GÉLOSE BAIRD PARKER: FONDATION, PRÉPARATION ET UTILISATION - LA BIOLOGIE - 2025

La gélose Baird Parker est une culture sélective et différentielle en milieu solide. Il a été créé en 1962 pour la détection et le comptage des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus).

Il est composé d'hydrolysat pancréatique de caséine, d'extrait de viande, d'extrait de levure, de chlorure de lithium, de glycine, de pyruvate de sodium, de tellurite de potassium, d'agar et d'émulsion de jaune d'oeuf.

Colonies typiques de Staphylococcus aureus sur gélose Baird Parker. Source: Daizy John

La gélose Baird Parker est basée sur la capacité de S. aureus à réduire la tellurite et à produire de la lécithinase. Les deux propriétés génèrent une colonie avec des caractéristiques spécifiques pour cette espèce. Par conséquent, il est très efficace pour détecter ce micro-organisme.

Les colonies typiques de S. aureus sont noires ou gris foncé, avec une bordure incolore et un halo clair qui les entoure, les différenciant des autres micro-organismes. Cet agent pathogène peut être trouvé dans les échantillons cliniques, les eaux, les cosmétiques et les aliments crus ou cuits.

Son diagnostic ou sa détection est de la plus haute importance, en raison de la variété des pathologies qu'il produit, telles que l'intoxication alimentaire, le syndrome de la peau échaudée, le syndrome de choc toxique, les abcès, la méningite, la septicémie, l'endocardite, entre autres.

Base

Pouvoir nourrissant

L'hydrolysat pancréatique de caséine, l'extrait de viande et l'extrait de levure sont les sources de nutriments, de vitamines et de minéraux nécessaires au développement microbien général, tandis que le pyruvate et la glycine sont des composés qui favorisent la croissance spécifique de Staphylococcus aureus.

Sélectif

La Baird Parker Agar est sélective car elle contient des substances qui inhibent la croissance de la flore qui l'accompagne, tout en favorisant le développement de S. aureus. Les composés inhibiteurs sont le chlorure de lithium et le tellurite de potassium.

Différentiel

Ce milieu permet de différencier S. aureus du reste des staphylocoques à coagulase négative. S. aureus a la capacité de réduire la tellurite en tellure noir métallique libre, formant des colonies noires ou gris foncé.

De même, le jaune d'oeuf fournit les substrats pour démontrer la présence de l'enzyme lécithinase et lipase. S. aureus est positif à la lécithinase et par conséquent un halo clair sera observé autour de la colonie, indiquant que la lécithine a été hydrolysée.

En ce sens, l'apparition sur cette gélose de colonies noires brillantes ou gris foncé entourées d'un léger halo indique la présence de S. aureus.

Si une zone de précipitation se forme, cela indique une activité lipase. Certaines souches de S. aureus sont positives pour la lipase et d'autres négatives.

Dans le cas où S. aureus est lipase positive, une zone opaque sera observée autour de la colonie noire ou gris foncé, puis un léger halo dû à l'action de la lécithinase.

Les colonies de bactéries autres que S. aureus capables de se développer sur ce milieu développeront des colonies incolores ou brunes sans halo environnant.

Des colonies noires atypiques peuvent également être vues avec ou sans bordure incolore, mais sans halo léger. Ces colonies ne doivent pas être prises en compte, elles ne correspondent pas à S. aureus.

préparation

Émulsion de jaune d'oeuf

Prenez un œuf de poule frais, lavez-le bien et placez-le dans de l'alcool à 70% pendant 2 à 3 heures. L'œuf est ensuite ouvert de manière aseptique et le blanc est soigneusement séparé du jaune. Ensuite, 50 ml de jaune sont prélevés et mélangés à 50 ml de solution physiologique stérile.

Tellurite de potassium 1% p / v

Certaines maisons commerciales vendent du tellurite de potassium à 1% prêt à l'emploi. Il est ajouté au milieu avant que le milieu ne se solidifie.

Pour préparer cette solution en laboratoire, 1,0 g de tellurite de potassium est pesé et dissous dans une partie d'eau. Par la suite, la quantité d'eau est complétée jusqu'à atteindre 100 ml. La solution doit être stérilisée par la méthode de filtration.

Préparation du milieu de culture

Peser 60 g du milieu déshydraté et dissoudre dans 940 ml d'eau distillée. Laisser reposer le mélange pendant environ 5 à 10 minutes.

