GÉLOSE AU SULFITE DE BISMUTH: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose au sulfite de bismuth est une culture sélective et différentielle en milieu solide, spécialement formulée pour l'isolement de Salmonella enterica sous-espèce enterica sérotype Typhi, entre autres espèces de Salmonella. Le milieu est connu sous le nom d'agar BSA pour son acronyme en anglais Bismuth Sulfite Agar.

La formule originale de la gélose au sulfite de bismuth a été créée en 1927 par Wilson et Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); il contenait du sulfite de sodium, du glucose, une solution de bismuth, du citrate d'ammonium, du sulfate ferreux et de l'agar-agar.

Croissance de 48 heures d'incubation de Salmonella sp sur gélose au sulfite de bismuth. Source: Pixnio.com Auteur: Dr WR Erving, USCDCP

Aujourd'hui, il existe une modification du milieu d'origine, composé d'extrait de viande, de peptones de viande et de caséine, d'indicateur de sulfite de bismuth, de glucose, de phosphate disodique, de sulfate ferreux, de vert vif et d'agar-agar.

Il existe de nombreux moyens d'isoler les espèces de Salmonella, mais lorsqu'il s'agit de récupérer le sérotype Typhi, la gélose au sulfite de bismuth présente un avantage notable sur eux, car dans la plupart des cas, une récupération très faible ou nulle de ce microorganisme est obtenue..

Cependant, il est nécessaire d'utiliser plus d'un type de milieu pour tenter d'isoler des entéropathogènes, car la gélose au sulfite de bismuth est moins efficace pour les autres espèces de Salmonella et pour le genre Shigella, qui sont inhibées ou se développent très mal. dans cette gélose.

Il est à noter que de toutes les espèces de Salmonella, le sérotype Typhi est l'un des entéropathogènes les plus importants chez l'homme, c'est son seul réservoir. Ce sérovar provoque la fièvre typhoïde, la gastro-entérite, la bactériémie et la septicémie.

Pour cette raison, il est pertinent d'inclure cette gélose lors de l'analyse de l'eau, des matières fécales ou des échantillons alimentaires où sa présence est suspectée.

Base

Comme la plupart des milieux de culture, la gélose au sulfite de bismuth contient des nutriments pour favoriser la croissance bactérienne, tels que des peptones et des extraits de viande. De même, le glucose fonctionne comme une source d'énergie et de carbone.

Cependant, toutes les bactéries ne se développeront pas sur ce milieu, car la gélose au sulfite de bismuth est un milieu sélectif. Il contient des composés qui inhibent la croissance des microorganismes Gram positifs et de certaines bactéries Gram négatif. Ces composés sont: l'indicateur sulfite de bismuth et vert clair.

De son côté, le phosphate disodique maintient l'osmolarité et le pH du milieu.

De plus, la gélose au sulfite de bismuth est un milieu différentiel grâce à la présence de sulfate ferreux, qui montre la formation de H ₂ S. Le H ₂ S formé par les bactéries réagit avec le sulfate ferreux et forme un précipité noir insoluble bien visible.

Enfin, l'agar-agar donne la consistance solide au milieu.

préparation

Peser 52,3 g de milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau. Chauffer le mélange à ébullition pendant 1 minute en remuant fréquemment, jusqu'à dissolution complète. Ne surchauffez pas trop. Ce milieu n'est pas autoclavable, car une chaleur extrême endommage le milieu de culture.

Laisser refroidir à 45 ° C et agiter avant de servir dans des boîtes de Pétri stériles. Il est recommandé de réaliser des plaques de bonne épaisseur. Pour ce faire, 25 ml doivent être versés dans chaque assiette. Laissez solidifier. Comme il s'agit d'un milieu non stérilisé, il est normal que son utilisation immédiate soit suggérée.

Cependant, une étude menée par D'aoust en 1977 a montré qu'il y a une meilleure récupération de Salmonella typhimurium et Salmonella enteritidis à mesure que le milieu gélosé au sulfite de bismuth vieillit, sans affecter les performances des sérotypes Typhi et Paratyphi B.

D'aoust recommande d'utiliser les plaques au jour 4 de la réfrigération, bien qu'il prévienne qu'à mesure que le milieu vieillit, la sélectivité diminue et les souches de Proteus vulgaris se développent plus facilement.

Pour cette raison, pour les échantillons hautement contaminés, tels que les matières fécales, il est préférable d'utiliser un milieu fraîchement préparé. Sinon, utiliser au jour 4 de sa préparation. D'autres auteurs recommandent d'utiliser les plaques le lendemain de leur préparation, conservées au réfrigérateur.

Les assiettes réfrigérées doivent être trempées avant utilisation. Le pH du milieu doit être de 7,5 ± 0,2. Le milieu brut est beige et le milieu préparé est opalescent gris verdâtre.

Applications

Parmi les échantillons qui peuvent être plantés dans ce milieu, il y a des échantillons de matières fécales, d'eau potable ou usée et de nourriture.

Pour améliorer les isolats, il est recommandé de réaliser un traitement de pré-enrichissement en bouillon lactose et après enrichissement en bouillon tétrathionate ou bouillon cystine sélénite, avant ensemencement sur gélose au sulfite de bismuth.

Les plaques sont incubées à 35 ° C ± 0,2 pendant 24 à 48 heures, en aérobiose.

Caractéristiques des colonies sur gélose au sulfite de bismuth

Les colonies de Salmonella Typhi sont généralement observées sur cette gélose dans les 24 heures avec un centre noir et entourées d'un halo vert brillant. Alors qu'en 48 heures, ils deviennent complètement noirs en raison de la formation de sulfure d'hydrogène.

-Ce milieu inhibe la plupart des espèces du genre Shigella.

- S. Typhi et S. arizonae peuvent donner des colonies très similaires.

-Les coliformes qui produisent H ₂ S tels que Proteus et Citrobacter produisent des colonies similaires à celles de Salmonella, il est donc nécessaire de réaliser des tests d'identification biochimique.

-Une bonne striation doit être effectuée pour obtenir des colonies isolées; C'est le seul moyen d'observer les caractéristiques typiques des colonies du genre Salmonella.

Contrôle de qualité

Pour le contrôle de stérilité, une plaque non ensemencée est incubée à 37 ° C, on s'attend à ce qu'il n'y ait pas de croissance ou de changement de couleur.

Pour le contrôle qualité, des souches connues telles que:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

On s'attend à ce que Escherichia coli et Shigella flexneri soient partiellement inhibés par le développement de colonies brun verdâtre et brunes respectivement. Alors que les deux salmonelles doivent avoir un excellent développement avec des colonies noires avec un éclat métallique, et enfin Enterococcus faecalis doit être totalement inhibé.

Références

1. Wilson, W. et EM McV. Blair. Utilisation d'un milieu de fer sulfite de glucose-bismuth pour l'isolement de B. typhosus et B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Récupéré de.jstor.org
2. D'aoust JY. Effet des conditions de stockage sur les performances de la gélose au sulfite de bismuth. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Disponible dans: ncbi.nlm.nih.gov
3. Laboratoires IVD. Gélose au bismuth-sulfite selon WILSON-BLAIR. 2009. Disponible sur: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
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