GÉLOSE BILE-ESCULINE: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose bile-esculine est un milieu solide de culture sélectif et différentiel. Il est utilisé comme test de diagnostic pour déterminer la capacité d'un certain micro-organisme à se développer dans un milieu contenant de la bile et à décomposer le glucoside esculine en esculétine et glucose.

Ce test diagnostique est utilisé pour différencier les espèces du genre Streptococcus appartenant au groupe D (bile esculine positive), des autres groupes de Streptococcus qui réagissent négativement à ce test.

Plaque de gélose bile-esculine, ensemencée avec une souche d'Enterococcus (test positif). Source: Aucun auteur lisible par machine fourni. Philippinjl supposé (sur la base des revendications de droits d'auteur).

Il est à noter que certains Streptococcus du groupe viridans peuvent hydrolyser l'esculine, mais ne sont pas capables de croître en présence de bile à une concentration de 40%, par conséquent, dans ce milieu la réaction pour ce groupe est négative.

D'autre part, le milieu bile esculine est également utile pour le diagnostic des espèces Listeria monocytogenes ou Aerococcus sp, puisque ces microorganismes sont positifs pour l'esculine biliaire.

La gélose biliaire Esculin est composée de peptone, d'extrait de viande, de bile de bœuf, d'esculine, de citrate de fer, d'agar et d'eau distillée. Certaines maisons commerciales incluent l'azide de sodium dans la composition du milieu.

Le milieu peut être préparé en laboratoire si vous avez tous les composés séparément ou il peut être préparé à partir du milieu déshydraté commercial.

Base

Le milieu de bile esculine contient des peptones et un extrait de viande, les deux composés fournissent les nutriments nécessaires à la croissance des micro-organismes.

Il contient également de l'esculine; Ce composé est un glycoside formé par l'union d'un simple monosaccharide (glucose) avec un composé appelé 6,7-dihydroxycoumarine ou esculétine (aglucone), lié par une liaison acétal ou glucosidique.

Le test consiste à montrer si la bactérie est capable d'hydrolyser l'esculine. Si cela se produit, l'esculine se décompose en esculétine et glucose. Esculetina réagit avec le fer présent dans le milieu, formant un composé brun foncé, presque noir.

Cela signifie que le citrate ferrique agit comme un révélateur de réaction. Cette caractéristique fait de la Bile Esculin Agar un milieu différentiel.

De son côté, la bile est un inhibiteur qui empêche la croissance de certains microorganismes, par conséquent, la bactérie, avant de diviser l'esculine, doit pouvoir se développer en présence de bile. Par conséquent, ce milieu est considéré comme sélectif.

Les bactéries qui peuvent se développer dans cet environnement sont principalement celles qui vivent dans l'environnement intestinal.

En ce sens, certaines sociétés commerciales ajoutent de l'azide de sodium au milieu pour inhiber davantage la croissance des bacilles à Gram négatif entériques, augmentant la sélectivité du milieu pour la croissance de Streptococcus.

Enfin, l'agar donne la consistance solide au milieu et l'eau est le solvant des composés.

préparation

Préparation maison de gélose biliaire-esculine

Peser:

5 g de peptones

3 g d'extrait de viande

40 g de bile de bœuf

1 g d'esculine

0,5 g de citrate de fer

15 g d'agar

1000 ml d'eau distillée

En cas d'ajout d'azide de sodium, 0,25 g / litre est pesé et ajouté au mélange.

Dissoudre les composants dans le litre d'eau distillée, chauffer jusqu'à ce que les composés soient complètement dissous. Distribuer 5 ml dans 16 tubes à essai à bouchon à vis de 125 mm. Autoclave à 121 ° C, 15 livres de pression pendant 15 minutes.

Retirer de l'autoclave et incliner les tubes sur un support, de sorte que la gélose se solidifie dans un large bec à cannelures.

Conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Amener à température ambiante avant le semis.

Des plaques de gélose bile-esculine peuvent également être préparées; dans ce cas, la totalité du mélange est autoclavée dans un ballon et ensuite distribuée dans des boîtes de Pétri stériles. Laissez-les se solidifier et conserver au réfrigérateur.

Le pH du milieu doit être de 6,6 ± 0,2.

Préparation de la gélose biliaire-esculine à partir d'un milieu commercial

Pesez la quantité indiquée par l'insert. Cela peut varier d'une maison de commerce à l'autre. Ensuite, procédez de la même manière que la procédure expliquée ci-dessus.

Le pH du milieu doit être de 6,6 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est beige clair et le milieu préparé est de l'ambre foncé.

Milieu commercial de bile esculine. Source: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil.

Applications

Le milieu bile esculine est principalement utilisé pour différencier les streptocoques du groupe D (bile esculine positive) du reste des groupes streptocoques (bile esculine négative).

La combinaison du test de croissance en bouillon hypersalé avec le test de la bile-esculine peut identifier un groupe spécial de streptocoques du groupe D appelé Enterococcus.

Ce groupe spécial de Streptococcus appartient au groupe D du genre susmentionné et ils sont capables d'hydrolyser l'esculine en présence de bile comme le font le reste des membres du groupe D, mais ils sont également capables de se développer en milieu hypersalé (BHI avec chlorure de 6,5% de sodium), une propriété qui fait la différence.

Par conséquent, les streptocoques qui hydrolysent la bile d'esculine mais ne se développent pas dans un bouillon hypersalé sont appelés streptocoques non entérocoques du groupe D.

Semé

Inoculer le milieu de préférence à partir d'un bouillon Todd-Hewitt pur 24 heures.

Ajouter 2 gouttes à la surface du milieu avec une pipette Pasteur et étaler dans le milieu avec une boucle en platine.

Incuber à 35 ° C pendant 48 heures, tandis que le temps d'incubation est respecté, il peut être surveillé pour voir s'il y a une réaction positive. Si à la fin du temps la réaction reste négative, elle peut être incubée jusqu'à 72 heures.

Interprétation

Réaction positive: apparition d'une couleur brun foncé, presque noire dans le bec de la flûte (dans le cas du test en tube) ou noircissement de la gélose autour des colonies (dans le cas du test sur plaque).

Réaction négative: aucun noircissement du milieu ne se produit ou il y a un aspect noir dans moins de la moitié du tube après 72 heures d'incubation. En revanche, la croissance bactérienne dans le milieu sans l'apparition de la couleur noire doit être considérée comme un test négatif.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité du milieu, une souche Enterococcus faecalis ATCC 29212 doit être disponible comme contrôle positif et une souche Streptococcus n'appartenant pas au groupe D comme contrôle négatif.

Limites

-Les supports qui ne contiennent pas d'azide de sodium permettent la croissance des bacilles entériques Gram négatifs. Certains d'entre eux peuvent noircir le milieu.

- Certaines maisons commerciales ajoutent une faible concentration de bile (10%) et pour cette raison, certains streptocoques n'appartenant pas au groupe D peuvent se développer dans le milieu et hydrolyser l'esculine, ce qui peut générer des erreurs d'interprétation.

Références

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
3. Mac Faddin J. (2003). Tests biochimiques pour l'identification des bactéries d'importance clinique. 3e éd. Éditorial Panamericana. Buenos Aires. Argentine.
4. Lab. Britannia. Esculine bile avec gélose azide. 2015. Disponible sur: britanialab.com
5. «Bile Esculin Agar». Wikipedia, l'encyclopédie libre. 22 août 2017, 17:30 UTC. 22 avril 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Disponible sur: bd.com
7. Laboratoires Neogen. Gélose à l'esculine biliaire. Disponible sur: foodsafety.neogen.com