HUILE D'IMMERSION: COMPOSITION, CARACTÉRISTIQUES, UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2024

L' huile d'immersion est un liquide clair visqueux ayant un indice de réfraction élevé. Pour cette raison, il est largement utilisé dans les observations microscopiques, car il offre la propriété de concentrer la lumière lorsqu'elle passe à travers l'objectif 100X du microscope, augmentant son pouvoir de résolution.

Cela se produit parce qu'un film visqueux est formé entre l'objectif et le frottis, empêchant les rayons lumineux de se diffuser lorsqu'ils atteignent l'air, concentrant ainsi les faisceaux lumineux vers l'échantillon.

Compte-gouttes avec immersion dans l'huile et microscope focalisé avec objectif 100X utilisant l'immersion dans l'huile. Source: Pixabay.com

L'huile d'immersion est utilisée uniquement avec l'objectif 100X. C'est pourquoi l'objectif 100X est également appelé objectif d'immersion. Les autres sont connus comme des cibles sèches. Cette lentille ne peut pas être utilisée sans l'huile d'immersion, car sans elle la visualisation ne serait pas satisfaisante.

La fonction principale de l'huile d'immersion est de fournir des images plus claires, plus nettes et plus définies, permettant l'observation de détails qui ne seraient pas possibles avec d'autres objectifs.

La première huile utilisée à cet effet était l'huile d'anis, utilisée avec la première lentille d'immersion créée par Giovanni Battista Amici. Ceci a seulement empêché l'aberration chromatique, mais n'a pas augmenté l'ouverture numérique du système d'objectif.

Ensuite, l'huile de cèdre a été utilisée, mais elle avait de nombreux inconvénients qui ont forcé sa désuétude. Parmi eux, sa forte acidité, qui a endommagé les objectifs à court terme.

Par la suite, d'autres substances telles que l'eau et la glycérine ont été utilisées jusqu'à la création d'huiles d'immersion synthétiques, qui peu à peu ont été raffinées jusqu'à atteindre l'huile d'immersion actuelle, qui est un composé complexe de substances organiques.

Composition de l'huile d'immersion

L'huile d'immersion est constituée d'un mélange de composés organiques tels que: terphényle, terphényle hydrogéné, hydrocarbures naturels et polybutènes.

Caractéristiques de l'huile d'immersion

L'huile d'immersion est un liquide jaune clair, d'apparence légèrement visqueuse, avec une odeur caractéristique et une densité comprise entre 0,92 et 0,99 g / cm ³.

L'huile d'immersion n'est pas soluble dans l'eau et a un point d'ébullition de 340 ° C. L'indice de réfraction a (n 20 ° C / D): varie de 1,482 à 1,516. Pendant ce temps, l'indice de flash est de 110 ° C et la viscosité varie de 100 à 120 mPa.s.

Ce produit doit être éliminé correctement, car il est écotoxique. En d'autres termes, il est nocif pour l'environnement, affectant principalement les animaux aquatiques. En revanche, il est irritant pour la peau et les muqueuses. S'il est ingéré, il est néphrotoxique et cardiotoxique.

L'huile d'immersion est stable entre 15 et 25 ° C, température à laquelle elle doit être stockée.

Principes de base de l'huile d'immersion

Lors de l'utilisation d'objectifs à fort grossissement, l'intensité de la lumière doit être augmentée. Cependant, de nombreux faisceaux lumineux sont perdus car ils sont diffusés lorsqu'ils atteignent l'air (espace entre la lamelle et la lentille), et même certains rayons sont totalement réfléchis.

L'huile d'immersion a un indice de réfraction similaire à celui du verre. Par conséquent, lorsque l'huile entre en contact entre la lentille 100X et la lamelle, les faisceaux lumineux sont concentrés.

Les rayons concentrés traversent l'échantillon et affinent l'image, c'est-à-dire augmentent l'ouverture numérique de l'objectif et corrigent les aberrations chromatiques et sphériques.

