La gélose EMB est un milieu sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement en culture solide de bacilles à Gram négatif, en particulier les Enterobacteriaceae et autres bactéries à Gram négatif peu exigeantes. Il est également connu sous l'acronyme EAM, qui signifie éosine-bleu de méthylène.
Ce milieu a été créé par Holt-Harris et Teague en 1916. Il contient de la peptone, du lactose, du saccharose, du phosphate dipotassique, de l'agar, de l'éosine, du bleu de méthylène et de l'eau. Il est très similaire à la gélose MacConkey, en particulier lors de l'utilisation de la gélose EMB modifiée de Levine, qui ne contient pas de saccharose.
Brillant métallique d'Escherichia coli sur gélose EMB Source: Carmen Moreno González, de Wikimedia Commons
En fait, chaque laboratoire décide de travailler avec l'un ou l'autre, car ils remplissent la même fonction, bien que biochimiquement ils soient différents.
Il présente même le même inconvénient que la gélose MacConkey classique en termes de production grouillante par le genre Proteus. Par conséquent, pour éviter ce phénomène, la concentration en gélose peut être augmentée jusqu'à 5%.
Base
Sélectif
La gélose EMB est subtilement sélective car elle contient les colorants aniline (éosine et bleu de méthylène), qui agissent comme des inhibiteurs, empêchant la croissance de la plupart des bactéries Gram positives et de certains bâtonnets Gram négatifs fastidieux.
Cependant, cette gélose présente l'inconvénient que certaines bactéries Gram positives peuvent résister à la présence des substances inhibitrices et se développer sous forme de petites colonies ponctuées incolores, telles que Enterococcus faecalis et certains Staphylococcus.
Certaines levures peuvent également pousser, comme le complexe Candida albicans, qui donnera de très petites colonies roses. Les chlamydospores peuvent même se développer à partir de cette levure si l'échantillon est profondément ensemencé.
Différentiel
D'autre part, la gélose EMB est également un milieu différentiel, puisque ces colorants ensemble (éosine et bleu de méthylène) ont la propriété de former un précipité à pH acide, ils servent donc d'indicateurs de sa production.
Ainsi, les bactéries fermentant faiblement le lactose ou le saccharose produisent des colonies violettes en 24 à 48 heures. Par exemple les genres Klebsiella, Enterobacter et Serratia.
Les bactéries qui fermentent fortement le lactose, comme Escherichia coli, ou le saccharose, comme Yersinia enterocolitica ou Proteus penneri, forment un précipité noir verdâtre, donnant un aspect métallique caractéristique à ces espèces.
Il convient de noter que si le milieu EMB levine (sans saccharose) est utilisé, Yersinia enterocolitica et Proteus penneri produiront des colonies claires.
Les bactéries qui ne fermentent pas le lactose ou le saccharose sont nourries par la présence de peptones, qui fournissent les acides aminés et l'azote nécessaires à la croissance bactérienne, et produisent des colonies claires. Par exemple, les genres Salmonella et Shigella, entre autres.
De même, il est important de noter que le genre Acinetobacter peut présenter des colonies bleu lavande, même s'il ne s'agit pas d'un fermenteur de lactose ou de saccharose, mais a la propriété de fixer le bleu de méthylène sur sa paroi cellulaire. Cela peut également se produire avec d'autres bactéries oxydantes.
préparation
Le support déshydraté d'origine est de couleur beige clair.
Pour préparer ce milieu de culture, 36 grammes du milieu déshydraté doivent être pesés et mis en suspension dans un ballon contenant un litre d'eau distillée.
Après avoir laissé reposer le mélange pendant 5 minutes, porter le ballon à une source de chaleur, en mélangeant vigoureusement et constamment jusqu'à ce qu'il bout et se dissolve complètement.
Par la suite, le milieu de culture déjà dissous doit être stérilisé à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et laissé reposer brièvement. Ensuite, encore tiède (45-50 ° C), 15-20 ml d'agar sont servis dans chaque boîte de Pétri stérile. Le support doit être bleu tournesol.
Après avoir servi, les plaques sont laissées légèrement découvertes jusqu'à ce que l'agar refroidisse légèrement. Ils sont ensuite recouverts et autorisés à se solidifier complètement. Ensuite, ils sont disposés dans des porte-assiettes inversés et conservés au réfrigérateur (8 ° C) jusqu'à leur utilisation.
Cette procédure est de préférence effectuée dans une hotte à flux laminaire ou devant un brûleur Bunsen pour éviter toute contamination.
Il est important de garder à l'esprit que chaque établissement commercial indiquera la quantité à peser pour préparer le milieu de culture.
Le pH final du milieu doit être de 7,2 ± 0,2
Applications
Ce milieu est utilisé pour semer l'urine et les selles ou tout type de spécimen clinique, surtout si la présence de bacilles Gram négatifs non exigeants est suspectée, comme les bacilles appartenant à la famille des Enterobacteriaceae, qui poussent très bien sur ce milieu.
Les bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonella se distinguent par leurs colonies incolores ou légèrement ambrées.
D'autres bacilles fermentant sans lactose tels que Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre autres, se développent également.
De même, ce milieu est très utile dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau, car il est idéal pour la phase de confirmation complète de la détermination des coliformes, c'est-à-dire pour corroborer la présence d'E. Coli à partir de bouillons EC troubles de de la technique du nombre le plus probable (MPN).
Contrôle de qualité
Pour vérifier que le milieu de culture fraîchement préparé fonctionne bien, des souches témoins peuvent être plantées pour observer les caractéristiques des colonies et vérifier qu'elles donnent comme prévu.
Pour cela, des souches ATCC ou des souches bien identifiées d'E. Coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa et certaines bactéries Gram positives, comme S. aureus, peuvent être utilisées.
E. coli devrait générer des colonies bleu-noir bien développées avec un éclat métallique vert. Tandis que Enterobacter aerogenes et Klebsiella sp devraient donner des colonies muqueuses bleu-noir bien développées.
Par contre, Salmonella typhimurium et Shigella flexneri doivent développer de grandes colonies, incolores ou légèrement ambrées.
Enfin, le genre Pseudomonas aeruginosa se développe sous forme de colonies incolores de taille irrégulière, tandis que les bactéries Gram positives doivent être totalement inhibées ou se développer de manière clairsemée avec de très petites colonies.
Dernières pensées
Parfois, la stérilisation entraîne une réduction du bleu de méthylène, montrant une couleur orange moyen. Pour que le bleu de méthylène s'oxyde et retrouve sa couleur violette, il doit être mélangé doucement jusqu'à ce que la couleur soit récupérée.
En outre, après la stérilisation, le colorant peut précipiter, il doit donc être bien mélangé avant de servir les boîtes de Pétri.
Références
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B et Velázquez O. 2009. Techniques d'analyse microbiologique des aliments. 2e éd. Faculté de chimie, UNAM. Mexique.
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