- Base
- Techniques par
- -Tache d'Anthony
- matériaux
- Processus
- Interprétation
- avantage
- Désavantages
- -Coloration négative
- matériaux
- Processus
- avantage
- Désavantages
- Interprétation
- -Technique d'encre indienne
- matériaux
- Processus
- Interprétation
- Références
La capsule de coloration est une technique de coloration différentielle qui a la propriété d'une structure polysaccharidique de stress entourant certaines bactéries et levures appelées capsule. Il est utilisé dans les laboratoires cliniques pour aider à diagnostiquer certaines pathologies causées par des microorganismes encapsulés.
Il est également utilisé dans les laboratoires d'enseignement pour la démonstration de cette structure morphologique aux étudiants de carrières en sciences de la santé, telles que: médecine, bioanalyse, soins infirmiers ou cytotechnologie, entre autres.
Frottis de Klebsiella pneumoniae coloré avec une coloration capsule. Méthode à l'encre de Chine avec safranine. Source: А.А.В
Il existe plusieurs techniques simples pour démontrer la présence de la capsule dans les microorganismes qui la possèdent, ce sont: la coloration négative, la coloration Anthony et une variante qui combine les deux précédentes.
La coloration négative est principalement utilisée dans les échantillons de LCR lorsque la présence de la levure Cryptococcus neoformans est suspectée. Cette levure est une cause fréquente de méningite.
Cette technique utilise de la nigrosine ou de l'encre de Chine et est basée sur la création d'un contraste entre le fond de la préparation et la capsule impénétrable du microorganisme. Le fond devient sombre et la capsule est incolore. De cette manière, cette structure est révélée.
Concernant la technique Anthony, on peut dire qu'elle est principalement utilisée dans les laboratoires d'enseignement pour mettre en évidence la structure polysaccharidique de bactéries telles que Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae et Neisseria meningitidis.
L'utilisation de cette technique à des fins de diagnostic est très rare, car il existe d'autres tests de routine qui permettent l'identification de ces micro-organismes.
Base
La capsule est une structure solide de nature polysaccharidique. Cela protège les micro-organismes de la phagocytose et constitue donc une structure difficile à pénétrer.
C'est pourquoi les taches de capsule sont basées sur le contraste. Les colorants tachent le fond de la préparation tandis que la capsule reste incolore.
Par conséquent, avec ces techniques, la capsule est facilement reconnaissable. Si le microorganisme n'a pas de capsule, il ne se distinguera pas avec ce type de coloration, car tout sera coloré de la même couleur.
Toutes les techniques utilisées pour colorer la capsule ont le même raisonnement malgré l'utilisation de colorants et de procédures différents.
Techniques par
-Tache d'Anthony
La tache d'Anthony utilise le cristal violet comme tache. Cela tachera le corps bactérien et le fond en violet.
D'autre part, 20% de sulfate de cuivre est utilisé. Cela sert de solution de lavage, c'est-à-dire qu'il élimine l'excès de cristal violet de la préparation, rendant les capsules claires, mais sans que le corps bactérien ou le fond ne perde de couleur.
matériaux
- Lait irisé.
- Faire glisser.
- 1% de cristal violet.
- 20% de sulfate de cuivre.
- Microscope optique.
- Huile d'immersion.
Processus
Cette technique consiste en:
- Cultivez le micro-organisme dans du lait irisé pendant 36 heures.
- Placer une goutte de la culture au bout d'une lame et à côté, déposer une goutte de verre violet, mélanger et étaler avec l'extrémité d'une autre lame.
- Sécher à l'air et ne pas chauffer.
- Laver avec une solution de sulfate de cuivre à 20%, laisser sécher à l'air.
- Observez au microscope avec un objectif à immersion. Recherchez vers les extrémités de la planche.
Il est important de ne pas utiliser de chaleur ni pour fixer ni pour sécher, car cela endommage la capsule. Ne pas laver non plus à l'eau.
Interprétation
Le lait irisé est un excellent milieu de culture car il fournit les nutriments nécessaires au micro-organisme pour développer une capsule proéminente.
D'autre part, le lait irisé formera un fond épais et compact qui sera coloré en violet avec le corps bactérien, mais la capsule qui entoure le micro-organisme restera incolore. Par conséquent, un halo clair est observé autour du corps bactérien.
Représentation graphique sur observation microscopique d'un frottis de Klebsiella pneumoniae coloré avec la tache d'Anthony. Source: réalisé par l'auteur MSc. Marielsa Gil.
avantage
C'est une technique simple à réaliser. Ne nécessite pas de réparation.
