FROTTIS SANGUIN: CARACTÉRISTIQUES, TYPES, TECHNIQUES ET HISTOLOGIE - LA BIOLOGIE - 2024

Le frottis sanguin est un frottis sanguin périphérique utilisé pour analyser les composants présents dans la circulation sanguine. L'observation d'un frottis sanguin fournit des données hématologiques très utiles pour le diagnostic et le suivi de nombreuses pathologies.

Le frottis sanguin permet de quantifier le nombre de différents types de globules blancs (formule leucocytaire), ainsi que d'analyser la morphologie et la forme des érythrocytes, des leucocytes et des plaquettes.

Préparation du frottis sanguin. Source: Sang dans un verre de laboratoire. Public DomainPictures.net

Dans celui-ci, des anomalies du nombre de cellules peuvent être détectées, telles que: leucocytose ou leucopénies, lymphocytose ou lymphopénie, neutrophilie ou neutropénie, thrombocytose ou thrombocytopénie et éosinophilie. Des anomalies de la taille et de la forme des cellules peuvent également être observées.

De plus, il est possible de détecter divers types d'anémies, de leucémies et d'infections bactériennes ou parasitaires du sang.

Pour cela, il existe différents types de frottis qui sont effectués en fonction du but de l'étude. Il y a des frottis minces et des frottis épais. Ces frottis diffèrent dans la technique d'exécution et le but de l'étude.

Ceux avec de fines gouttes sont utilisés en complément de l'hématologie complète. Cela fournit des données sur la formule leucocytaire, en plus de l'analyse de la forme et de la morphologie des trois séries de cellules qui composent le sang: série rouge, série blanche et plaquettes. Bien qu'ils servent également de complément à l'étude du film sanguin épais.

Le film épais est utilisé pour le diagnostic des maladies causées par les hémoparasites, telles que le paludisme ou le paludisme, la toxoplasmose, la leishmaniose, la maladie de Chagas, la babésiose et la microfilariose.

Caractéristiques d'un frottis sanguin

Un bon frottis sanguin doit répondre à certaines caractéristiques. Parmi eux, nous pouvons citer:

-L'échantillon doit répondre aux exigences de qualité minimales pour être représentatif.

-L'échantillonnage doit être bien exécuté.

-Exécution en temps opportun du frottis.

-Si réalisé avec du sang veineux, utiliser un anticoagulant qui ne déforme pas les cellules et mélanger le tube avant de réaliser le frottis.

-Si cela est fait avec du sang capillaire, jetez la première goutte.

-La propagation doit être homogène. Cela garantit que les cellules sont uniformément réparties et que les cellules sanguines peuvent être bien analysées pour leur forme et leur nombre.

-Les côtés du frottis doivent être lisses du début à la fin.

-Le frottis doit respecter une marge de 1 à 2 mm sur les côtés de la lame.

-La couche de frottis devrait progressivement diminuer d'épaisseur du début à la fin (frottis avec une fine goutte par la méthode de la lame).

-Il doit être correctement étiqueté pour éviter la confusion des échantillons.

-Fixer et colorer correctement pour une observation claire des éléments sanguins.

-Laisser le frottis très bien sécher avant de monter la préparation au microscope. Placer de l'huile d'immersion sur un frottis humide provoquera la formation de micelles qui empêchent les cellules d'être vues.

Types de frottis sanguins

Les frottis de sang périphérique peuvent être classés en frottis fin et frottis épais. Ceux avec une couche mince sont utilisés pour l'étude de la formule leucocytaire et l'observation morphologique des cellules sanguines. Des bactéries extracellulaires telles que les borrelia et les hémoparasites intracellulaires, tels que le plasmodium, entre autres, peuvent également être observées.

Dans le blob fin, l'espèce du parasite peut être identifiée, c'est donc une technique plus spécifique que le blob épais, mais le blob épais est plus sensible, car il s'agit d'une technique de concentration utilisée pour la recherche exhaustive d'hémoparasites extracellulaires.

Il existe deux types de frottis en gouttes fines: ceux réalisés sur des diapositives et ceux réalisés sur des lamelles. Les frottis épais sont réalisés sur des lames.

Techniques de prélèvement sanguin

Les frottis sanguins peuvent être réalisés à partir d'une ponction capillaire ou d'un échantillon veineux prélevé avec un anticoagulant. S'il est réalisé à partir de sang avec un anticoagulant, le frottis peut être préparé jusqu'à 2 heures après le prélèvement.

