AGAR CLED: JUSTIFICATION, UTILISATIONS ET PRÉPARATION - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose CLED (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) est un milieu de culture différentiel solide, utilisé pour le diagnostic des infections des voies urinaires. La composition du milieu de culture est conçue pour la bonne croissance des pathogènes urinaires et est idéale pour la quantification des unités formant colonie (UFC).

Le milieu de culture CLED est non sélectif, car des micro-organismes Gram négatif et Gram positif peuvent s'y développer. Mais ce n'est pas un problème, car la plupart des infections urinaires sont causées par un seul type de micro-organisme.

Gélose CLED

En cas d'infections polymicrobiennes, vous pouvez attraper 2 ou 3 bactéries différentes, mais c'est très rare et la plupart du temps il s'agit d'échantillons contaminés.

Parmi les bactéries Gram négatives qui peuvent se développer dans ce milieu, on trouve les bacilles appartenant à la famille des Enterobacteriaceae et d'autres bacilles entériques, les uropathogènes les plus fréquemment isolés dans les échantillons d'urine étant les suivants: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, entre autres.

De même, parmi les bactéries Gram positives qui peuvent se développer dans ce milieu sont Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp et même des levures, comme le complexe Candida albicans, peuvent se développer.

Cependant, en raison de la composition chimique du milieu, il ne permet pas la croissance de certains pathogènes génito-urinaires exigeants, tels que Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, entre autres.

Justification de la gélose CLED

Le milieu de culture CLED contient un extrait de viande, un hydrolysat pancréatique de caséine et un hydrolysat de gélatine comme source d'énergie. Ils fournissent les nutriments nécessaires au développement de bactéries peu exigeantes.

Il contient également de la cystine, un acide aminé qui permet la croissance des coliformes, qui se distinguent par leur petite taille.

De même, il contient du lactose comme glucide fermentescible, c'est pourquoi ce milieu est différentiel; être capable de distinguer les bactéries en fermentation de la fermentation sans lactose.

Les bactéries en fermentation provoquent une modification du pH du milieu par la production d'acides, développant des colonies jaunes, tandis que les bactéries non fermentantes ne génèrent pas de changements dans le milieu, elles prennent donc la couleur de la gélose d'origine, verte.

La réaction de fermentation est révélée grâce à la présence de l'indicateur de pH, qui dans ce milieu est le bleu de bromothymol.

D'autre part, la faible concentration d'électrolyte du milieu inhibe la croissance invasive typique du genre Proteus, appelée effet d'essaimage. Cela génère un avantage par rapport aux autres supports, car il permet le comptage des CFU, y compris si le genre Proteus est présent.

Cependant, la faible concentration d'électrolytes inhibe la croissance de certaines espèces du genre Shigella, ce qui constitue un inconvénient par rapport à d'autres milieux.

Justification de la gélose CLED (Bevis)

Il existe une variante ou une modification de ce milieu faite par Bevis, qui a incorporé de la fuchsine acide (indicateur d'Andrade) dans la composition originale. Il fonctionne en conjonction avec le bleu de bromothymol pour différencier les bactéries en fermentation des bactéries non fermentantes.

La différence entre le milieu conventionnel et le milieu modifié est la couleur que prennent les colonies. Dans le cas des bactéries fermentant le lactose, les colonies virent à l'orange rougeâtre avec un halo rose ou rouge, tandis que celles qui ne fermentent pas sont gris bleuâtre.

Applications

L'agar CLED est utilisé exclusivement pour l'ensemencement d'échantillons d'urine. L'utilisation de ce milieu est particulièrement fréquente dans les laboratoires européens, alors qu'en Amérique il est moins utilisé.

Le prélèvement d'échantillons doit respecter certains paramètres pour obtenir des résultats fiables, notamment:

• Ne prenez pas d'antibiotiques avant le prélèvement.
• Prélevez de préférence l'urine tôt le matin, car elle est plus concentrée, lorsqu'il n'est pas possible de prélever l'échantillon par des méthodes invasives.
• Bien laver les organes génitaux avant de prélever l'échantillon.
• Jetez le premier jet de miction, puis placez le récipient.
• Prélevez 25 à 30 ml d'urine dans un récipient stérile bien étiqueté.
• Emmenez immédiatement au laboratoire entouré de glace.
• Il doit être traité dans les 2 heures suivant sa sortie ou réfrigéré à 4 ° C pendant un maximum de 24 heures.

Semis d'échantillons d'urine

L'échantillon d'urine doit être dilué à 1:50.

Pour la dilution, placer 0,5 ml d'urine de patient et diluer avec 24,5 ml de solution physiologique stérile.

Mesurer 0,1 ml de l'urine diluée et étaler la surface avec une spatule drigalski sur le milieu CLED. C'est la meilleure méthode d'ensemencement pour compter les colonies. Pour cette raison, il est utilisé dans les échantillons d'urine, car les résultats doivent être exprimés en CFU / ml.

Pour quantifier les colonies obtenues, procédez comme suit: comptez les colonies sur la plaque et multipliez par 10 puis par 50. Cela vous donne la quantité d'UFC / ml d'urine.

Interprétation

Nombre supérieur à 100 000 CFU / ml -– Indique une infection urinaire

Nombre inférieur à 1 000 UFC / ml-– Aucune infection

Compte entre 1 000 et 10 000 UFC / ml - Contamination douteuse, possible, répétez le prélèvement.

ID

Les colonies cultivées sur gélose CLED doivent avoir un Gram et en fonction des caractéristiques morphotintorielles du microorganisme, une certaine sous-culture est réalisée.

Par exemple, s'il s'agit d'un bacille Gram négatif, il sera semé sur une gélose MacConkey, où la fermentation ou non du lactose est corroborée. De plus, une gélose nutritive est fixée pour effectuer le test d'oxydase.

Dans le cas où le Gram révèle des cocci Gram positifs, il peut être repiqué sur gélose mannitol salée et sur gélose nutritive. Dans ce dernier, le test de la catalase est effectué. Enfin, si des levures sont observées, elles seront semées sur gélose Sabouraud.

De nombreux laboratoires évitent d'utiliser le milieu CLED et préfèrent utiliser uniquement de la gélose au sang, du MacConkey et de la gélose nutritive pour ensemencer les échantillons d'urine.

préparation

Dans un ballon contenant un litre d'eau distillée, dissoudre 36,2 g de poudre d'agar CLED. Après 5 minutes de repos, chauffer l'agar remis en suspension, en mélangeant constamment à ébullition pendant 1 minute.

Puis stérilisez à 121 ° C pendant 15 minutes dans l'autoclave. À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et laissé refroidir à une température de 45 ° C. Par la suite, 15 à 20 ml sont servis dans chaque boîte de Pétri stérile.

La procédure de service sur assiette doit être effectuée à l'intérieur d'une hotte à flux laminaire ou devant le brûleur Bunsen pour éviter toute contamination.

Les assiettes servies sont laissées à solidifier, disposées sur une grille inversée et conservées au réfrigérateur (2-8 ° C) jusqu'à utilisation.

Le pH final du milieu préparé doit être de 7,3 ± 0,2.

Références

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