Appliquez de la chaleur en remuant fréquemment le milieu pour améliorer le processus de dissolution. Portez à ébullition pendant une minute. Stériliser à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Laisser reposer jusqu'à ce qu'il atteigne une température de 45 ° C et ajouter 50 ml de l'émulsion de jaune d'oeuf et 10 ml de tellurite à 1%. Bien mélanger et verser 15-20 ml sur des boîtes de Pétri stériles.

Laisser solidifier, commander inversé en plaquers et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation.

Le pH final du milieu préparé doit être de 6,8 ± 0,2.

Avant de semer un échantillon, attendez que la plaque atteigne la température ambiante. Semez les plaques par stries ou par semis en surface avec une spatule Drigalski.

La couleur du milieu déshydraté est beige clair et la couleur du milieu préparé est ambre clair.

Utilisation

Échantillons cliniques

Les échantillons cliniques sont semés directement, déchargeant une partie du matériau à une extrémité de la plaque, et de là, il est strié d'épuisement. Incuber pendant 24 à 48 heures à 35-37 ° C.

Échantillons alimentaires

Peser 10 gr de l'échantillon alimentaire et homogénéiser dans 90 ml d'eau peptonée 0,1%, à partir de là, des dilutions sont préparées si nécessaire. Inoculer les plaques en triple exemplaire avec 0,3 ml des solutions préparées, et ensemencer en surface avec une spatule Drigalski. Incuber pendant 24 à 48 heures à 35-37 ° C.

Cette méthodologie permet de compter les colonies typiques obtenues et est idéale lorsque la présence de S. aureus est suspectée au-dessus de 10 UFC par g / ml d'échantillon.

Si l'on soupçonne que la quantité de S. aureus est faible ou s'il y a beaucoup de flore qui l'accompagne, il est suggéré d'enrichir l'échantillon en bouillon trypticase soja avec 10% de NaCl et 1% de pyruvate de sodium. Cela favorisera la croissance de S. aureus et inhibera le développement de la flore qui l'accompagne. Les tubes turbides sont ensemencés sur de la gélose Baird Parker.

Échantillons d'eau

Dans un système de filtration sous vide stérilisé, 100 ml d'eau d'étude sont filtrés, puis la membrane microporeuse de 0,4 micron est retirée avec une pince stérile et placée sur une plaque Baird Parker. Incuber pendant 24 à 48 heures à 35-37 ° C. Cette technique permet de compter les colonies typiques de S. aureus.

Contrôle de qualité

Des souches connues telles que Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071 peuvent être utilisées pour évaluer la qualité de la gélose Baird Parker.

Dans le cas des souches ATCC de S. aureus, il est connu pour réduire la tellurite et elles sont positives pour la lipase et la lécithinase. Par conséquent, il doit y avoir un développement satisfaisant et développer des colonies convexes avec un centre noir et une bordure incolore, avec un halo opaque et un léger halo extérieur.

De son côté, S. epidermidis devrait se développer mal sur ce milieu, avec des colonies gris-brun à noir, sans halo léger.

Pour E. coli et P. mirabilis, il devrait être totalement ou partiellement inhibé. En cas de croissance, des colonies brunes se développeront sans zone opaque ni halo léger.

recommandations

-Le milieu ne doit pas être chauffé après avoir ajouté la tellurite et le jaune d'oeuf.

-La préparation de l'émulsion de jaune d'oeuf et son ajout au milieu est une étape très vulnérable à la contamination. Un soin extrême doit être pris.

-S'il y a présence de colonies typiques de S. aureus, cela doit être confirmé par le montage d'un test de coagulase sur ladite souche.

-S'il y a des résultats douteux avec la coagulase, d'autres tests de confirmation doivent être montés.

-Veillez à ne pas confondre la présence de colonies typiques de S. aureus avec des colonies noires atypiques.

Références

1. Contributeurs Wikipedia. Gélose Baird-Parker. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 15 mars 2017, 19:36 UTC. Disponible sur: wikipedia.org/ Consulté le 18 février 2019.
2. Laboratoires BD. Gélose Baird Parker. 2006. Disponible sur: bd.com
3. Laboratoires Britannia. Base de gélose Baird Parker. 2015. Disponible sur: britanialab.com
4. Laboratoires Francisco Soria Melguizo. 2009. Gélose Baird Parker. Disponible sur:
5. Laboratoires Britannia. Tellurite de potassium. 2015. Disponible sur: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Rev Med Chili 2017; 145: 1559-1564
7. Covenin standard vénézuélien 1292-89. (1989). Nourriture. Isolement et dénombrement de Staphylococcus aureus. Disponible sur: sencamer.gob.ve