Utilisations ou applications

L'utilisation d'huile d'immersion est particulièrement nécessaire lorsqu'il est nécessaire d'observer une image de manière plus large, en utilisant l'objectif de grossissement le plus élevé (objectif 100X) pour voir les détails essentiels à l'établissement d'un diagnostic.

Par conséquent, il est largement utilisé dans les études microscopiques dans divers domaines tels que: l'histologie, la cytologie, l'hématologie et la bactériologie. Par exemple, il est utile pour étudier les caractéristiques des cellules et des tissus d'un patient.

Il est également utilisé pour l'analyse des frottis sanguins, où l'on souhaite détailler les caractéristiques des hémoparasites à l'intérieur et à l'extérieur des érythrocytes, ainsi que dans les préparations de Gram, pour définir les caractéristiques morphotintorielles des microorganismes.

Il est généralement utilisé dans les préparations fixes, car il n'est pas recommandé dans les préparations fraîches. En effet, la tension superficielle de l'huile fait bouger la lamelle, provoquant le déplacement de l'échantillon pendant l'observation et empêchant l'analyse.

D'autre part, l'huile d'immersion n'est pas seulement utile en microscopie optique conventionnelle: elle est également utilisée dans les microscopes à fluorescence à réflexion interne totale (TIRFM) et dans les applications de fluorescence confocale.

Étapes pour observer une préparation à l'huile d'immersion

Pour voir une diapositive au microscope, la diapositive doit d'abord être mise au point avec l'objectif de grossissement le plus faible, généralement 10X, avec une faible intensité lumineuse.

Ensuite, il passe à l'objectif 40X et le trajet de la lumière est légèrement augmenté. Certaines analyses peuvent être effectuées à ce grossissement, mais un grossissement de 100X est nécessaire pour voir les détails structurels.

Avant de passer à l'objectif 100X, une goutte d'huile d'immersion est placée sur la lamelle, là où vous voulez observer, puis la tourelle du microscope est déplacée pour localiser l'objectif 100x dans la préparation.

L'intensité de la lumière est régulée (augmentée) (en déplaçant le condenseur et en ouvrant le diaphragme). Ensuite, avec quelques petits mouvements de la vis micrométrique (vers l'avant ou vers l'arrière), il devrait se concentrer parfaitement si le microscope utilise des objectifs parafocaux.

Si vous essayez de mettre au point la préparation directement avec la lentille à immersion, vous pourriez avoir du mal à trouver la mise au point. Ce n'est pas une action impossible, mais la difficulté augmente considérablement.

Se soucier

Pour utiliser l'huile d'immersion, certaines conditions doivent être prises en compte.

Lorsqu'une préparation colorée a été préparée, comme un frottis taché de Giemsa ou d'un gramme, attendez que le frottis sèche complètement avant de placer l'immersion dans l'huile. Sinon, l'huile et l'eau formeront des micelles qui ne permettront pas de voir la préparation.

En revanche, après avoir observé le lot de préparations, c'est-à-dire à la fin de la journée de travail, l'objectif 100X doit être soigneusement nettoyé, à l'aide d'un papier lentille avec de l'éthanol. Si l'objectif reste sale, l'huile sèche dessus et il sera alors très difficile de l'enlever, endommageant le champ de vision.

De même, il faut tenir compte du fait que l'huile est inflammable et doit être tenue à l'écart des sources de chaleur (briquets). Il est important d'éviter de le chauffer au-dessus de 65 ° C.

Enfin, l'huile est un produit toxique. Par conséquent, le contact direct avec la peau et les muqueuses doit être évité, car il peut provoquer une légère irritation. Pour éviter les accidents, il est recommandé d'utiliser des gants et des lunettes de sécurité pour le manipuler.

En cas de contact avec l'huile, la zone doit être lavée à grande eau. Si l'huile éclabousse les yeux, elle doit être lavée de la même manière, en gardant les yeux ouverts. En cas d'ingestion accidentelle, il est important d'ingérer de l'eau tiède et de provoquer des vomissements, en plus d'aller chez le médecin le plus proche.

Références

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