- Base
- préparation
- Préparation de gélose à la semoule de maïs maison
- Gélose commerciale à la farine de maïs
- Gélose à la farine de maïs avec Tween 80
- Gélose à la farine de maïs avec glucose
- Utilisation
- Semé
- Démonstration de chlamydospore
- Entretien des souches fongiques
- Contrôle de qualité
- Limites
- Références
La gélose de semoule de maïs est un milieu de culture solide, à faible pouvoir nutritionnel, utile pour la sous-culture de certains champignons et pour la mise en évidence des chlamydospores dans des souches du complexe Candida albicans. En anglais, il est connu sous le nom de Corn Meal Agar.
Le milieu de semoule de maïs conventionnel a une composition très simple, il contient de la semoule de maïs, de l'agar-agar et de l'eau. En raison de son faible niveau nutritionnel, il est idéal pour une utilisation dans le maintien de souches fongiques pendant des périodes modérées, en particulier les champignons noirs.
A. Représentation graphique du complexe Candida albicans sur gélose à la farine de maïs. B. Chlamydospores du complexe Candida albicans vues au microscope, formées sur gélose à la semoule de maïs. Source: A. GrahamColm / B. Par: CDC / Dr. William Kaplan, avec la permission de: Public Health Image Library.
La sporulation du complexe Candida albicans est favorisée dans ce milieu, si 1% de Tween 80 est ajouté lors de la préparation de la gélose. La formation de chlamydospores est caractéristique de cette espèce et pratiquement la seule qui affecte les humains.
Il existe d'autres espèces qui forment des chlamydospores, mais il est peu probable qu'elles affectent les humains, comme Candida australis, présente dans les excréments de pingouin, ou C. clausenii, qui est un saprophyte rarement rencontré. De même, exceptionnellement les espèces C. stellatoidea et C. tropicalis pourraient en former.
En revanche, l'ajout de glucose au milieu de semoule de maïs favorise la formation de pigments dans les souches de Trichophytom rubrum.
Il est important de souligner qu'il existe des champignons qui ne forment pas d'hyphes ou de pseudohyphaes dans la gélose à la semoule de maïs, comme Cryptococcus neoformans, qui diffèrent des autres genres.
La gélose à la semoule de maïs peut être fabriquée à domicile en laboratoire ou des milieux commerciaux peuvent également être utilisés.
Base
La semoule de maïs est le substrat, la gélose est l'agent de solidification et l'eau est le solvant.
La gélose à la semoule de maïs peut être complétée par du Tween 80 (monooléate de sorbitan ou polyester polysorbate 80). Ce composé réduit la tension superficielle du milieu grâce à son pouvoir émulsifiant.
Il crée également un environnement hostile qui inhibe la multiplication cellulaire exagérée et stimule la croissance des hyphes, favorisant également la production de chlamydospores; ces derniers considéraient des structures de résistance. Cette structure aide à l'identification des espèces de Candida albicans.
De son côté, le glucose dans ce milieu augmente la capacité pigmentaire de certains champignons.
Il est à noter que le milieu de semoule de maïs avec glucose n'est pas utile pour la mise en évidence des chlamydospores dans le complexe Candida albicans.
préparation
Préparation de gélose à la semoule de maïs maison
Peser 47 g de farine de maïs jaune et dissoudre dans 500 ml d'eau distillée. Chauffer à 60 ºC, tout en remuant la préparation pendant environ 1 heure. Puis filtrer à travers un morceau de gaze et de coton, éventuellement il peut être filtré à nouveau en faisant passer la préparation sur un papier filtre Whatman n ° 2.
Compléter le volume à 1000 ml avec de l'eau distillée. Ajouter 17 g d'agar-agar, chauffer jusqu'à dissolution. Autoclave pendant 15 minutes à 121 ºC.
Servir dans des boîtes de Pétri stériles. Conserver au réfrigérateur.
La couleur du milieu préparé est blanchâtre avec un aspect grumeleux.
Si vous souhaitez préparer de la farine de maïs avec du glucose à la préparation décrite ci-dessus, ajoutez 10 g de glucose.
Gélose commerciale à la farine de maïs
Peser 17 g du milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange peut être chauffé en secouant doucement pour se dissoudre complètement. Stériliser dans un autoclave à 121 ºC, à 15 lb, pendant 15 minutes.
