BOUILLON AU TÉTRATHIONATE: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le bouillon ou bouillon tétrathionate TT est un milieu de culture liquide sélectif pour l'enrichissement et la récupération des souches du genre Salmonella. Il a été créé par Müeller puis modifié par Kauffmann, c'est pourquoi certains l'appellent bouillon Müeller-Kauffmann.

Le milieu d'origine contenait des peptones de protéose, du carbonate de calcium et du thiosulfate de sodium. Kauffmann y a ajouté des sels biliaires et a créé une autre modalité avec du vert vif. Ces substances inhibent la croissance des coliformes, laissant le milieu libre pour le développement de bactéries pathogènes, dans ce cas Salmonella.

Ajout de la solution d'iode et d'iode au bouillon tétrathionate. Source: Manuel Almagro Rivas

La modification a été très réussie car elle a considérablement augmenté la sensibilité du milieu. Pour cette raison, il est actuellement utile pour la recherche de salmonelles dans tout type d'échantillon, mais surtout pour les selles solides ou liquides et les aliments.

Sa préparation se compose de deux phases; Le milieu commercial est une base pour préparer le bouillon tétrathionate, et par la suite, pour que le tétrathionate puisse être formé, une solution iodée d'iode est ajoutée pour compléter le milieu.

L'American Public Health Association (APHA) recommande l'utilisation du bouillon de tétrathionate complété de vert vif pour l'enrichissement des échantillons pour Salmonella, car il est plus sélectif que le bouillon de tétrathionate et le bouillon de sélénite.

En général, le bouillon tétrathionate est idéal lorsque la présence de bactéries du genre Salmonella est suspectée en petites quantités ou lorsqu'elles sont abusées par exposition à des substances inhibitrices ou par des procédés industriels qui minimisent leur viabilité.

Base

Les peptones présentes correspondent à la digestion pancréatique de la caséine et à la digestion peptique des tissus animaux. Ceux-ci fournissent la source de carbone, d'azote et de nutriments généraux pour la croissance bactérienne.

De son côté, le thiosulfate de sodium réagit avec la solution iodée pour former du tétrathionate. Cela inhibe la croissance des coliformes et favorise le développement de bactéries qui contiennent l'enzyme tétrathionate réductase, parmi lesquelles le genre Salmonella, mais aussi Proteus.

Les sels biliaires agissent également comme une substance inhibitrice pour la plupart des bactéries Gram positives et certaines bactéries Gram négatives (coliformes).

Le carbonate de calcium absorbe les substances toxiques générées par la décomposition du tétrathionate, qui forme de l'acide sulfurique. En ce sens, le carbonate de calcium neutralise l'acidité, maintenant le pH du milieu stable.

Dans le cas de la modalité vert clair, cette substance augmente le pouvoir sélectif du bouillon tétrathionate en inhibant les microorganismes autres que le genre Salmonella.

préparation

-Bouillon au tétrathionate

Solution d'iode et d'iode

Peser:

• 6 grammes d'iode.
• 5 g d'iodure de potassium.

L'iodure de potassium est dissous dans environ 5 ml d'eau distillée stérile, puis l'iode est ajouté petit à petit tandis que le mélange est chauffé. Une fois complètement dissous, compléter jusqu'au trait avec de l'eau distillée stérile jusqu'à atteindre un volume final de 20 ml.

Milieu de base pour bouillon tétrathionate

Peser 46 grammes du milieu déshydraté et mettre en suspension dans 1 litre d'eau distillée stérile. Mélanger et chauffer jusqu'à dissolution complète, il ne peut porter à ébullition que quelques minutes. Ne pas autoclave. On laisse refroidir la base du milieu à environ 45 ° C et à ce moment on ajoute 20 ml de la solution iodée.

Après avoir ajouté la solution iodée au milieu, elle doit être utilisée immédiatement. Si vous ne souhaitez pas utiliser tout le mélange, procédez comme suit:

10 ml du milieu de base sont répartis dans des tubes, et seulement à ceux à inoculer avec des échantillons, on ajoute 0,2 ml de la solution iodée.

Ceux qui ne seront pas utilisés peuvent toujours être conservés au réfrigérateur, mais comme le milieu n'est pas stérilisé, l'idéal est de préparer la quantité exacte nécessaire.

La couleur du milieu avant l'ajout de la solution iodée d'iode est blanc laiteux avec un précipité blanc et après addition il est brun avec un précipité dense. Le précipité observé est normal et correspond à du carbonate de calcium qui ne se dissout pas. Le pH final du milieu est de 8,4 ± 0,2.

-Variante de bouillon au tétrathionate au vert vif

Pour préparer le bouillon de tétrathionate vert clair, toutes les étapes décrites ci-dessus sont effectuées, mais en plus, 10 ml de la solution vert clair préparée à 0,1% seront ajoutés au mélange.

Vert brillant

Cette solution est préparée comme suit:

Peser 0,1 g de vert clair et mettre en suspension dans 100 ml d'eau distillée. Porter à ébullition pour obtenir une dissolution totale. Conserver dans une bouteille ambrée.

Utilisation

Pour les échantillons de selles (culture de selles), le protocole est le suivant:

Inoculer 1 g de selles solides ou 1 ml de selles liquides dans un tube avec 10 ml de bouillon tétrathionate prêt à l'emploi. Agiter vigoureusement et incuber en aérobie à 43 ° C pendant 6 à 24 heures.

Ensuite, prélever une aliquote de 10 à 20 pi du bouillon et repiquer dans un milieu sélectif pour Salmonella, tel que la gélose SS, la gélose XLD, la gélose vert clair, la gélose entérique Hektoen, entre autres.

En parallèle, les milieux sélectifs pour Salmonella doivent être inoculés avec l'échantillon direct (matières fécales) sans enrichissement. Pour les échantillons rectaux sur écouvillon, déchargez le matériau collecté dans le tube et procédez comme décrit ci-dessus.

Pour les échantillons alimentaires, peser 10 g d'aliment solide ou 10 ml d'aliment liquide et ensemencer un flacon de 100 ml de bouillon tétrathionate prêt à l'emploi. Procéder de la même manière que décrit ci-dessus mais incuber à 37 ° C.

Comme on peut le voir, la relation entre l'échantillon et le bouillon sera toujours de 1:10.

Contrôle de qualité

Des souches témoins connues peuvent être utilisées pour tester le milieu de culture. Les plus utilisées sont les souches certifiées ATCC.

Les souches à utiliser sont Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 et Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Une excellente croissance est attendue pour les souches de Salmonella, tandis qu'Escherichia coli peut avoir une croissance faible ou régulière, et les souches Gram positives (Enterococcus et Staphylococcus) sont partiellement ou totalement inhibées.

recommandations

-Comme ce milieu n'inhibe pas la croissance de Proteus, certains laboratoires utilisent 40 mg / L de novobiocine pour empêcher le développement de cette souche microbienne. L'antibiotique doit être ajouté avant la solution iodée.

-Après avoir préparé le milieu contenant la solution d'iode et d'iode, il ne doit pas prendre plus de 2 heures pour être inoculé.

-Lors de la distribution du milieu dans les tubes, le mélange doit être homogénéisé en continu pour remettre en suspension le précipité formé.

-Dans les échantillons moins contaminés, le bouillon tétrathionate est incubé à 35-37 ° C, et dans les échantillons fortement contaminés, une incubation à 43 ° C est recommandée.

Références

1. Laboratoire Conda Pronadisa. 2010. Base de bouillon de tétrathionate selon Müeller-Kauffmann. Disponible en:
2. Laboratoires BD. 2003. Base de bouillon de tétrathionate. Disponible en:
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