GÉLOSE MACCONKEY: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose MacConkey est un milieu solide qui permet l'isolement exclusif des bactéries Gram négatif. Pour cette raison, il s'agit d'un milieu sélectif et permet également de faire la distinction entre les bacilles fermentant du lactose et les bacilles non fermentants, ce qui en fait un milieu différentiel. C'est l'un des milieux de culture les plus utilisés dans un laboratoire de microbiologie.

Ce milieu est principalement utilisé pour l'isolement des bacilles Gram négatifs appartenant à la famille des Enterobacteriaceae, y compris les espèces opportunistes et entéropathogènes.

Gélose MacConkey ensemencée avec deux types de bactéries. Colonies de fermentation du lactose du côté gauche, colonies de fermentation du côté droit sans lactose.

Il peut également être utilisé pour isoler d'autres bacilles entériques qui vivent dans le tractus gastro-intestinal, mais n'appartiennent pas aux Enterobacteriaceae, comme Aeromonas sp, Plesiomonas sp, entre autres.

Enfin, il peut isoler d'autres bacilles Gram négatifs non fermentants du glucose que l'on trouve dans l'environnement, l'eau ou les sols, mais qui peuvent parfois être des pathogènes opportunistes tels que Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, entre autres.

Base

Gélose MacConkey

Le fondement de ce support peut être expliqué à travers la description de ses composants, car chacun a un but qui en détermine une propriété.

Sels biliaires et cristal violet

En ce sens, la gélose MacConkey a une composition complexe. Tout d'abord, il contient des sels biliaires et du cristal violet.

Ces éléments sont responsables de l'inhibition de la croissance des bactéries Gram positives et de certains bacilles Gram négatifs fastidieux. À son tour, il favorise le développement de bacilles à Gram négatif qui ne sont pas affectés par ces substances. C'est donc un milieu sélectif.

On dit qu'il est légèrement sélectif par rapport à d'autres milieux qui inhibent également la croissance des bactéries à Gram positif et de la plupart des bactéries à Gram négatif.

Peptones, polypectones et lactose

Il contient des substances qui fournissent les nutriments nécessaires aux micro-organismes qui se développent dans cet environnement, tels que les peptones, les polypectones et le lactose.

Le lactose est le point clé pour que le milieu soit un milieu différentiel, car les micro-organismes qui ont la capacité de fermenter le lactose développeront de fortes colonies roses.

Certaines bactéries peuvent fermenter le lactose lentement ou faiblement, développer des colonies rose pâle et rester positives pour le lactose.

Ceux qui ne fermentent pas le lactose utilisent des peptones comme source d'énergie, produisant de l'ammoniaque, alcalinisant le milieu. Pour cette raison, les colonies originaires sont incolores ou transparentes.

Indicateur de pH

Le changement de couleur est obtenu grâce à un autre composé essentiel de la gélose MacConkey. Ce composé est l'indicateur de pH, qui dans ce cas est rouge neutre.

La fermentation du lactose génère la production d'acides mixtes. Ils acidifient le milieu à un pH inférieur à 6,8.

Cela fait tourner l'indicateur de pH vers une teinte rose foncé. L'intensité de la couleur peut varier en fonction du pH final.

Eau distillée, chlorure de sodium et agar

D'autre part, il contient de l'eau distillée et du chlorure de sodium qui confèrent au milieu une hydratation et un équilibre osmotique. Enfin, le milieu contient de la gélose, qui est la base qui assure la consistance du milieu solide.

Le milieu gélosé MacConkey préparé doit avoir un pH final ajusté à 7,1 ± 0,2.

préparation

Pour un litre de gélose MacConkey, il faut peser 50 g du milieu déshydraté, puis placer dans un ballon et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Après 10 minutes de repos, il est chauffé, en mélangeant constamment jusqu'à ébullition pendant 1 minute.

Le ballon est ensuite placé dans l'autoclave et stérilisé à 121 ° C pendant 20 minutes. À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et laissé refroidir jusqu'à atteindre une température de 45 ° C, pour servir plus tard dans des boîtes de Pétri stériles à l'intérieur d'une hotte à flux laminaire ou devant le bec Bunsen.

Laisser se solidifier et conserver dans un support de plaque inversé et réfrigérer au réfrigérateur à 2-8 ° C jusqu'à utilisation.

