GÉLOSE BHI: FOND DE TEINT, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose BHI ou Brain Heart Infusion agar est une culture solide nutritive. En espagnol, nous l'appelons gélose d'infusion cerveau-cœur. Il s'agit d'un milieu de culture non sélectif, ce qui signifie que tous les types de bactéries Gram positives et Gram négatives peuvent se développer, ainsi que certaines levures et champignons filamenteux.

Il est composé d'une infusion de cerveau et de cœur de veau, d'hydrolysat peptique de tissus animaux, d'hydrolysat pancréatique de caséine, de chlorure de sodium, de glucose, de phosphate disodique et d'agar.

Plaques BHI. Source: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil.

Il est à noter que la gélose BHI est l'un des milieux de culture les plus utilisés dans les laboratoires de bactériologie. Il peut être utilisé sans supplément comme culture primaire, sous-culture de colonies obtenues sur d'autres milieux sélectifs ou pour le maintien des souches en laboratoire.

En revanche, c'est un milieu idéal pour être utilisé comme base dans la préparation de milieux enrichis, tels que la gélose au sang et la gélose au chocolat. Les deux sont idéaux pour isoler les micro-organismes exigeants d'un point de vue nutritionnel. Cependant, il convient de noter que, dans la mesure où il contient du glucose, il ne convient pas pour observer les profils d'hémolyse.

De même, la gélose BHI peut être utilisée pour la préparation de milieux spéciaux pour l'isolement de microorganismes pathogènes difficiles à cultiver dans des milieux communs, parmi lesquels: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae et Histoplasma capsulatum.

Avec l'additif antibiotique, la gélose BHI devient un milieu sélectif pour l'isolement des champignons.

Base

C'est un milieu de culture nutritif pour isoler les micro-organismes moyennement exigeants, et son enrichissement peut être augmenté avec l'ajout de sang et d'autres suppléments nutritionnels.

C'est un milieu de culture non sélectif, il permet donc la croissance de la plupart des bactéries Gram positives et Gram négatives, ainsi que de certains champignons. Cependant, il peut être rendu sélectif avec l'ajout d'antibiotiques.

Le milieu contient une infusion de cerveau et de cœur de veau, un hydrolysat peptique de tissus animaux et un hydrolysat pancréatique de caséine; Tous ces composés agissent comme des sources de vitamines, d'acides aminés, d'azote et de carbone.

Le glucose est un glucide qui fournit de l'énergie aux micro-organismes une fois qu'ils l'ont fermenté. Pendant ce temps, le chlorure de sodium et le phosphate disodique maintiennent l'équilibre osmotique et fournissent un pH proche de la neutralité. Enfin, l'agar donne la consistance solide moyenne.

préparation

Peser 52 grammes du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Porter le mélange à une source de chaleur jusqu'à ébullition, en remuant fréquemment pendant le processus de dissolution.

Les plaques ou coins d'agar BHI peuvent être préparés sans additifs.

Cales

Pour la préparation des quartiers, servez la préparation jusqu'à ce que la moitié de chaque tube soit remplie, couvrez et stérilisez dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, en partant, posez sur une base jusqu'à ce qu'elles se solidifient. Conserver plus tard au réfrigérateur jusqu'à utilisation.

Cales BHI pour bacterioteca. Source: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil.

Plaques

Le mélange dissous est autoclavé à 121 ° C pendant 15 minutes, en le quittant, on le laisse refroidir à 50 ° C et 20 ml du milieu sont servis dans des boîtes de Pétri stériles. Ils sont autorisés à se solidifier, sont retournés et conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation. Laisser les plaques revenir à température ambiante avant de semer.

Le pH du milieu doit rester à 7,4 ± 0,2.

Le support brut est de couleur beige et le support préparé est de couleur ambre clair.

Préparation de la gélose au sang

Après avoir stérilisé le milieu, refroidir à une température d'environ 45 à 50 ° C, puis ajouter le sang (50 ml), mélanger doucement pour homogénéiser et servir aseptiquement 20 ml dans chaque boîte de Pétri. Si des bulles se forment sur la plaque, la flamme du briquet doit passer rapidement sur les bulles pour les éliminer.

De même, des milieux spéciaux peuvent être préparés en ajoutant les additifs correspondants lorsque le mélange atteint une température de 45 à 50 ° C.

Le médium reste rouge cerise.

Applications

Utiliser sans suppléments

La gélose BHI sans additifs est utile comme culture primaire et pour semer des souches pures de micro-organismes peu ou moyennement exigeants pour leur identification ultérieure.