Des précautions doivent être prises lors de l'utilisation d'anticoagulants qui ne déforment pas les cellules sanguines. La meilleure option est EDTA. Au contraire, l'utilisation d'anticoagulants tels que le citrate trisodique doit être évitée.

Si l'échantillon est prélevé par ponction capillaire, le frottis doit être prolongé immédiatement, avant que le sang ne coagule.

La première goutte doit être jetée, permettant à la goutte suivante de s'échapper spontanément pour éviter la dilution de l'échantillon avec du liquide tissulaire. C'est la technique la plus recommandée pour l'observation de la morphologie cellulaire, car le sang ne contient aucun additif.

Pour l'observation des hémoparasites, Solari et al.ont conclu dans leurs travaux de recherche que les deux techniques (ponction veineuse et capillaire) sont également efficaces.

Types de prélèvement sanguin: A. Ponction capillaire. B. Ponction veineuse. Source: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Techniques de préparation du frottis sanguin

Le frottis sanguin peut être effectué manuellement sur des lames de microscope ou sur une lamelle ou une lame. C'est également possible grâce à un équipement automatisé.

-Glisse les frottis

C'est la technique préférée par la plupart des laboratoires en raison de sa manipulation facile.

À l'aide d'une pipette Pasteur, placez une goutte de sang pas très épaisse ou très fine au centre d'une extrémité d'une lame propre.

Le frottis est fait à l'aide d'une autre lame avec une extrémité au sol. La lame de verre dépoli est placée perpendiculairement à l'extrémité opposée de l'endroit où se trouve la goutte.

Il s'incline à un angle compris entre 30 et 45 ° et glisse vers la goutte; Lorsqu'il est touché, il se développe linéairement sur le bord de la glissière au sol et avec un mouvement constant et défini, la feuille revient; avant d'atteindre la fin, la glissière est soulevée.

De cette manière, une couche homogène est étalée sur la surface de la lame réceptrice.

Le frottis est autorisé à sécher. Il est ensuite fixé et coloré avec la teinture préférée. Laisser bien sécher avant de regarder au microscope. Une goutte d'huile est placée sur le visage montrant le frottis et observée au microscope optique.

Frottis de sang sur lame. Image du haut: frottis non taché. Image du bas: frottis taché. Source: Coinmac

Parties du frottis réalisées sur des diapositives

Dans ce type de frottis, trois zones définies peuvent être distinguées: la tête, le corps et la queue. La tête correspond à la zone où commence le frottis, c'est la zone la plus épaisse et il n'est pas bon d'observer.

Le corps est la partie centrale ou intermédiaire du frottis, c'est la meilleure zone à observer au microscope, car là les cellules sont uniformément réparties et leur morphologie est préservée.

La queue correspond à la dernière partie du frottis; ici, la distribution n'est plus uniforme et la morphologie des érythrocytes a tendance à se perdre.

Contrôle qualité dans la technique de la lame

Dans cette technique, il joue un rôle fondamental:

-Nettoyage et dégraissage de la lame: il garantit le bon glissement de l'échantillon.

-La taille de la goutte: avec de très grosses gouttes, un frottis plus épais et plus long sera obtenu, avec une très petite goutte, l'étalement sera plus court et extrêmement fin.

-La vitesse appliquée dans l'extension: plus la vitesse du frottis sera faible, plus la vitesse sera plus épaisse.

-L'angle d'exécution: plus l'angle est petit, plus le frottis est fin, plus l'angle est grand, plus il est épais.

-Étape sur la lamelle

Elle n'est pas largement utilisée car la manipulation de lamelles fragiles est lourde, mais elle offre de grands avantages, puisqu'une meilleure répartition des cellules est obtenue tout au long du frottis.

Une goutte pas très épaisse, pas très fine est placée au centre d'une lamelle. Immédiatement, une autre lamelle est placée sur le dessus de telle manière que les extrémités des deux lamelles font saillie, formant une étoile.

La goutte se répandra spontanément sur la surface des deux lamelles. À la fin de l'extension, chaque glissière est glissée de l'autre côté (l'une vers la droite et l'autre vers la gauche) rapidement.

La technique fournit deux frottis au lieu d'un.

Ils sont placés pour sécher avec le côté étalé vers le haut. Une fois sec, il est fixé et teinté avec la technique de choix. Laissez-le sécher. Une goutte d'huile d'immersion est placée sur une lame, le frottis est placé avec le côté frottis vers le bas et observé au microscope.