Pour obtenir une gélose MacConkey qui inhibe l'effet de gonflement produit par le genre Proteus, une gélose MacConkey à faible teneur en sel est utilisée.

Utilisations de la gélose MacConkey conventionnelle

La MacConkey Agar est incluse dans tous les ensembles de milieux de culture conçus pour le semis d'échantillons cliniques reçus au laboratoire. Il est également utile en microbiologie alimentaire et en microbiologie environnementale.

La variété de bâtonnets Gram négatifs qui poussent dans ce milieu exprime des caractéristiques phénotypiques qui permettent de poser un diagnostic présomptif de l'espèce en question. Par exemple, la taille, la couleur, la consistance et l'odeur des colonies sont quelques-unes des caractéristiques qui peuvent guider.

Dans ce milieu, les espèces Escherichia coli, Klebsiella sp et Enterobacter sp produisent de fortes colonies roses, entourées d'une zone de bile précipitée.

Alors que les bactéries telles que Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp et Hafnia sp peuvent apparaître incolores après 24 heures ou rose pâle en 24 à 48 heures.

De même, les genres Proteus, Edwadsiella, Salmonella et Shigella produisent des colonies incolores ou transparentes.

Autres variantes de la gélose MacConkey

Il existe d'autres variantes de MacConkey Agar qui ont des objectifs spécifiques. Ils sont mentionnés ci-dessous:

Gélose MacConkey au sorbitol

Ce milieu a été conçu pour distinguer la souche entéropathogène (Escherichia coli entérohémorragique O157: H7) du reste des souches d'Escherichia coli.

Ce milieu échange le lactose glucidique contre le sorbitol. Les souches d'E. Coli entérohémorragiques O157: H7 diffèrent des autres car elles ne fermentent pas le sorbitol et donc des colonies transparentes sont obtenues, alors que le reste des souches d'E. Coli fermentent le sorbitol et les colonies sont de couleur rose vif.

Gélose MacConkey sans cristal violet, ni sel

Cette gélose diffère grandement de la gélose MacConkey classique, car elle ne contient pas de cristal violet et des bactéries Gram positives peuvent se développer.

En revanche, l'absence de sel inhibe l'apparition d'essaimage sur la gélose produite par certains bacilles entériques, comme ceux du genre Proteus, et facilite ainsi l'isolement de toutes les bactéries présentes, y compris les bactéries Gram positives.

Gélose MacConkey avec céfopérazone

Cette variante de la gélose MacConkey a été conçue pour isoler initialement Laribacter hongkongensis et s'est par la suite révélée utile pour l'isolement d'Arcobacter butzleri. Les deux sont des bâtonnets Gram négatifs légèrement incurvés résistants à la céfopérazone.

Ces bactéries ont récemment été associées pour provoquer une gastro-entérite et une diarrhée acquise chez des individus asiatiques et européens, émergeant comme deux puissants agents pathogènes émergents.

L'antibiotique permet d'inhiber la flore qui l'accompagne du tractus gastro-intestinal, ce qui favorise le développement de ces bactéries, en évitant qu'elles ne passent inaperçues, puisqu'elles mettent 72 heures à se développer.

Gélose MacConkey préparée avec de l'eau de mer à 10% v / v

Cette variante est utile pour l'évaluation des indicateurs sanitaires bactériens de contamination fécale, y compris les coliformes totaux et les coliformes fécaux dans les eaux salées de loisirs (plages et baies).

Cortez et al en 2013 ont démontré que le milieu ainsi préparé augmente significativement la récupération de ces microorganismes en milieu salin, par rapport à l'utilisation de la gélose MacConkey préparée avec de l'eau distillée.

Ceci est dû au fait que le milieu modifié stimule la croissance de bactéries qui sont physiologiquement dans un état de latence «viables mais non cultivables», donc elles ne sont pas récupérables dans les milieux conventionnels.

Références

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT et coll. Utilisation de la gélose de céfopérazone MacConkey pour l'isolement sélectif de Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. Gélose MacConkey. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 4 avril 2018, 18:16 UTC. 29 déc.2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. (5e éd.). Argentine, Editorial Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effet des milieux de culture préparés avec de l'eau de mer sur les indicateurs de santé dans les eaux marines des spas de Chichiriviche, État de Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinique pratique. Université de Cadix, 2e édition. Service des publications de l'UCA.