La gélose cétrimide ou cétrimide est un milieu de culture solide sélectif conçu pour l'isolement de Pseudomonas aeruginosa. Il est basé sur la production de pigments caractéristiques de cette espèce et a été réalisé à partir de la modification de la gélose Tech, créée par King, Ward et Raney.
La formule originale contenait des sels de chlorure de magnésium, de sulfate de potassium, de digestion pancréatique de gélatine et d'agar-agar. La modification de la formule a consisté en l'addition de cétrimide (bromure de cétyl triméthyl ammonium) et de glycérol.
Gélose cétrimide ensemencée avec Pseudomonas aeruginosa Source: BiotechMichael, de Wikimedia Commons
La gélose cétrimide est utile pour l'étude microbiologique d'échantillons où la présence de Pseudomonas aeruginosa est suspectée. Il convient de noter que cette bactérie est extrêmement importante, car bien qu'elle fasse partie du microbiote environnemental normal, elle se comporte souvent comme un pathogène opportuniste.
Pour cette raison, l'un des problèmes les plus courants causés par ce germe est les infections nosocomiales, c'est-à-dire celles qui se produisent dans l'environnement hospitalier, attaquant les patients qui ont un système immunitaire déprimé.
D'autre part, en raison de l'affinité que ce microorganisme a avec l'humidité, les cibles de contamination les plus vulnérables sont: les appareils respiratoires assistés, les médicaments, les nébuliseurs, les sources d'eau, les climatiseurs, les désinfectants, les solutions savonneuses, les solutions injectables, les plaies ouvertes., cathéters, tubes urinaires, entre autres.
En ce sens, la gélose au cétrimide est utile pour réaliser des contrôles microbiologiques et des cultures sur les éléments mentionnés précédemment.
Base
La gélose aux cétrimides est basée sur la capacité du milieu à favoriser la croissance de P. aeruginosa, à stimuler la production de ses pigments et à son tour à inhiber la croissance d'autres micro-organismes.
Ces propriétés sont dues à la fonction de chacun de ses composants. La peptone de gélatine présente sert de source d'azote, de vitamines et de minéraux. Le glycérol ou la glycérine fonctionne comme une source de carbone.
De son côté, le cétrimide (bromure de cétyl triméthyl ammonium) est la substance qui inhibe la croissance de bactéries autres que P. aeruginosa, y compris d'autres espèces appartenant au même genre.
L'inhibition se produit parce que le cétramide agit comme un détergent cationique, réussissant à déstabiliser la membrane plasmique de la plupart des bactéries, à l'exception de P. aeruginosa et de quelques autres qui parviennent à survivre.
D'autre part, il contient du chlorure de magnésium et du sulfate de potassium. Ces composés stimulent l'expression phénotypique liée à la capacité de Pseudomonas aeruginosa à produire divers pigments, notamment: la pyocyanine, la pyoverdine, la pyorrubine, la pyomélanine et la fluorescéine. Enfin, il contient de l'agar-agar, ce qui lui donne une consistance solide.
Interprétation
L'interprétation de la croissance obtenue dans cette gélose se fait comme suit:
L'observation de colonies rondes et lisses aux bords réguliers, avec la production de pigments bleu-verdâtres, verts, bruns ou rougeâtres, plus l'émission d'une odeur fruitée (aminoacétophénone), est un résultat présumé de la présence de cette bactérie dans ledit échantillon.
D'autre part, l'observation d'un pigment jaune-verdâtre brillant sur les colonies est révélatrice de P. aeruginosa lorsque la plaque est exposée à la lumière ultraviolette.
Fluorescence des colonies de P. aeruginosa sur gélose au cétrimide sous lumière ultraviolette.
