COLORATION DE MAI GRÜNWALD-GIEMSA: JUSTIFICATION, TECHNIQUE ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le colorant May Grünwald-Giemsa ou Pappenheim est une technique de coloration différentielle qui mélange les réactifs Giemsa et May Grünwald. Il est utilisé pour la différenciation des cellules sanguines normales et anormales dans les frottis de sang périphérique et de moelle osseuse, ainsi que pour la coloration des coupes histologiques et des échantillons cytologiques.

Les deux réactifs -Giemsa et May Grünwald- sont issus de la coloration de type Romanowsky, une technique basée sur la combinaison de colorants acides et basiques.

Frottis montrant un neutrophile segmenté et un milleocyte dans un cas de leucémie myéloïde chronique, coloré avec le colorant May Grünwald Giemsa. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) via Wikipedia.org.

Giemsa a amélioré la technique en stabilisant le mélange d'éosine, de bleu de méthylène et de leurs dérivés, avec du glycérol. Au lieu de cela, May Grünwald utilise l'éosine et le bleu de méthylène, en utilisant le méthanol comme solvant. Cette combinaison stratégique a donné d'excellents résultats.

Bien qu'en termes d'observation de la morphologie cellulaire, elle agit de manière similaire aux colorations de Giemsa et Wright, cette technique améliore les précédentes en affinant la coloration des parasites responsables du paludisme, de la maladie de Chagas, de la leishmaniose et de la trichomonase.

De plus, il s'est avéré être une technique très utile pour l'étude cytologique du liquide spermatique. Il s'est démarqué non seulement en montrant les caractéristiques morphologiques des spermatozoïdes, mais aussi en permettant la différenciation très efficace des leucocytes, des cellules épithéliales et des cellules de spermatogenèse.

Base

La technique suit la base des colorants Romanowsky, dans lesquels les colorants acides ont une affinité sélective pour les composants cellulaires basiques et les composants acides attirent les colorants basiques.

Expliqué d'une autre manière, les structures cellulaires et les colorants ont des charges électriques positives ou négatives; comme les charges repoussent et les charges différentes s'attirent.

Par exemple, les colorants basiques comme le bleu de méthylène sont chargés positivement et sont attirés par les structures chargées négativement. C'est pourquoi ce colorant colore les noyaux riches en ADN et ARN qui ont des groupes phosphate chargés négativement.

Les granules de basophiles segmentés et les cytoplasmes des globules blancs mononucléaires contenant de l'ARN sont également colorés.

De même, le colorant acide porte une charge négative, c'est pourquoi il se lie à des structures chargées positivement telles que les érythrocytes et les granules d'éosinophiles segmentés. Quant aux granulés de neutrophiles segmentés, ils fixent les deux colorants.

Variété de colorants

Dans cette technique, une combinaison de réactions entre colorants orthochromatiques et métachromatiques coexiste. Les orthochromatiques (éosine et bleu de méthylène) se lient à la structure cellulaire à laquelle ils sont liés et fournissent une couleur stable qui ne varie pas.

D'autre part, les métachromates (les dérivés du bleu de méthylène azur A et azur B), varient de leur couleur d'origine une fois qu'ils sont attachés à la structure spécifique, et il peut même y avoir une variété de nuances.

Enfin, l'étape que prend la solution de May Grünwald nécessite la présence d'eau, car sans cela, le colorant pénétrera dans les structures mais ne se fixera pas. Pour que cela se produise, le colorant doit devenir polaire ou s'ioniser, et ainsi pouvoir précipiter et se lier à des structures apparentées.

Technique

matériaux

- Faites glisser des diapositives.

- Ponts de coloration.

- Solution de May-Grünwald.

- Tache de Giemsa.

- Eau distillée.

Solution concentrée de colorant May Grünwald

0,25 g d'éosine-bleu de méthylène (colorant selon May Grünwald) doivent être pesés et dissous dans 100 ml de méthanol. Ensuite, la préparation est mélangée pendant 1 heure et laissée au repos pendant 24 heures. À la fin du temps, il est filtré.

Pour appliquer la technique, le colorant May Grünwald doit être dilué comme suit: pour 200 ml de colorant dilué, mesurer 30 ml de solution concentrée, ajouter 20 ml de solution tampon et 150 ml d'eau distillée ajustée à pH 7,2-7,3. Plus tard, il est mélangé et filtré.

Concentré de coloration de Giemsa

0,5 g d'azur-éosine-bleu de méthylène (coloration selon Giemsa) doit être pesé, dissous dans 50 ml de méthanol et 50 ml de glycérine ajoutés au mélange.

