BLEU DE LACTOPHÉNOL: CARACTÉRISTIQUES, COMPOSITION, PRÉPARATION, UTILISATIONS - CHIMIE - 2025

Le coton bleu ou bleu de lactophénol est préparé avec des propriétés de colorant unique. Il est utilisé dans les laboratoires cliniques pour colorer principalement les structures fongiques telles que les hyphes, les tubes germinatifs et les spores.

Il aide au diagnostic présomptif ou préliminaire de certains champignons, cependant, il est toujours conseillé de renforcer le diagnostic avec des tests plus spécifiques, tels que des tests biochimiques ou sérologiques.

Représentation graphique du colorant au bleu de lactophénol, frottis coloré au bleu de lactophénol, préparation montée au microscope. Source: Public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8

Le bleu de lactophénol est composé d'acide lactique, de bleu d'aniline, de glycérine, de phénol et d'eau désionisée. Il peut être préparé en laboratoire ou acheté prêt à l'emploi. Une fois préparé, il est prêt à être utilisé, en aucun cas il ne doit être dilué, car cette action donnera des résultats terribles.

La concentration de ses composants le rend idéal pour la coloration des structures fongiques, car le phénol élimine le microbiote bactérien qui l'accompagne, tandis que l'acide lactique génère un film protecteur autour de la structure fongique. Enfin, le bleu d'aniline a une affinité pour adhérer aux structures du champignon.

Base

Avec le bleu de lactophénol, une simple coloration des structures fongiques d'une certaine culture mycologique est effectuée. Il est appelé simple car il n'utilise qu'un seul colorant.

Le bleu de lactophénol, outre la coloration, agit également comme un clarifiant de l'échantillon, grâce à l'action conjointe de l'acide lactique et du phénol, en outre, le phénol se comporte comme un mordant et en même temps empêche la lyse du microorganisme en inhibant les enzymes hydrolytiques qui peuvent être présents.

Alors que l'acide lactique préserve la morphologie des structures du champignon.

D'autre part, le bleu d'aniline a la propriété d'adhérer ou de se lier aux structures contenant de la chitine. Les structures sont colorées en bleu clair.

Il est à noter que la paroi cellulaire des microorganismes fongiques, notamment des moisissures, contient de la chitine, c'est pourquoi ce colorant est idéal pour colorer ces microorganismes.

caractéristiques

La solution de bleu de lactophénol est un colorant aqueux fortement acide, légèrement trouble, de couleur bleu clair. Il reste stable s'il est conservé entre 15 ° C et 25 ° C. La bouteille doit être maintenue correctement fermée. Il est irritant et corrosif pour la peau et les muqueuses.

Composition

La formule pour préparer un litre de bleu de lactophénol est la suivante:

-250 g / L d'acide lactique

-1,0 g / L de bleu d'aniline ou de bleu de méthyle

-500 g / L de glycérine

-250 g / L de phénol

-250 ml d'eau déionisée ou distillée.

Le phénol est dissous dans l'eau préalablement chauffée. L'acide lactique et la glycérine sont ajoutés et très bien mélangés. Enfin, le bleu d'aniline se dissout. Il se mélange à nouveau et est prêt à l'emploi.

Les portions pour préparer 80 ml de solution de bleu de lactophénol sont:

-20 g de cristaux de phénol

-20 ml d'acide lactique

-40 ml de glycérine ou de glycérol

-20 ml d'eau distillée.

Utilisation

Il est utilisé pour colorer les structures fongiques et, à travers les caractéristiques morphologiques observées au niveau microscopique, pour pouvoir poser un diagnostic présomptif du champignon.

Processus

Coloration des structures fongiques des cultures

- Prenez une culture pure du champignon dont les structures sont à observer.

- Travailler de préférence sous une hotte à flux laminaire, ou sous le briquet, à l'aide d'un masque et de gants, car il est nécessaire de respecter les normes de biosécurité, car la plupart des moisissures sont faciles à répandre dans l'environnement et représentent donc un danger pour l'opérateur.

- Une goutte de bleu de lactophénol est déposée sur une lame.

- Coupez un petit carré de ruban adhésif de bonne qualité et collez-le très soigneusement à l'extrémité de la poignée en platine stérilisée à froid.

- La poignée en platine est rapprochée de la partie la plus superficielle de la colonie fongique et la culture est touchée très soigneusement, exactement à l'endroit où se trouve le ruban adhésif.

- Ensuite, il est porté sur la lame et placé directement sur la goutte de bleu de lactophénol, en veillant à ce que le ruban soit parfaitement étendu et lubrifié avec le colorant. Le manche en platine est très délicatement enlevé.

