GÉLOSE AU CHOCOLAT: BASE, UTILISATIONS ET PRÉPARATION - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose au chocolat est un milieu de culture solide, enrichi, non sélectif et non différentiel. Il est principalement utilisé pour l'isolement de microorganismes exigeants du point de vue nutritionnel, bien que tout type de bactérie puisse s'y développer.

Pour cette raison, son utilité augmente notamment dans l'ensemencement d'échantillons normalement stériles, tels que le LCR et le liquide articulaire. Bien qu'il soit également inclus dans les moyens choisis pour semer des échantillons polymicrobiens, mais dans ces cas, il est nécessaire d'ajouter des antibiotiques qui inhibent la flore concomitante.

Gélose au chocolat avec croissance bactérienne

Ce médium a une couleur brune caractéristique très similaire au chocolat, d'où son nom. La préparation est très similaire à celle de la gélose au sang, mais dans ce cas, le sang doit être chauffé pour que les globules rouges se décomposent.

Sa préparation, comme la gélose au sang, est très délicate, car elle est facilement contaminée. Pour cette raison, de nombreux laboratoires préfèrent acquérir ce support déjà préparé par des sociétés commerciales qui garantissent sa qualité.

Base

Ce milieu se compose d'une base d'agar riche en nutriments et de sang chauffé. L'hémolyse des globules rouges fournit le facteur X (hémine) et le facteur V (NAD), nécessaires à la croissance de certains microorganismes, comme le genre Haemophilus. Il est également très utile pour l'isolement de Neisserias sp.

Comme la gélose au sang, différents milieux peuvent être utilisés comme gélose de base en fonction des besoins. Parmi les milieux utilisés figurent l'infusion cerveau-cœur et l'agar trypticase soja, bien que les plus recommandés soient l'agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar et Thayer Martin agar.

Certaines variantes de gélose au chocolat comprennent un supplément fortifié disponible dans le commerce appelé Isovitalex ou Polivitex.

Ces suppléments contiennent de la vitamine B ₁₂, de la L-glutamine, de l'adénine, du chlorhydrate de guanine, de l'acide p-aminobenzoïque, du nicotinamide adénine dinucléotide (NAD), du pyrophosphate de thiamine, du nitrate ferrique, du chlorhydrate de thiamine, du chlorhydrate de cystéine, de la L-cystine et du glucose.

Il est important de noter que la gélose au chocolat est plus enrichie que la gélose au sang, mais elle ne permet pas l'observation des profils d'hémolyse.

Applications

Source: pixnio.com. Auteur:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Gélose au chocolat préparée avec de la gélose Columbia

Ce milieu contient une digestion pancréatique de caséine et de cœur, une digestion peptique de viande, du chlorure de sodium, de l'agar, de l'extrait de levure et de la fécule de maïs. Il est également riche en vitamines, minéraux et acides aminés essentiels.

Cette base de sang chauffée est idéale pour l'isolement des bactéries du genre Neisseria. D'autre part, si un supplément pour Brucella est ajouté en plus au milieu, le micro-organisme mentionné peut être isolé. Les résultats sont améliorés en utilisant du sang de cheval.

Gélose au chocolat préparée avec de la gélose GC base (pour gonocoques)

Ce milieu contient des peptones, de la fécule de maïs, des tampons monobasiques et dibasiques, du chlorure de sodium et de l'agar.

La plupart des présentations de gélose au chocolat préparées dans le commerce sont livrées avec cette base et ne contiennent pas de sang chauffé, mais plutôt un mélange synthétique d'hémine et un supplément chimique de facteurs de croissance, de vitamines, de minéraux, d'acides aminés, de facteur V et de glucose.

Gélose au chocolat préparée avec de la gélose Müeller Hinton

Il est utilisé pour tester la sensibilité aux antimicrobiens de micro-organismes exigeants, tels que Streptococcus pneumoniae, en utilisant du sang de mouton chauffé à 5%.

Il est également utilisé pour l'isolement primaire de Neisserias et Haemophilus, mais dans le cas particulier de l'isolement d'Haemophilus, l'utilisation de sang de cheval est préférée, car c'est une riche source de facteurs X et V.

