-dire qu'il reprend sa couleur d'origine.
Par conséquent, qui détermine la positivité du test est la base ou l'arrière-plan du milieu. En cas de doute sur la couleur, il peut être comparé à un tube LIA non inoculé.
Désamination de la lysine
Un tube qui montre la désamination de la lysine aura une surface marron rougeâtre et un fond jaune (acide), ou le tube entier rougeâtre marron.
Cette réaction est interprétée comme négative pour la décarboxylation de la lysine, mais positive pour la désamination de la lysine.
Cette réaction est définie et interprétée sur la lunette.
Production de sulfure d'hydrogène (H
Une réaction positive est observée par l'apparition d'un précipité noir dans tout ou partie du milieu. Généralement entre le bord du biseau et la base.
Si le précipité se produit dans tout le tube, il ne révélera pas les autres réactions qui se produisent au milieu.
Enregistrement des résultats
Lors de l'interprétation du test, les résultats sont enregistrés comme suit:
On lit d'abord le biseau, puis le fond ou le bloc, puis la production de H 2 S, et enfin la production de gaz.
Exemple: K / A + (-). Ça signifie:
- K: lunette alcaline (couleur violette)
- A: fond acide (jaune), c'est-à-dire réaction de décarboxylation négative et désamination négative.
- +: Production de sulfure d'hydrogène
- (-): Sans gaz.
préparation
Pesez 35 g de milieu fer-gélose lysine déshydraté et dissolvez-le dans un litre d'eau distillée.
Chauffer jusqu'à ce que la gélose soit complètement dissoute, pour ce faire, laissez bouillir pendant une minute en remuant fréquemment. Répartir 4 ml de milieu dans des tubes à essai 13/100 avec des bouchons en coton.
Stériliser dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Retirer de l'autoclave et laisser reposer à un angle de sorte qu'il y ait une base profonde et un biseau court.
A conserver au réfrigérateur entre 2 et 8 ° C. Laissez-le se réchauffer avant de semer la souche bactérienne.
La couleur du milieu déshydraté est beige et le milieu préparé est violet rougeâtre.
Le pH final du milieu préparé est de 6,7 ± 0,2
Le milieu devient jaune à pH 5,2 ou moins, et est violet à pH 6,5 et plus.
Applications
Ce test, avec d'autres tests biochimiques, est utilisé pour l'identification des bacilles de la famille des Enterobacteriaceae.
Le milieu est ensemencé avec une boucle ou une aiguille droite, une ou deux perforations sont effectuées au fond du tube, puis la surface du milieu est entaillée en zigzag.
Incuber pendant 24 heures à 35-37 ° C en aérobiose. Si nécessaire, il est laissé incuber pendant 24 heures supplémentaires.
Il est principalement utile de différencier les espèces de Citrobacter lactose négatives de Salmonellas sp.
Source: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
Références
- Mac Faddin J. (2003). Tests biochimiques pour l'identification des bactéries d'importance clinique. 3e éd. Éditorial Panamericana. Buenos Aires. Argentine.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
- Laboratoires Britannia. Gélose au fer et à la lysine. 2015. Disponible sur: britanialab.com
- Laboratoires BD. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Disponible sur: bd.com
- Laboratoires Valtek. Medium LIA 2009. Disponible sur: andinamedica.com