- Une autre goutte de bleu de lactophénol est placée sur le ruban et une lamelle sur le dessus. N'appliquez pas trop de pression pour ne pas détruire les structures du champignon, car elles sont extrêmement fragiles. Le colorant doit agir pendant environ 3 à 4 minutes.

- Passé ce délai, la préparation est prête à être observée au microscope avec un grossissement 10X ou 40X. Si une observation 100X est requise, une huile d'immersion doit être utilisée.

- Les structures du champignon, en général, sont colorées en bleu, à l'exception des champignons dématiacés qui conserveront leur couleur brune caractéristique de ce type de champignon.

Coloration directe des échantillons biologiques

S'il est nécessaire d'étudier un échantillon biologique direct, tel que des crachats, du pus, des exsudats, des sécrétions, entre autres, ceux-ci doivent avoir une procédure préalable de décontamination de l'échantillon. Une solution de NaOH est utilisée pour cela.

Dans le cas d'échantillons de cheveux, ceux-ci peuvent être teints directement.

Plusieurs cheveux atteints (10 au total) sont prélevés sur les lésions présumées de teigne (zones alopéciques) et placés sur une lame (3 à 4 cheveux par lame). Quelques gouttes de bleu de lactophénol sont placées sur le dessus et immédiatement recouvertes d'une lamelle.

Saisissez la lame avec une pince et chauffez doucement sur un brûleur. Pour ce faire, effectuez 3 à 4 passages rapides à travers la flamme. Observez le microscope à 40X et recherchez les spores à l'extérieur ou à l'intérieur des cheveux (ectothrix ou endothrix respectivement). Si nécessaire, ajoutez de l'huile d'immersion et observez à 100X.

Coloration du tube germinatif lors de l'identification

Après incubation de la culture présomptive de Candida albicans dans du sérum humain pendant 2 à 4 heures à 37 ° C, une partie de la solution est prélevée et colorée au bleu de lactophénol. La préparation est observée au microscope à 40X. Le tube germinatif est présent et les blastospores se colorent en bleu vif.

Fiche de données de sécurité Lactophenol

La National Fire Protection Association (NFPA), établit la fiche de données de sécurité des substances chimiques en termes de risque qu'elle représente selon divers aspects, ceux-ci sont symbolisés par un losange coloré et un nombre allant de 0- Quatre.

Les dangers pour la santé sont identifiés en bleu, l'inflammabilité en rouge, l'instabilité ou la réactivité en jaune et tout danger particulier en blanc.

Santé

Le risque pour la santé posé par le bleu de lactophénol selon la NFPA est de niveau 3. Cela signifie que la substance est extrêmement dangereuse lorsqu'elle est ingérée ou en contact direct avec la peau ou les muqueuses.

C'est une substance hautement corrosive et irritante.

Au contact de la peau et des muqueuses, il provoque de graves brûlures.

S'il est ingéré, il peut provoquer des maux de tête, de la confusion, de la léthargie, une perte de conscience, un arrêt respiratoire et même la mort.

Inflammabilité

Selon la NFPA, le Lactophenol Blue est classé niveau 1 pour l'inflammabilité. Cela signifie qu'il ne brûle que s'il est chauffé au-dessus de 94 ° C.

Instabilité

Classé selon la NFPA au niveau 0 (zéro) en termes de réactivité. Cela signifie qu'il ne présente aucun risque de réactivité, c'est-à-dire qu'il s'agit d'une substance chimiquement stable.

Dangers particuliers

Il n'offre aucun risque spécial supplémentaire.

Références

1. Laboratoire SAR. Bleu de lactophénol. 2010. Disponible sur: labsar.com.
2. Laboratoire de chimie clinique appliquée. Bleu de lactophénol. 2015. Disponible sur: cromakit.es
3. Laboratoires Merck. Microscopie au bleu de lactophénol en solution. 2017. Disponible sur: Users / Equipo / Downloads
4. Carte d'urgence. Solution de bleu de lactophénol pour la coloration fongique. Universidad Pontificia Javeriana, Bogotá, Colombie. 2014. Disponible sur: javeriana.edu.co
5. González M, Diamont D, Gutiérrez B. Technique de coloration des structures fongiques avec des colorants végétaux comme alternative non polluante. Bioagro, 2011; 23 (1): 65-68. Disponible chez: Redalyc.
6. Laboratoire Himedia. Bleu de coton lactophénol. 2017. Disponible sur: himedialabs.com
7. Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, Acteur J, Dasgupta A. Tests biochimiques et techniques de coloration pour l'identification microbienne. Science Direct, 2017; 61-73. Disponible auprès de: Elsevier