TEST DE COAGULASE: JUSTIFICATION, PROCÉDURE ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le test de la coagulase est une technique de laboratoire utilisée pour révéler la présence de l'enzyme coagulase. Cette enzyme a la propriété de coaguler le plasma. Loeb en 1903 a été le premier à décrire cette enzyme.

Ce test est réalisé sur des cocci à Gram positif, catalase-positive, permettant de distinguer les souches de Staphylococcus aureus du reste des staphylocoques, car c'est le seul microorganisme d'importance clinique qui le produit.

Les deux images révèlent un test de coagulase positif. Source: Image de gauche: Philippinjl. Image de droite: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil.

En ce sens, les membres de la famille des staphylococacées dont le test est négatif sont souvent appelés staphylocoques à coagulase négative.

Certaines souches autres que S. aureus peuvent produire de la coagulase, telles que Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius et S. delphini.

Cependant, les trois premiers ont une importance clinique au niveau vétérinaire et pourraient très rarement être trouvés comme agent causal d'infections chez l'homme, tandis que S. delphini ne se trouve que dans les environnements marins.

De plus, ils sont facilement différenciés car S. hyicus et S. intermedius ne fermentent pas le mannitol et S. schleiferi spp coagulans ne fermente pas le maltose ou le tréhalose, tandis que S. aureus fermente ces glucides.

La présence de l'enzyme coagulase a été liée à la virulence des souches. Cependant, cette théorie s'est effondrée, car d'autres espèces virulentes à coagulase négative capables de produire des infections significatives sont observées.

Base

Interprétation

Agglutination dans les 5-20 sec (test fortement positif).

Agglutination variable survenant entre 20 secondes et une minute (test positif retardé).

Un certain degré d'agglutination après une minute (preuves douteuses). Il est recommandé de répéter le test ou de confirmer par la méthode du tube.

Il n'y a pas d'agglutination (test négatif).

Résultat avec SSF. Il doit toujours donner un résultat négatif, s'il donne automatiquement un résultat positif, le résultat du test est invalidé.

-Test de coagulase de tube

matériaux

-Tube à essai stérile

-Plasma

-Baignoire de Marie à 37 ° C

Technique

Pipeter 0,5 ml de plasma dans un tube à essai 12 x 75 avec une pipette stérile. Charger la boucle de platine avec 2 à 4 colonies pures à étudier à partir d'une culture solide pendant 18 à 24 heures et dissoudre dans le plasma mélanger soigneusement et incuber à 37 ° C pendant 4 heures.

Examinez le tube dans la première heure sans le secouer, inclinez-le doucement. Si un caillot n'est toujours pas vu, il peut être observé toutes les 30 minutes jusqu'à la fin des 4 heures. Si après 4 heures, il est toujours négatif, il peut être laissé jusqu'à 24 heures mais à température ambiante. Observez et rapportez le résultat.

Sur la base de l'expérience, certains microbiologistes recommandent d'utiliser 500 µl d'une suspension bactérienne provenant d'une culture de 18 heures en milieu liquide pour effectuer le test.

Il semble offrir des résultats plus rapides et plus fiables que lors de l'émulsification de colonies à partir de milieux solides, en particulier si du plasma humain obtenu de la banque de sang a été utilisé.

L'utilisation de souches issues d'un bouillon aide à diluer la présence éventuelle d'anticorps anti-staphylococciques humains dans le plasma qui peuvent inhiber l'action de la coagulase.

Interprétation

Si un caillot englobe tout le liquide (caillot complet) ou un caillot qui ne se trouve pas du tout dans le liquide restant (caillot partiel), il doit être considéré comme un test positif.

Si aucun caillot ne se forme, c'est-à-dire que la suspension reste homogène, le test est négatif.

-Test de coagulase utilisant le fibrinogène

Le fibrinogène est utilisé de la même manière que le plasma et est utilisé à la fois pour les tests sur lame et en tube. Procéder comme décrit pour le plasma et interpréter de la même manière.

Utilisation

Il est utilisé pour différencier Staphylococcus aureus des staphylocoques à coagulase négative.

Contrôle de qualité

Avoir des cultures fraîches d'une souche de S. aureus disponibles pour être utilisées comme contrôle positif. Une souche de S. epidermidis est également disponible comme contrôle négatif.

Limites

-Un test positif ne doit pas être laissé en incubation pendant 24 heures, car S. aureus produit une fibrinolysine qui dissout le caillot.

-Pour un test fiable, du plasma frais ou nouvellement reconstitué doit être utilisé, ainsi qu'il est important d'utiliser des cultures bactériennes fraîches (18 à 24 h). Cela évite les faux négatifs.

-Le test doit être réalisé avec un contrôle négatif et un contrôle positif.

-Certains milieux solides peuvent interférer avec le test de la coagulase. Il n'est pas recommandé d'utiliser des colonies de gélose au mannitol salé.

-Si du plasma citraté est utilisé, il est recommandé de placer 5 unités d'héparine par ml de plasma pour éviter les faux positifs. En effet, certains micro-organismes autres que S. aureus peuvent décomposer le citrate et provoquer la coagulation du plasma. Dans ce cas, il est conseillé de faire un test de Gram et de catalase.

-Il est important, dans le test en tube, de surveiller la réaction toutes les 30 minutes, car il existe des souches de S. aureus qui produisent des concentrations élevées de fibrinolysine et dilueront rapidement le caillot nouvellement formé. Évitez les faux négatifs.

-Lors de la surveillance du test, éviter de secouer le tube brusquement, cela peut détruire l'initiation de la formation de caillots qui ne sera pas rétablie plus tard, provoquant de faux négatifs.

Références

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.
3. Mac Faddin J. (2003). Tests biochimiques pour l'identification des bactéries d'importance clinique. 3e éd. Éditorial Panamericana. Buenos Aires. Argentine.
4. Laboratoires Pro-Lab. Le lapin coagule le plasma. Disponible sur: pro-lab.com
5. «Coagulase». Wikipedia, l'encyclopédie libre. 12 févr.2019, 04:23 UTC. 22 avril 2019, 15:50 wikipedia.org.