Contrôle de la qualité dans la technique de la lamelle

Pour obtenir un bon frottis pour cette technique, il est important de:

-Nettoyer les lamelles (aide l'échantillon à glisser en douceur).

-La taille de la goutte (influence l'épaisseur du frottis).

-La vitesse à laquelle les lamelles sont séparées (influence l'homogénéité de l'étalement).

-Avec équipement automatisé

Ils peuvent être effectués via l'une de ces équipes: Spinner et Autoslide.

Le Spinner consiste à placer une lame avec une goutte de sang sur une plaque de centrifugation spéciale. L'échantillon est centrifugé à grande vitesse; de cette manière, un frottis homogène et fin de l'échantillon est formé. Il présente l'inconvénient de la possibilité d'hémolyse de l'échantillon.

L'Autoslide est un instrument qui effectue mécaniquement les mouvements pour l'exécution du frottis sur les diapositives. Vous pouvez également réparer et colorer le frottis. Il peut même être adapté à certains compteurs d'hématologie automatiques.

Technique de frottis épais

Pour rechercher des hémoparasites, deux frottis sont recommandés: un avec une goutte fine et un avec une goutte épaisse.

Effectuez une ponction capillaire, nettoyez la première goutte. Déposer une fine goutte sur une lame et frotter comme expliqué précédemment. Pour la perle épaisse, placez une grosse perle sur une autre lame et étalez-la en un carré de 1,55 mm. Laissez sécher les deux frottis.

Tache de frottis

Les colorants Giemsa ou Wright, entre autres, peuvent être utilisés pour de fines gouttes. La coloration Giemsa ou May-Grunwald Giemsa est recommandée pour les frottis épais.

Tache de Giemsa

Le frottis est fixé pendant 3 minutes avec du méthanol, essoré et laissé sécher à nouveau. Le frottis est ensuite recouvert de colorant Giemsa pendant 10 à 15 minutes. Il est lavé à l'eau distillée et séché. Pour observer au microscope une goutte d'huile d'immersion est placée.

Tache de Wright

Le frottis est recouvert de la tache de Wright pendant 5 minutes. Jeter et placer la solution tampon à pH 6,8 pendant 6 minutes. Soufflez la préparation pour homogénéiser. Laver à l'eau distillée et laisser sécher. Observez au microscope.

Types de frottis défectueux

Il se produit chez les stagiaires de la technique de la goutte fine avec diapositives.

Frottis avec des zones d'épaisseurs différentes (fines et épaisses intercalées)

C'est parce que le mouvement exécuté n'était pas constant pendant la propagation, faisant des arrêts et des redémarrages.

Frottis très court

Ils ont 2 causes: l'une est due au fait que la glissière au sol a été soulevée avant d'atteindre l'autre extrémité de la glissière. Dans ce cas, il est extrêmement épais et court.

Par contre, si le frottis est court mais fin, c'est que la taille de la goutte était très petite.

Frottis avec une zone ratissée vers la fin du frottis

Elle a plusieurs causes: l'une est que le bord de sol est défectueux, que la pression exercée sur la glissière de réception est augmentée au moment de l'épandage ou que le bord de terre de la glissière est usé.

Frottis avec formation de vacuoles ou zones arrondies ou elliptiques claires

Ils sont dus à l'utilisation de frottis gras (mal lavés et dégraissés).

Frottis très épais ou très fins

Des gouttes trop grosses produiront des frottis très épais du début à la fin et de très petites gouttes produiront des frottis très fins.

Histologie

Les cellules sanguines peuvent être vues dans un frottis sanguin. Parmi eux se trouvent:

-Erythrocytes ou globules rouges

Sang humain, érythrocytes ou globules rouges et deux globules blancs. Tiré et édité de: Viascos Votre observation est de la plus haute importance. A ce niveau, des anémies, thalassémie, maladie de la moelle osseuse, etc. peuvent être détectées.

Le nombre d'érythrocytes ou de globules rouges est d'environ 5 x 10 ⁶ mm3 chez l'homme et 4,5 x 10 ⁶ chez la femme. Les globules rouges ont la forme de disques biconcaves, avec une pâleur physiologique centrale. Ils peuvent être vus séparément (normal) ou formant des piles de rouleaux (anormal).

Les frottis montrent également une poïkilocytose (globules rouges de différentes formes), une anisocytose (globules rouges de différentes tailles), une anisopoïkilocytose (différentes formes et tailles), une anisochromie (différentes couleurs), des érythroblastes (globules rouges immatures), une microcytose (globules rouges plus petits)) et les macrocytes (érythrocytes plus gros).

Lorsqu'ils présentent une carence en hémoglobine et que la pâleur centrale augmente, on dit qu'il y a hypochromie. Lorsqu'une série rouge normale est observée, elle sera signalée comme normocytaire et normochromique.

-Les globules blancs ou leucocytes

globules blancs

La quantité normale varie de 5 000 à 10 000 mm ³. Ils sont modifiés dans les processus infectieux, dans les allergies et dans la leucémie. Plusieurs types peuvent être distingués dans le frottis sanguin, qui sont expliqués ci-dessous.

Neutrophiles segmentés

Ils représentent 55 à 65% du total des leucocytes. Ils mesurent entre 10 et 15 μm. Ils ont un noyau segmenté ou lobé qui adopte différentes morphologies, c'est pourquoi on l'appelle polymorphonucléaire.

Ils ont des granules neutrophiles abondants dans leur cytoplasme et quelques azurophiles. Ils augmentent les infections bactériennes (neutrophilie), diminuent les infections virales (neutropénie).

Des anomalies morphologiques telles que pléocaryocytose (noyaux hyper-segmentés), arcades (cellules immatures) ou macro-politiques (ovales et grandes) peuvent être observées.

Autres modifications:

-Granulations toxiques

-Neudo-neutrophiles de Pelger (le noyau ne présente pas de lobulations ou ils sont bilobés).

-Corps Döhle: inclusions cytoplasmiques bleu foncé.

-Augmentation de la basophilie cytoplasmique.

-Vacuoles intracytoplasmiques.

-Picnose cellulaire (perte de ponts internucléaires).

Éosinophiles segmentés

Ils représentent 1 à 3% du total des globules blancs. Ils mesurent 9-10 μm. Ils se caractérisent par la présence d'abondants granules cytoplasmiques acidophiles et de peu d'azurophiles. Son noyau a deux lobulations. Leur nombre augmente dans les allergies et les maladies d'origine parasitaire.

Basophiles segmentés

Ils sont extrêmement rares, représentant 0 à 1% des leucocytes. Ils mesurent 10-12μm. Le noyau est généralement irrégulier dans les marges et peut être bilobé, mais on ne le voit pas en raison du grand nombre de granulations grossières basophiles dans son cytoplasme. Très rarement, une basophilie peut être observée.

Les lymphocytes

Ce sont de petites cellules à cytoplasme basophile, avec un noyau bien défini, rond, avec de la chromatine condensée. Le noyau englobe presque toute la cellule. Ils représentent 26 à 40% des leucocytes sanguins. Ils augmentent les infections virales (lymphocytose). Des lymphocytes réactifs peuvent être observés.

Les monocytes

Cellules plus grosses que les lymphocytes, avec un cytoplasme plus gros et des noyaux de chromatine ovales plus lâches. Ils mesurent 9-12μm. Le cytoplasme est abondant et apparaît généralement bleu grisâtre pâle avec les techniques de coloration standard. Des monocytes vacuolés et une monocytose peuvent être observés parmi les altérations.

-Platelets

Ils mesurent entre 1,5 et 3 μm. Sa forme est ronde ou ovale. La valeur normale varie de 150 000 à 350 000 plaquettes / mm3. Ils peuvent diminuer certaines infections virales. Ils n'ont pas de noyau et sont de couleur violette. Des anomalies peuvent être observées dans cette série, telles que des macro ou micro plaquettes, une thrombocytose ou une thrombocytopénie et des fragments de plaquettes.

Éléments pathologiques

Parasites sanguins

Des hémoparasites, tels que l'agent causal du paludisme ou du paludisme (parasites du genre Plasmodium), peuvent être observés dans les frottis sanguins. Pour cette raison, il est important que le frottis soit analysé manuellement, car l'équipement automatisé manque cette constatation.

Les bactéries

Dans les pathologies telles que la fièvre récurrente ou la maladie de Lyme, son agent causal peut être observé. Dans ce cas, il correspond aux spirochètes Borrelia recurrenti et Borrelia burgdorferi dans le frottis sanguin.

Cellules immatures

Des cas graves sont observés dans les leucémies, les réactions leucémoïdes et les réactions leucoérythroblastiques, entre autres. Dans les infections bactériennes, il peut y avoir de légères déviations vers la gauche (présence d'escrocs). Des érythroblastes peuvent également être observés dans certaines anémies.

Références

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