En outre, il convient de noter que d'autres milieux de culture peuvent être utilisés, mais le milieu laitier est préféré car il présente l'avantage de fournir des capsules plus proéminentes.
Désavantages
C'est une technique légèrement plus laborieuse que la coloration négative, et sa visualisation nécessite d'attendre que la préparation sèche complètement.
-Coloration négative
matériaux
- Faites glisser des diapositives.
- Milieu de culture avec le microorganisme.
- Encre de Chine ou nigrosine.
- Microscope optique.
- Solution saline physiologique.
Processus
Placez une goutte de solution saline physiologique sur la lamelle et dissolvez une petite partie de la culture microbienne. Il est important que la préparation ne soit pas trop épaisse. Déposer ensuite une goutte d'encre de Chine ou de nigrosine et mélanger.
Une feuille de lamelle est ensuite placée sur la préparation sans faire déborder le liquide. Il est observé au microscope en se concentrant d'abord sur un objectif 10X puis en passant à 40X.
Cette technique peut également être utilisée directement sur des échantillons de CSF. Autrement dit, au lieu de placer une goutte de culture microbienne, une goutte de LCR est placée.
avantage
C'est une méthode simple à réaliser et en même temps peu coûteuse. Il ne nécessite ni fixation ni séchage de la préparation.
Désavantages
L'inconvénient est qu'il doit être observé au microscope avant que la préparation ne sèche, car si cela se produit, les micro-organismes se contracteront, ce qui rendra la visualisation difficile.
En revanche, des faux positifs peuvent survenir si l'analyste est inexpérimenté, car les leucocytes sont souvent confondus avec les levures.
L'observation des capsules de levure avec la technique de l'encre de Chine ou de la nigrosine doit être considérée comme un diagnostic présomptif de Cryptococcus neoformans jusqu'à ce qu'il soit démontré avec la culture.
En effet, il existe d'autres levures qui pourraient être à l'origine de la méningite et pas seulement Cryptococcus neoformans, comme celles du genre Candida et Rhodotorula, ainsi que d'autres espèces de Cryptococcus.
Interprétation
S'il y a des micro-organismes encapsulés, un fond sombre sera observé, avec des corps transparents flottant dans le liquide, mettant en évidence la présence de la capsule.
Capsule de Cryptococcus neoformans tachée d'encre de Chine. Source: Crédit photo: Fournisseur (s) de contenu: CDC / Dr. Leanor haley
-Technique d'encre indienne
Cette technique peut également être réalisée avec de la nigrosine. C'est une combinaison des techniques expliquées précédemment. Cette technique utilise du cristal violet et de l'encre de Chine ou de la nigrosine.
Le corps bactérien devient violet à partir du cristal violet car il est chargé négativement, tandis que la nigrosine colore le fond du frottis. Si la bactérie a une capsule, elle apparaîtra comme un halo transparent autour du micro-organisme.
Le cristal violet peut être remplacé par l'une de ces couleurs: safranine, fuchsine basique ou bleu de méthylène.
matériaux
- Verre violet.
- Nigrosine ou encre de Chine.
- Faites glisser des diapositives.
- Microscope.
Processus
- Cultiver le microorganisme dans un milieu de culture.
- Déposer une goutte de culture au bout d'une lame et à côté, déposer une goutte d'encre de Chine en cristal ou de nigrosine, mélanger et étaler avec l'extrémité d'une autre lame.
- Sécher à l'air et ne pas fixer à la chaleur.
- Couvrir d'une solution cristalline violette pendant 1 minute, laver à l'eau distillée mais très délicatement (jet doux), laisser sécher à l'air libre.
- Observer au microscope avec un objectif à immersion. Recherchez vers les extrémités de la planche.
Interprétation
Un corps bactérien violet et un fond sombre seront visibles. La capsule, si elle est présente, apparaîtra incolore autour des bactéries.
Références
- Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Techniques de base de la microbiologie. Observation des bactéries. Reduca (biologie). Série de microbiologie. 2010; 3 (5): 15-38. ré
- López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Colorants basiques dans le laboratoire de microbiologie. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Disponible sur: medigraphic.com
- Gil M. Coloration négative: justification, technique, avantages et inconvénients. Lifeder.com.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana SA
- Tankeshwar A. Capsule Stain: Principe, procédure et résultats. 2019. Guide de microbiologie médicale. Disponible sur: microbeonline.com