GÉLOSE NUTRITIVE: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose nutritive est un milieu non sélectif et aucune culture solide différentielle. Toutes sortes de bactéries qui ne sont pas exigeantes d'un point de vue nutritionnel se développent dans ce milieu.

C'est un milieu simple et, malgré son nom, il contient une valeur nutritionnelle inférieure par rapport à d'autres milieux similaires, tels que la gélose d'infusion de cœur cerveau ou la gélose trypticase soja.

Nombre de colonies sur gélose nutritive

Son utilité en laboratoire est très variée. Il est principalement utilisé pour la sous-culture des espèces, le maintien des souches, le comptage des colonies, comme base de préparation de la gélose au sang, entre autres.

De même, en raison de sa couleur beige clair, la production de pigments générés par certaines souches bactériennes peut être exceptionnellement distinguée, comme le pigment verdâtre de Pseudomonas aeruginosa, le pigment rouge brique produit par Serratia marcescens à température ambiante, le pigment jaune doré de Staphylococcus aureus, entre autres.

De plus, c'est l'un des supports de culture les moins chers du marché.

Base

Comme déjà mentionné ci-dessus, il s'agit d'un milieu très simple qui repose sur la fourniture de nutriments pour la croissance bactérienne sans restriction et sans réactions complexes à interpréter.

Le milieu étant translucide, il est idéal pour compter les colonies par la méthode de semis en profondeur.

Composition

Il est composé principalement d'extrait de viande ou d'extrait de levure, de peptones ou de gélatine digestive pancréatique, d'agar-agar, de chlorure de sodium et d'eau distillée.

L'extrait de viande ou de levure et les peptones représentent les sources essentielles de carbone et de minéraux (azote, phosphore et soufre), qui seront utilisés par les bactéries comme source d'énergie et de facteurs de croissance.

De même, l'agar-agar est la base de tous les milieux de culture solides, venant remplacer la gélatine, qui fut le premier composé de base utilisé par Robert Koch pour donner une consistance solide à ses milieux.

L'agar est un polysaccharide composé de galactose, de galactomannane, d'agarose et d'agaropectine. Il prend à 40 ° C et fond à près de 100 ° C.

De son côté, le chlorure de sodium confère au milieu l'osmolarité nécessaire au développement bactérien.

Enfin, l'eau sert à hydrater et à dissoudre les composés lyophilisés. De l'eau distillée ajustée à un pH neutre doit être utilisée. L'eau du robinet ne doit pas être utilisée car elle contient du calcium et du magnésium qui peuvent réagir avec les phosphates dans le milieu et former des sels insolubles.

préparation

Pour un litre d'agar nutritif, 31 g de milieu déshydraté doivent être pesés. Placez-le dans un ballon et dissolvez-le dans un litre d'eau distillée. Après 5 minutes de repos, chauffer sur une source de chaleur et mélanger constamment jusqu'à ébullition pendant 1 à 2 minutes.

Préparation du milieu de culture.

Le ballon est ensuite placé dans un autoclave et stérilisé à 121 ° C pendant 20 minutes.

Stérilisation en autoclave

À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et servi dans des boîtes de Pétri stériles, à l'aide d'une hotte à flux laminaire ou du bec Bunsen.

Si les boîtes de Pétri sont à usage unique (plastique), le milieu doit être distribué lorsque la gélose a une température d'environ 50 ° C, pour éviter qu'elles ne soient déformées par une chaleur excessive.

Laisser solidifier et conserver sur un support de plaque inversé et réfrigérer à 2-8 ° C jusqu'à utilisation.

Les plaques doivent être trempées avant d'être ensemencées. Les plaques d'agar nutritif ne doivent pas être utilisées si elles sont contaminées ou déshydratées.

Le pH du milieu préparé doit être ajusté à 7,3 ± 0,2.

Applications

C'est le milieu de culture le plus simple utilisé dans le laboratoire de microbiologie. Sa formulation est excellente pour la croissance de bactéries non exigeantes.

Ses principales utilisations sont expliquées ci-dessous:

Comme base pour la préparation de gélose au sang

Ce milieu est parfois utilisé comme base pour préparer la gélose au sang, mais ce n'est pas la base la plus couramment utilisée.

Stimule la sporulation des bactéries sporulantes

Ce milieu de culture est particulièrement utile pour stimuler la sporulation de bactéries sporulantes telles que Bacillus sp.

Pour cela, une souche du genre Bacillus est semée et incubée pendant 24 heures à 37 ° C en aérobiose. Une fois que les colonies ont grandi, la plaque est soumise à un stress thermique, c'est-à-dire que la température du four est augmentée à 44 ° C et laissée pendant 24 heures supplémentaires ou placée au réfrigérateur pendant 24 heures.

À la fin du temps, des frottis de la culture sont réalisés et colorés avec une coloration de Gram ou avec une coloration de spores de Shaeffer-Fulton. On y observera les bacilles avec des endospores (spores à l'intérieur du bacille) et des exospores (spores à l'extérieur du bacille).

Entretien des souches

Certains laboratoires de soutien à la recherche ou à l'enseignement universitaire nécessitent de maintenir le plus longtemps possible des bactéries viables d'importance clinique, afin d'utiliser la banque de bactéries (bacterioteca) pour des travaux de recherche ou pour la préparation de pratiques d'enseignement, où le Les élèves apprendront à manipuler et à identifier ces micro-organismes.

La gélose nutritive, ainsi que la gélose d'infusion cerveau-cœur, peuvent être utilisées à cette fin. La gélose est préparée, versée dans des tubes avec un couvercle en bakélite et inclinée sur une base, de telle sorte que la gélose se solidifie en formant un bloc au fond et un biseau en surface (bec de cannelure).

Chaque tube est étiqueté avec le nom de la bactérie à semer et la date. Chacune des bactéries sera ensemencée sur la lunette et incubée pendant 24 heures Une fois les colonies cultivées, les tubes sont conservés à température ambiante.

La bactériotèque doit être renouvelée de 1 à 3 mois, pour éviter la contamination et la déshydratation du milieu et ainsi que la mort des bactéries.

Seules les bactéries non pointilleuses peuvent être maintenues de cette manière.

Nombre de colonies

Bien qu'il existe des moyens spécialisés pour compter les colonies, comme la gélose de comptage standard, la gélose nutritive peut être utilisée à cette fin, soit par ensemencement en surface avec une spatule drigalski, soit en profondeur. Pour cette raison, il est très utile dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau.

Exécution de tests de diagnostic

Parce que c'est un milieu qui ne contient pas de sang, ni aucun autre additif, il est idéal pour prélever des colonies cultivées sur ce milieu pour effectuer le test de catalase.

De même, en raison de sa couleur claire, il est indiqué d'effectuer des tests d'oxydase directement sur une zone de la gélose ensemencée, sans interférence.

Récupération des aérobies mésophiles des eaux salées récréatives (plages)

La gélose nutritive préparée avec 10% d'eau de mer est utile pour l'évaluation des aérobies mésophiles dans les eaux de plage.

De cette manière, le niveau réel de contamination que les eaux ont avec ces microorganismes peut être apprécié, car dans ce type d'échantillons les résultats se chevauchent lors de l'utilisation de milieux de culture préparés de manière conventionnelle.

Cela a été démontré par Cortez et al. en 2013 dans un travail de recherche.

Cela peut s'expliquer par le changement brusque que subissent les bactéries lorsqu'elles passent d'un environnement hypersalé à un environnement pauvre en sel, par conséquent les micro-organismes entrent dans un état de léthargie dans lequel ils sont viables, mais non cultivables.

Références

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