Pour réaliser la technique, diluez 1:10 avec une solution tampon et laissez reposer pendant 10 minutes. Il peut être filtré si nécessaire.

Préparation de la solution tampon à pH 7,2

Ils doivent être pesés:

- 40 mg de dihydrogénophosphate de potassium (KH2PO4).

- 151 mg de di-sodium hydrogénophosphate 12 hydraté (Na2HPO4).

Les deux composés sont dissous dans 100 ml d'eau.

Procédure de coloration des frottis de sang ou de moelle osseuse

Il existe deux modes: un classique et un rapide.

Mode classique

1. Couvrir les frottis pendant 2 à 3 minutes avec la solution diluée de May-Grünwald.
2. Laver à l'eau distillée tamponnée pour éliminer la solution précédente.
3. Couvrir avec la même solution de lavage tamponnée et laisser reposer 1 minute. L'idée est que le colorant précédent est fixé sur les structures et que, en même temps, les cellules sont hydratées.
4. Ajouter 12 gouttes de teinture de Giemsa diluée à l'eau tamponnée et souffler pour mélanger et homogénéiser. Laissez reposer 15 à 20 minutes.
5. Laver les frottis avec de l'eau distillée tamponnée et les sécher à l'air.
6. Concentrez et visualisez les cellules sanguines colorées au microscope optique en utilisant l'objectif 40X. Si nécessaire, le 100X peut être utilisé.

Mode rapide

1. Couvrir le frottis avec du colorant de May Grünwald dilué pendant 1 minute.
2. Laver à l'eau distillée tamponnée.
3. Couvrir d'eau tamponnée et laisser reposer 1 minute.
4. Ajouter la tache de Giemsa diluée et laisser reposer 5 minutes.
5. Laver à l'eau distillée tamponnée et laisser sécher à l'air.

Les techniques décrites ici sont à titre indicatif, mais il faut tenir compte du fait que les procédures et les temps de coloration varient selon la société commerciale qui distribue les réactifs. Il est conseillé de suivre les étapes strictement indiquées par chaque maison commerciale.

Technique de coloration des frottis de liquide spermatique

1- Couvrir le frottis d'une fine couche de la solution de May Grünwald pendant 4 minutes.

2- Retirer le colorant et laver à l'eau distillée.

3- Placer une couche de Giemsa diluée (1:10) dans de l'eau distillée pendant 15 minutes.

4- Retirer le colorant et laver à l'eau distillée.

5- Laisser sécher et observer au microscope.

Couleurs attendues avec la teinture May Grünwald Giemsa

Spécifications importantes

La technique nécessite que les réactifs et les solutions de lavage aient un pH ajusté à 7,2 -7,3, de sorte que les affinités des colorants pour les structures cellulaires ne soient pas déformées et que la couleur finale attendue ne varie pas.

Applications

Cette technique est utilisée par les laboratoires cliniques pour colorer les frottis de sang périphérique et de moelle osseuse, les coupes de tissus et les cytologies.

Dans le domaine hématologique, cette technique est d'une importance vitale dans l'étude des anomalies des cellules en termes de forme, taille et nombre. C'est un outil très précieux pour le diagnostic de certaines maladies, telles que les leucémies et les anémies.

De plus, il est d'une utilité exceptionnelle pour la recherche de parasites dans les zones hématologiques (Plasmodium sp et Trypanosoma cruzi) ou histologiques (Leishmanias sp).

Cytologie vaginale

En ce qui concerne la cytologie vaginale, cette technique est particulièrement avantageuse pour l'observation de Trichomonas vaginalis. Ceci est une découverte importante, car sa présence simule des images de carcinome in situ qui disparaissent plus tard lorsque le parasite est éliminé.

Échantillon de sperme

C'est un outil idéal pour l'étude d'échantillons de sperme, car il fournit des informations précieuses sur la qualité du sperme.

Les données qu'elle propose concernent principalement le nombre et la morphologie, ainsi que les cellules concomitantes qui peuvent être présentes et qui sont d'une importance vitale, telles que les cellules germinales, les leucocytes et les cellules épithéliales.

Cette analyse permet de décrire les anomalies observées dans le sperme de la tête, du cou, de la pièce médiane et de la pièce principale.

En outre, ils peuvent également aider à mettre en évidence des cas d'hémospermie (présence de globules rouges dans le sperme) et de leucospermie ou piospermie (augmentation du nombre de leucocytes dans le sperme).

Références

1. Costamagna S, Prado M. Validation du test frais, May Grünwald-Giemsa et Gram et milieux de culture pour le diagnostic de Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Disponible dans: scielo.
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