En revanche, si l'échantillon à semer provient d'une zone non stérile, l'ajout d'antibiotiques est recommandé pour inhiber la flore normale de la zone.

Exemple d'échantillons respiratoires où la présence de bactéries du genre Haemophilus est suspectée, la bacitracine est utilisée pour inhiber la croissance de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus et Neisserias saprophytes.

Dans le cas des échantillons de chancre génital, où Haemophilus ducreyi est suspecté, une gélose au chocolat préparée comme suit a été utilisée avec succès: gélose Müeller - Hinton avec 5% de sang de cheval chocolaté, 1% d'enrichissement en Isovitalex et 3 µg / ml de vancomycine.

Gélose au chocolat préparée avec de la gélose Thayer Martin

Ce milieu est spécial pour l'isolement de Neisseria gonorrhoeae. Il doit contenir des antibiotiques pour inhiber la flore qui l'accompagne. Le sang d'agneau est utilisé.

préparation

Vous devriez voir les indications pour la préparation de la gélose de base à utiliser. Ils se trouvent au dos du récipient du milieu déshydraté. Ils décrivent généralement combien vous devez peser pour préparer un litre de milieu de culture.

La quantité exacte nécessaire peut être préparée en laboratoire, elle peut être supérieure ou inférieure à un litre.

Calculs

Une règle de trois est utilisée pour calculer la quantité à peser pour préparer le volume souhaité. Exemple:

Si pour 1 litre il faut peser 40 gr et que le laboratoire nécessite 800 ml, on dit:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

La formule sera la suivante:

X = 32 gr (quantité à peser pour 800 ml).

Peser et dissoudre

La quantité nécessaire est pesée et placée dans un ballon avec de l'eau.

Chauffer à feu moyen et mélanger doucement avec des mouvements rotatifs jusqu'à ce que le milieu déshydraté se dissolve complètement, en le laissant bouillir pendant 1 minute.

Stériliser

Le ballon est placé dans l'autoclave pour stériliser le milieu à 121 ° C pendant 20 minutes.

Agrégat sanguin

En sortant de l'autoclave, on laisse reposer jusqu'à ce que la température du milieu soit approximativement entre 56 et 70 ° C pour placer le sang et mélanger jusqu'à ce que le milieu vire au brun.

Si vous ajoutez des suppléments, c'est le moment de le faire. Mélangez ensuite et servez 20 ml dans chaque boîte de Pétri stérile.

Toute la procédure doit être effectuée dans une hotte à flux laminaire ou autour du brûleur Bunsen.

Laisser reposer jusqu'à ce qu'ils se solidifient et conserver à l'envers au réfrigérateur.

Une autre façon de préparer de la gélose au chocolat sans utiliser de sang

Le milieu de base est préparé comme décrit ci-dessus, l'hémoglobine déshydratée obtenue dans le commerce est dissoute et stérilisée dans l'autoclave.

Les deux solutions peuvent refroidir à 50 ° C, sont jointes et le supplément est ajouté. Mélanger dans des conditions aseptiques, puis servir dans des boîtes de Pétri stériles.

Contrôle de qualité

Il est important que le sang soit placé à la température indiquée, car c'est la température idéale pour lyser les globules rouges et en même temps maintenir le facteur V, qui est sensible à la chaleur.

Aucune bulle ne doit rester à la surface de la gélose. Pour chaque lot de 100 plaques, une ou deux plaques doivent être incubées dans l'étuve à 37 ° C pendant 24 heures pour vérifier leur stérilité.

Pour de meilleurs résultats, la gélose au chocolat doit être utilisée peu de temps après la préparation.

Les souches bactériennes témoins doivent être conservées au laboratoire pour évaluer l'efficacité du milieu frais pour la croissance des principaux micro-organismes exigeants d'importance clinique.

Références

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5. Contributeurs Wikipedia. Gélose au chocolat. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 17 décembre 2018, 19:54 UTC. Disponible sur: en.wikipedia.org.