Verser dans des boîtes de Pétri stériles. Laissez solidifier. Inverser et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Revenu avant utilisation.
Le pH doit être de 6,0 ± 0,2 à 25 ºC.
Gélose à la farine de maïs avec Tween 80
Pour être conforme à la norme ISO 18416, la gélose à la semoule de maïs doit être préparée comme suit:
Pesez 65 grammes par litre et ajoutez 10 ml de Tween 80. Chauffez et faites bouillir pendant quelques minutes jusqu'à dissolution, en prenant soin de ne pas trop surchauffer. Stériliser à 121 ºC pendant 15 minutes.
Gélose à la farine de maïs avec glucose
Pour améliorer le pouvoir chromogène des colonies de Trichophyton rubrum et les différencier de T. mentagrophytes, 0,2% de glucose peut être ajouté à la formule originale. Vous n'avez pas besoin de Tween 80, car le glucose inhibe la formation de chlamydospores.
Utilisation
Principalement, l'utilisation de la gélose à la farine de maïs est destinée à l'étude des souches de Candida, aidant à leur identification par l'observation caractéristique des chlamydospores chez les albicans. Autrement dit, l'utilisation de cette gélose sert de méthode auxiliaire d'identification de ces levures.
Des espèces saprophytes et pathogènes peuvent se développer sur cette gélose, mais chacune forme des structures mycéliennes caractéristiques. Par exemple, les espèces du genre Torulopsis ne produisent pas de mycélium et se reproduisent uniquement par blastoconidies.
De même, les espèces Trichosporon et Geotrichum produisent des arthroconidies sur de la gélose à la farine de maïs et il est parfois difficile de faire la distinction entre l'une et l'autre.
Les arthroconidies du genre Geotrichum produisent une extension des hyphes ressemblant à un bâton de hockey.
La production de pigments en utilisant de la gélose à la farine de maïs additionnée de glucose est également utile dans l'identification de Trichophytom rubrum.
Semé
Les colonies suspectes de Candida obtenues dans le milieu de culture primaire - gélose Sabouraud - à partir d'échantillons cliniques, cosmétiques, sols, entre autres, sont repiquées sur gélose à la farine de maïs. Le milieu est ensemencé et incubé à 22 ° C pendant 24 à 48 heures. Le temps d'incubation peut être prolongé si nécessaire.
Démonstration de chlamydospore
Pour cela, la gélose à la farine de maïs avec Tween 80 doit être ensemencée selon la technique Dalmau. Cette méthode consiste à prélever une partie de la colonie suspectée avec la poignée en platine et à faire trois coupes parallèles au milieu, en maintenant la poignée à 45 °. Les coupes doivent être séparées par une distance de 1 cm les unes des autres.
Ensuite, un objet de couverture précédemment flammé est placé sur les stries qui ont été semées, de telle sorte que la moitié est couverte et l'autre est découverte.
Incuber les plaques ensemencées à 30 ° C pendant 48 à 72 h, puis les examiner au microscope à travers la lamelle.
Entretien des souches fongiques
Pour maintenir les souches, les plaques ensemencées et cultivées sont conservées au réfrigérateur (4 à 8 ºC). De cette manière, ils peuvent durer plusieurs semaines et être utilisés à des fins d'enseignement ou de recherche.
Contrôle de qualité
Pour le contrôle de stérilité, une plaque est incubée sans inoculation à température ambiante, on s'attend à ce qu'il n'y ait pas de croissance ou de changement de couleur.
Pour le contrôle de qualité, des souches connues peuvent être semées telles que: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.
Les résultats attendus sont une inhibition partielle de S. aureus et E. coli. Alors qu'une croissance satisfaisante est attendue dans le reste des souches.
Aspergillus niger se développe avec des colonies noires et sporulées en un temps approximatif de 5 jours d'incubation.
Colonies de levures Candida albicans avec production de chlamydospores.
Saccharomyces cerevisiae produit de grandes cellules de levure.
Limites
Un précipité jaune se forme au fond de la plaque qu'il ne faut pas confondre avec les colonies.
Références
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- Microkit des milieux de culture. Agar à la farine de maïs. Disponible sur: Medioscultivo.com.
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- Casas-Rincón G. Mycologie générale. 1994. 2e éd. Université centrale du Venezuela, éditions de la bibliothèque. Venezuela Caracas.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
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