Le milieu agar Endo ou Endo est un milieu solide, différentiel et avec un certain degré de sélectivité de culture. La formule originale a été créée par Endo en 1904 pour différencier les bactéries qui fermentent le lactose des bactéries non fermentantes. Initialement, il a été conçu pour l'isolement de Salmonella typhi, mais plus tard, l'objectif du milieu s'est tourné vers la recherche de coliformes.
Le principe d'Endo Agar est resté, mais sa formulation a subi d'innombrables changements au fil des ans. Actuellement, le milieu est composé de digestion peptique de tissu animal, de lactose, d'hydrogénophosphate dipotassique, de sulfite de sodium, de fuchsine basique et d'agar.
A: Virgin Endo Agar B: Seeded Endo Agar, au milieu de l'agar, vous pouvez remarquer la brillance métallique d'une souche d'E. Coli. Source: A: Strolch1983 / B: LenkaM
L'utilisation principale du milieu a été liée à l'isolement et à la différenciation des bacilles à Gram négatif appartenant à la famille des Enterobacteriaceae et à d'autres familles proches.
Pendant longtemps, il a été utilisé dans la détection de coliformes dans des échantillons d'eau, de produits laitiers et d'aliments, mais aujourd'hui l'utilisation de ce milieu a été remplacée par d'autres ayant des fonctions similaires. Cependant, certains laboratoires de microbiologie utilisent cette gélose pour l'isolement des entérobactéries à partir d'échantillons d'origine clinique.
Base
L'endo agar contient des peptones qui servent de source d'acides aminés, d'azote, de carbone et d'énergie, nécessaires à la croissance de micro-organismes peu exigeants.
D'autre part, le caractère légèrement sélectif de la gélose est apporté par l'addition de sulfite de sodium et de fuchsine basique; les deux composants inhibent partiellement ou totalement la croissance de la plupart des bactéries Gram positives.
Le caractère différentiel est donné par la présence de l'hydrate de carbone fermentescible, qui dans ce cas est le lactose et la fuchsine basique, qui sert également d'indicateur de pH.
Les bactéries à Gram négatif qui poussent sur cette gélose et sont capables de fermenter le lactose formeront de fortes colonies roses; étant pathognomonique d'Escherichia coli, la formation de colonies rouge foncé avec un éclat métallique verdâtre irisé. Cela est dû à la production élevée d'acides à partir de la fermentation des glucides.
Il convient de noter que le milieu autour des colonies prend également une forte couleur rose. Alors que les bâtonnets Gram négatifs ne fermentant pas le lactose forment des colonies rose pâle semblables à moyennes ou incolores.
L'hydrogénophosphate de potassium équilibre le pH du milieu et la gélose est le composant qui fournit la consistance solide.
préparation
Gélose endo
Peser 41,5 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer le mélange sous agitation fréquente jusqu'à dissolution complète du milieu. Stériliser dans un autoclave à 121 ° C, à une pression de 15 lb, pendant 15 minutes.
Lors du retrait de l'autoclave, laisser refroidir à une température d'environ 45-50 ° C, agiter le mélange pour homogénéiser avant de servir. Versez 20 ml dans des boîtes de Pétri stériles.
Laisser les assiettes se solidifier, inverser et conserver dans un plaquero ou envelopper de papier foncé avant de les ranger au réfrigérateur. Il est très important de protéger le milieu préparé de la lumière directe. Une bonne pratique consiste à préparer la quantité exacte dont vous aurez besoin.
Si elles sont conservées au réfrigérateur, les assiettes doivent pouvoir se réchauffer avant utilisation.
Le pH du milieu doit être compris entre 7,2 et 7,6 et la couleur du milieu préparé est rose pâle.
Variante de gélose M-Endo
Il existe une autre version de la gélose Endo (m-Endo) qui suit la formule de McCarthy, Delaney et Grasso, qui contient plus de composés et varie sous la forme de préparation.
Cette variante contient: lactose, tryptose, digestion enzymatique de caséine, digestion enzymatique de tissu animal, chlorure de sodium, phosphate de potassium dibasique, sulfite de sodium, extrait de levure, phosphate de potassium monobasique, fuchsine basique, désoxycholate de sodium, lauryl sulfate sodium et agar.
Dans ce cas, 51 g du milieu déshydraté sont pesés et mis en suspension dans 1 litre d'eau distillée contenant 20 ml d'éthanol.
Chauffer légèrement en remuant jusqu'à ce que le milieu se dissolve complètement. Il ne doit pas être surchauffé et ne doit pas être autoclavé. Une fois le mélange homogène, servir dans des boîtes de Pétri stériles et laisser se solidifier.
Utilisation
Dans certains pays, il est encore utilisé pour compter les coliformes totaux et fécaux dans les échantillons de nourriture et d'eau, en particulier la présence d'Escherichia coli comme principal indicateur de contamination fécale.
L'agar M-Endo est recommandé par l'American Public Health Association (APHA) pour le suivi et le contrôle des programmes de désinfection et de traitement des eaux usées, ainsi que pour l'évaluation de la qualité de l'eau potable.
La méthode la plus utilisée est la filtration sur membrane, après avoir enrichi l'échantillon en bouillon de lauryl sulfate pendant 2 à 4 heures.
Il peut également être utilisé comme substitut de la gélose EMB dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau par la technique du nombre le plus probable (NPP), en particulier dans la phase de confirmation complète pour corroborer la présence d'E. Coli à partir de bouillons EC trouble.
Contrôle de qualité
Des souches de contrôle connues ou certifiées sont semées pour évaluer la qualité du lot de gélose Endo préparé.
Parmi les souches pouvant être utilisées à cette fin, on trouve: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus 14CC.
Les souches sont ensemencées par épuisement et sont incubées à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.
Les résultats attendus sont:
- Pour Escherichia coli: colonies rouges fortes, avec un éclat métallique.
- Pour E. cloacae et K. pneumoniae, les colonies doivent être mucoïdes roses.
- Dans le cas de S. typhimurium, S. flexneri et P. mirabilis, les colonies sont généralement rose pâle ou incolores.
- Enfin, on s'attend à ce que E. faecalis soit partiellement inhibé, donc sa croissance doit être médiocre avec de très petites colonies roses fortes.
Limites
-Le milieu Endo a un faible pouvoir sélectif, il est donc possible que certains micro-organismes Gram positifs tels que Staphylococcus, Enterococcus et même des levures puissent se développer.
-D'autres bacilles n'appartenant pas à la famille des Enterobacteriaceae peuvent se développer dans ce milieu, comme Pseudomonas sp et Aeromonas sp. Les caractéristiques de ces souches sont des colonies irrégulières incolores.
-Ce milieu préparé est très sensible à la lumière, par conséquent, une exposition prolongée à celui-ci détériore le système d'indicateur, endommageant irréversiblement le milieu.
-Les composants du milieu sont considérés comme cancérigènes, donc le contact direct doit être évité.
-Le milieu déshydraté est très hygroscopique et doit être conservé dans son contenant d'origine à température ambiante, bien fermé et dans un environnement sec.
Références
- Laboratoires BD. Endo Agar. 2013. Disponible sur: bd.com
- Laboratoires Neogen. M Endo Agar. Disponible sur: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 7 sept. 2017, 08:27 UTC. 28 févr.2019, 22:55. Disponible sur: en.wikipedia.
- Laboratoire MercK. Endo agar. 2019. Disponible sur: merckmillipore.com
- Fiche technique Laboratoires. M –Endo Agar LES. 2015. Disponible sur: liofilchem.net