Comme il s'agit d'un milieu de couleur claire, il est idéal pour observer les pigments et, comme il ne contient pas de substances interférentes, certains tests biochimiques, tels que l'oxydase et la catalase, peuvent être effectués dessus, ou d'autres tests biochimiques peuvent être montés à partir de colonies à partir de ce gélose.

De même, les quartiers de gélose BHI sont largement utilisés pour le maintien des souches pendant un certain temps en laboratoire (bacterioteca).

Les plaques ou cales ensemencées en surface avec des souches bactériennes sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures. Pendant ce temps, chez les champignons, la température et le temps d'incubation dépendront du type de champignon recherché.

Comme gélose de base pour la préparation d'autres milieux

Avec cette base, des milieux enrichis et sélectifs peuvent être préparés.

Enrichi

Sa fonction principale est de servir de base à la préparation de gélose au sang pour une utilisation courante dans les laboratoires de microbiologie. En particulier, la base BHI est propice à l'isolement de Streptococcus sp. Cependant, il présente l'inconvénient de ne pas convenir à l'observation des schémas d'hémolyse car il contient du glucose.

Il est également utilisé dans la préparation de gélose au sang de lapin ou de cheval pour l'isolement d'Haemophilus sp. Pour de meilleurs résultats, un supplément d'enrichissement (IsoVitaleX) peut être ajouté.

Si les échantillons proviennent des voies respiratoires, de la bacitracine peut être ajoutée à la gélose pour inhiber la flore qui l'accompagne et augmenter la probabilité de récupération de l'Haemophilus sp.

En variante, de la gélose au sang (d'agneau ou humaine) avec du tellurite de cystine peut être préparée pour isoler Corynebacterium diphtheriae. De même, il est utile de préparer de la gélose au sang de lapin, avec l'ajout de cystine et de glucose pour l'isolement de Francisella tularensis.

L'ensemencement des plaques de gélose au sang se fait par épuisement et elles sont incubées à 35-37 ° C pendant 24-48 heures en microaérophilie (5-10% CO ₂).

Sélectif

Ce milieu additionné d'antibiotiques peut remplacer la gélose Sabouraud pour l'isolement des champignons.

L'association de la gélose BHI avec le chloramphénicol - gentamicine ou pénicilline -, la streptomycine et le sang de cheval est idéale pour l'isolement d'Histoplasma capsulatum.

Selon le microorganisme à isoler, une incubation à 35-37 ° C ou à température ambiante en aérobiose est recommandée. Parfois, une incubation est nécessaire dans les deux plages de température, en utilisant 2 plaques pour cela.

Certains champignons tels que Trichophyton mentagrophytes doivent être incubés à température ambiante jusqu'à 7 jours.

Contrôle de qualité

A partir de chaque lot préparé, il est recommandé d'incuber 1 plaque ou coin à 37 ° C pendant 24 heures et de vérifier qu'il n'y a pas de croissance; Il est particulièrement important lors de la préparation de la gélose au sang, car il s'agit d'un milieu facilement contaminé.

D'autre part, la qualité du milieu peut être évaluée en inoculant des souches standards connues ou certifiées et en observant leur développement.

En ce sens, pour évaluer la gélose BHI sans additifs, on peut utiliser des souches d'Escherichia coli ATCC 25922, de Staphylococcus aureus ATCC 25923 ou de Candida albicans ATCC 10231. Elles sont incubées à 37 ° C en aérobiose pendant 24 à 48 heures. Dans tous les cas, une croissance satisfaisante est attendue.

Des souches de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ou Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 peuvent être ensemencées pour évaluer des plaques de gélose au sang.

Les souches bactériennes sont incubées à 37 ° C en microaérophilie pendant 24 heures, tandis que le champignon est incubé à température ambiante dans une chambre humide jusqu'à 7 jours. Une croissance satisfaisante est attendue dans tous les cas.

Références

1. Laboratoires Britannia. Gélose d'infusion cerveau-cœur. 2015. Disponible sur: britanialab.com.
2. Laboratoires BD. Gélose Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Disponible sur: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Gélose pour infusion cerveau-cœur. 2009.
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5. Gélose Gil M. Blood: fondation, utilisations et préparation. 2018. Disponible sur: lifeder.com.
6. Contributeurs Wikipedia. Infusion de cœur de cerveau. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 19 septembre 2018, 03:58 UTC. Disponible sur: wikipedia.org. Consulté le 2 mars 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.