Il est à noter que chaque couleur observée est due à la production d'un pigment spécifique. Le pigment bleu-vert correspond à la production de pyocyanine, le vert à pyoverdine, le rougeâtre à pyorubine, le brun à pyomélanine et la fluorescence jaune-vert brillant sous lumière UV à fluorescéine.
préparation
Peser 43 g du milieu déshydraté et dissoudre dans l'eau distillée. Ajoutez 10 ml de glycérol. Apportez le mélange à une source de chaleur. Laisser bouillir quelques minutes jusqu'à dissolution complète.
Autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser reposer et servir dans des boîtes de Pétri stériles lorsque la température est d'environ 50 ° C.
Laisser solidifier, retourner, commander en plaqueros et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Les plaques de gélose cétrimide doivent être retirées du réfrigérateur avant l'ensemencement et laissées revenir à température ambiante.
Le pH final du milieu doit être de 7,2 ± 0,2.
La couleur du milieu déshydraté est beige et la préparation est blanc opaque.
Applications
Tous les types d'échantillons dans lesquels la présence de Pseudomonas aeruginosa est suspectée peuvent être semés sur de la gélose au cétrimide. Par conséquent, il est utile dans tous les domaines de la microbiologie (environnement, industriel, clinique, eau et alimentation).
Il est d'une grande importance d'analyser les environnements hospitaliers et ainsi pouvoir appliquer des mesures correctives, car ce micro-organisme atteint les patients par le biais d'équipements, de médicaments, de solutions et de fournitures contaminés qui sont utilisés par le patient.
De cette manière, le micro-organisme peut infecter les voies respiratoires inférieures, les voies urinaires et les plaies des patients immunodéprimés.
Le comptage des colonies de P. aeruginosa peut également être effectué dans des tests de limites microbiennes.
Semé
La gélose cétrimide peut être utilisée comme culture primaire. La plaque est ensemencée sur l'un de ses bords et de là elle est distribuée par épuisement au reste de la plaque. Les échantillons liquides peuvent être ensemencés en surface avec une spatule drigalski.
Les plaques sont incubées en aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures d'incubation.
Limites
-Un petit pourcentage de souches de Pseudomonas aeruginosas ne produisent pas de pyocyanine, donc un faux négatif peut être interprété.
-Certaines espèces de Pseudomonas d'importance clinique sont inhibées dans ce milieu.
-Malgré le respect des caractéristiques décrites pour Pseudomonas aeruginosa, elles doivent être corroborées par des tests d'identification supplémentaires. Un test à ne pas manquer est le test de l'oxydase, il doit donner des résultats positifs.
-Certaines entérobactéries peuvent se développer dans ce milieu et développer un pigment jaune, mais il diffère de Pseudomonas aeruginosa en ce que lorsque la plaque est soumise à la lumière ultraviolette, il n'y a pas de fluorescence.
- Serratia marcescens parvient à se développer et produit un pigment rose.
-Si les plaques ensemencées de gélose au cétrimide sont exposées pendant un temps à température ambiante, les souches de P. aeruginosa peuvent perdre la fluorescence observée sous lumière ultraviolette, cependant la propriété est récupérée si elles sont à nouveau incubées à 37 ° C.
Contrôle de qualité
Pour analyser les bonnes performances de la gélose au cétrimide, des souches témoins peuvent être utilisées, telles que: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 et Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Les résultats attendus sont:
- Bonne croissance pour P. aeruginosa, avec pigment bleu-vert et fluorescéine positive.
- S. maltophilia et S. aureus seront partiellement à complètement inhibés.
- On s'attend à ce que Escherichia coli soit complètement inhibé.
Références
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Caractérisation phénotypique et sérologique des isolats cliniques de Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratoires Conda Pronadisa. Base d'agar cétrimide. 2014. Disponible sur: condalab.com
- Laboratoires Britannia. Gélose cétrimide. 2015. Disponible sur: britanialab.com
- Laboratoires BD. Gélose BD Pseudosel (gélose Cetrimide). 2013. Disponible sur: bd.com
- Laboratoire Francisco Soria Melguizo, CA gélose Cetrimide. 2009. Disponible sur: