CHAMBRE NEUBAUER: HISTOIRE, CARACTÉRISTIQUES, UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2024

La chambre Neubauer, hématomètre ou hémocytomètre, est un instrument de laboratoire constitué d'une plaque de verre épaisse spéciale. Cette caméra est utilisée pour compter certains types de cellules tels que les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes, bien qu'elle puisse être utilisée pour compter les spores, les spermatozoïdes, les parasites, etc.

Il présente des caractéristiques très particulières, car il se compose de 3 zones, une centrale pour le comptage et deux zones de support. Chaque chambre a deux zones de comptage ou réticule, une en haut et une en bas.

Chambre Neubauer. Source: SantiBadia. Image modifiée.

Ceux-ci ont plusieurs divisions sous forme de grille. Les zones de comptage sont les carrés moyens trouvés aux 4 coins des deux graticules, plus le carré central.

L'assemblage de la caméra doit être fait avec le plus grand soin, car tout détail influence le nombre de cellules. De nombreuses erreurs peuvent être commises, mais si l'une d'entre elles se produit, la caméra doit être démontée, nettoyée et remontée. Les principales erreurs sont les suivantes:

Débordement de la chambre ou sous-remplissage, laisser sécher la chambre, tenter d'éliminer l'excès de liquide avec de la gaze, basculer la chambre lors du transport, remplir une chambre sale ou humide, ne pas bien mélanger la dilution ou l'échantillon, entre autres. Toutes ces erreurs se traduiront par une valeur irréelle.

L'histoire

La chambre Neubauer est un instrument de précision et le processus de fabrication est soumis à un contrôle de qualité strict. Il a été créé pour le comptage précis de particules ou d'éléments formés par mm ³, tels que des cellules dans divers liquides. Son graphisme délicat est sculpté au crayon diamant.

Caractéristiques de la chambre Neubauer

La chambre entière a la taille d'une lame normale afin qu'elle puisse être placée sur la platine du microscope.

La chambre se compose de trois surfaces rectangulaires centrales (a, b, c). Dans la zone «b» se trouve la zone R ou zone de comptage, également appelée réticulum. Un de chaque côté de la caméra, séparé par la zone "d".

Schéma graphique de la chambre Neubauer. Source: Guide pratique d'hématologie. École de bioanalyse de l'Université de Carabobo, Venezuela.

Chaque réticule est une zone polie qui contient la zone de comptage gravée. Il se compose d'un carré d'une surface de 9 mm ² et est divisé intérieurement en 9 carrés d'une surface de 1 mm ² chacun. Les quatre carrés d'angle sont divisés en 16 carrés plus petits (0,0625 mm ² de surface).

Ces grilles sont formées par une série de lignes millimétriques qui se croisent, constituant des grilles parfaitement tracées délimitées aux mesures qui ont été spécifiées. Ces lignes ont été gravées d'une pointe en diamant.

Amélioration du réticulum de Neubauer. Source: Guide pratique d'hématologie de l'École de bioanalyse de l'Université de Carabobo, Venezuela.

Les quatre côtés correspondent à la zone de comptage. C'est sur ces côtés ou coins que la majorité des cellules (globules rouges et leucocytes) sont comptées, tandis que les plaquettes sont comptées dans la zone centrale.

La zone centrale a plus de divisions, elle est constituée d'un carré de 1 mm ² divisé en 25 carrés d'une surface de 0,04 mm ² chacun. Ceux-ci sont à leur tour divisés en 16 grilles d'une surface de 0,0025 mm ².

Description du réticulum Neubauer amélioré. a) Carré des coins, b) Carré central, c) Carré médian du carré central. Source: Guide pratique d'hématologie de l'École de bioanalyse de l'Université de Carabobo, Venezuela.

Les zones «a» et «c» servent de support pour placer un objet de couverture spécial appelé lame hématométrique ou couvercle d'hématimètre.

La hauteur entre la feuille et la surface de comptage est de 0,1 mm. Les mesures de la surface des boîtes de contrôle, ainsi que la hauteur de la chambre et la dilution de l'échantillon sont des données nécessaires pour effectuer les calculs finaux.

Applications

Il est utilisé pour le comptage des cellules. Il est particulièrement utile dans le domaine de l'hématologie, car il permet le comptage des 3 séries de cellules sanguines; c'est-à-dire les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes.

Cependant, il peut être utilisé dans d'autres domaines, par exemple pour compter les spermatozoïdes, les spores, les bactéries ou d'autres éléments d'importance en fonction du type d'échantillon.

Comment on l'utilise?

La préparation des échantillons

Pour effectuer le comptage cellulaire, il est généralement démarré à partir d'une dilution précédente. Exemple: pour compter les globules blancs, préparez une dilution 1:20 avec le liquide de Turk. La dilution est bien mélangée avant de charger la pipette et de monter la chambre de Neubauer.

Il y a des moments où une dilution 1:20 ne suffit pas pour compter. Par exemple, chez les patients souffrant de certains types de leucémies chroniques. Dans ces cas, des dilutions plus élevées telles que 1: 100 doivent être effectuées.

Si, d'autre part, le nombre est très faible, comme dans les leucopénies sévères, des dilutions plus petites peuvent être effectuées pour concentrer l'échantillon. Exemple: vous pouvez faire une dilution 1:10.

Les modifications apportées influencent les calculs.

Montage de la chambre Neubauer

La chambre de Neubauer est assemblée en plaçant la lame hématométrique dans la zone centrale. Les deux doivent être très propres et secs. Pour placer la lamelle, elle est prise par les bords et doucement déposée sur la caméra.

Ceci est rempli en plaçant la pointe d'une pipette ou d'une pipette automatique Thoma à un angle de 35 ° au bord de la zone de chargement. Le liquide est évacué en douceur et la zone de chargement est remplie par capillarité. Ceci est fait des deux côtés pour charger les deux réticules.

Les réticules ne doivent pas être surchargés et ne doivent pas non plus être privés de liquide. La charge doit être exacte. Il est important que le remplissage se fasse de manière homogène, c'est-à-dire qu'il ne doit pas y avoir de bulles.

Une fois la chambre assemblée, on la laisse reposer 2 minutes pour que les cellules tombent au fond et que leur visualisation et leur comptage soient plus faciles.

Après le temps de repos, il est monté sur la platine du microscope optique pour l'observation. Il est d'abord concentré avec un objectif 10X et si nécessaire, il passe ensuite à 40X.

Pour améliorer sa visualisation, le passage de la lumière du microscope est réduit. Pour ce faire, le condenseur est abaissé et le diaphragme est légèrement fermé.

Compte

Pour le comptage des globules blancs ou des leucocytes, il faut compter toute la surface des quatre coins médians et le carré central de chaque réticulum.

Le comptage commence dans le carré dans le coin supérieur gauche. Vous commencez par le premier carré de la première rangée, c'est-à-dire de gauche à droite jusqu'à ce que vous atteigniez l'extrémité opposée.

Là, vous descendez et regardez en arrière de droite à gauche jusqu'à ce que vous atteigniez l'autre extrémité, et ainsi de suite, les cellules de chaque grille sont comptées en zigzag. Les 16 grilles de chaque carré médian sont comptées.

Pour éviter de compter une cellule deux fois, il existe des règles concernant les cellules situées sur les lignes de délimitation de chaque grille. Les cellules des lignes gauche et supérieure sont comptées et les cellules des lignes droite et inférieure sont ignorées.

Un compteur de cellules manuel doit être disponible pour que l'opérateur appuie sur la touche de l'appareil autant de fois qu'il y a de cellules observées. Avec l'utilisation du compteur, l'opérateur peut compter sans avoir à lever les yeux du champ microscopique. À la fin du décompte, vous verrez le nombre total de cellules comptées.

Calculs

Pour les calculs, vous pouvez procéder de plusieurs manières. Un seul réticule peut être compté ou les deux peuvent être comptés et les deux sont moyennés. Dans ces deux situations, les cellules comptées doivent être multipliées par un facteur, qui dans ce cas serait de 40. Et ainsi le comptage total par mm ^{3 est obtenu}.

Mais si les deux grilles sont comptées et que la moyenne n'est pas prise, elle doit être multipliée par un facteur différent, dans ce cas par 20.

-Facteur de multiplication

Voici comment le facteur de multiplication est calculé.

Différentes données sont prises en compte pour les calculs, notamment le titre de dilution, la hauteur de la chambre et la surface comptée.

Dilution

La dilution standard utilisée est de 1:20 pour le nombre de leucocytes.

Hauteur de la chambre

La hauteur entre la chambre et la feuille de cellules sanguines est de 0,1 mm.

Surface comptée

Si 5 carrés de surface de 1 mm ² sont comptés, cela signifie que la surface totale de comptage est de 5 mm ². Ces données doivent être multipliées par la hauteur de la chambre pour obtenir le volume total compté. Autrement dit, 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Formules et calculs

Avec les données dont nous disposons, il est dit:

Si dans 0,5 mm ³ - il y a --- nombre de cellules comptées

Dans 1 mm ³ --- il y aura - X n ° de cellules

X nombre de cellules = (nombre de cellules comptées x 1) / 0,5 mm ³

Mais la dilution doit également être prise en compte. Par conséquent, la formule est la suivante:

(nombre de cellules comptées x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Enfin, pour résumer, le nombre de cellules comptées peut être multiplié par 40. Ainsi, la valeur des leucocytes par mm ^{3 est obtenue}.

Si les deux réticules sont comptés, les données de la zone comptée sont modifiées, ce qui dans ce cas serait de 10 carrés, soit 10 mm ². Et un volume total compté de 1 mm3. La formule serait:

(nombre de cellules comptées x 1) x 20/1 mm ³

Par conséquent, dans ce cas, le facteur de multiplication serait de 20.

Erreurs

-Si lors du chargement de la caméra, elle est dépassée ou dépassée avec du liquide, la hauteur de la caméra variera. Il en résulte que le nombre est supérieur à la réalité. Si vous essayez d'enlever l'excédent avec de la gaze ou du coton, c'est une énorme erreur. Cette action provoquera la concentration des cellules, augmentant ainsi le nombre.

-S'il est mal chargé, le décompte sera inférieur au réel.

-Si l'appareil photo est monté et laissé sécher, il n'est plus possible de compter car cela donnera des résultats erronés.

-Si la dilution de l'échantillon n'est pas bien mélangée avant le chargement de la chambre, il existe un risque d'erreur de lecture, car les cellules ne seront pas réparties de manière homogène. Par conséquent, il y aura une concentration de cellules inférieure ou supérieure, selon que l'échantillon est prélevé respectivement à la surface du liquide ou au fond du tube.

-La présence de bulles réduit la quantité de liquide qui doit pénétrer dans le réticulum, interférant avec la visualisation et la distribution correctes des cellules. Tout cela affecte considérablement les résultats.

-Pendant le comptage, ne pas lever les yeux du microscope jusqu'à ce que chaque grand carré soit terminé pour éviter de se perdre.

-Une raison d'erreur est l'inclinaison de la caméra après le montage. Pour cette raison, la platine du microscope doit être soigneusement soulevée.

Recommandation

Si, pour une raison quelconque, vous détectez une anomalie dans le remplissage de la chambre, il est recommandé de démonter cette préparation, de nettoyer la chambre et de la remonter à partir de zéro.

Faites très attention lorsque vous nettoyez l'appareil photo pour éviter de rayer les réticules. Par contre, sachez que la lame hématométrique est délicate et fragile. Une mauvaise manipulation peut le casser.

Avant de commencer à compter, assurez-vous que les cellules sont bien réparties. Une distribution inégale des cellules se produit en raison d'un mauvais mélange ou d'une mauvaise dilution de l'échantillon. Si cela se produit, l'assemblage doit être répété.

Une façon de savoir si les cellules sont bien réparties est de comparer le nombre de chaque grand carré, le nombre de cellules comptées pour chaque carré ne doit pas être exagérément différent de l'un à l'autre.

-Si le nombre de globules blancs est supérieur à 50 000 mm ^{3, il} est conseillé de répéter le comptage en effectuant une dilution plus importante.

-Si vous modifiez la dilution, vous devez recalculer le facteur de multiplication, car cela influence la formule.

Références

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4. Gómez-Pérez Roald E. Analyse du spermogramme. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Disponible dans: ve.scielo
5. Guide pratique d'hématologie de l'École de bioanalyse de l'Université de Carabobo. Venezuela.1998