SAFRANINE: CARACTÉRISTIQUES, UTILISATION, TECHNIQUES, TOXICITÉ - CHIMIE - 2025

La safranine est un colorant mériquinoïde, nommé pour sa structure chimique comportant deux anneaux benzénoïdes et de 2 anneaux quinoïdes, ces derniers étant ceux qui donnent la couleur rouge.

Il est également appelé diméthyl safranine ou rouge basique 2 dans sa forme courte, car son nom scientifique est 3,7-diamino-2,8-diméthyl-5-phényl-phénaziniumchloro diméthyl safranine et la formule chimique est C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Structure chimique de la safranine indiquant les anneaux benzénoïdes et quinoïdes / Solution aqueuse de safranine. Source: NEUROtiker édité par MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Il existe une variante appelée triméthyl-safranine mais il n'y a pas de différence significative entre les deux substances.

La safranine est un colorant monochromatique et, selon les caractéristiques de la formule chimique, est une substance chargée positivement. Par conséquent, il a une affinité pour les structures chargées négativement. Ces structures seront colorées en rouge.

Cette propriété lui confère une applicabilité dans de nombreuses techniques histologiques pour colorer diverses structures cellulaires, à la fois d'organismes eucaryotes et procaryotes.

La safranine est utilisée comme colorant de contraste dans des techniques importantes et bien connues pour une utilisation de routine en bactériologie. Ces techniques sont: la coloration de Gram-Hucker, la coloration de Schaeffer Fulton pour les spores ou la coloration de capsules bactériennes, entre autres.

caractéristiques

La couleur du safran (une épice obtenue à partir des stigmates de la fleur de Crocus sativus) a été l'inspiration pour nommer ce colorant. Du terme safran vient le nom de safranine. Cela est dû à la grande similitude entre la couleur du safran et la coloration fournie par ce colorant.

La safranine est disponible sous forme de cristaux ou de poudre, les deux présentations étant solubles dans l'eau. Le colorant safranine est inodore. Tache les structures en rouge. Les structures qui attirent le colorant safranine sont appelées safranophiles.

Structurellement, la safranine est complexe, elle possède deux anneaux benzénoïdes aux extrémités et au centre se trouvent les deux anneaux quinoïdes où se trouve le cation N ⁺. Le centre de la structure est le système en charge de fournir la couleur. En raison de cette caractéristique, ce colorant est classé dans la catégorie II.

Utilisation

La safranine est utilisée pour colorer diverses structures. Met particulièrement en évidence les cellules de Kulchitsky présentes dans le tractus gastro-intestinal, également appelées cellules d'entérochromaffine.

Il est capable de colorer les microorganismes appartenant à la famille des Rickettsiaceae. De même, il est utilisé dans diverses techniques, comme la méthode Koster, une méthode modifiée pour colorer les bactéries du genre Brucella.

D'autre part, la safranine est utilisée dans la technique de coloration des spores de Schaeffer Fulton et dans la coloration de Gram-Hucker. Dans les deux techniques, la safranine fonctionne comme un colorant de contraste.

Dans la première, les spores prennent la couleur du vert malachite et le reste des structures est rouge par la safranine. Dans la seconde, les bactéries Gram négatives perdent la couleur du cristal violet lors de l'étape de décoloration, donc la safranine est celle qui colore les bactéries Gram négatives en rouge.

De plus, la safranine est utilisée en bactériologie pour préparer des milieux d'agar Brucella avec une dilution de safranine 1: 5000. Ce milieu sert à différencier l'espèce Brucella suis du reste de l'espèce. Brucella melitensis et Brucella abortus poussent sur ce milieu mais B. suis est inhibé.

Dans le domaine agro-industriel, la safranine a été utilisée à 2,25% et diluée à 1:10 pour colorer les échantillons de tige de l'usine de canne à sucre.

Cette plante est communément affectée par la bactérie Leifsonia xyli subsp. xyli, qui endommage le xylème de la plante. Les tiges colorées sont évaluées pour déterminer la fonction des vaisseaux du xylème.

Techniques dans le domaine de la bactériologie

Teinture Castañeda pour teinture r

Un frottis sanguin ou tissulaire est placé dans une solution tampon (tampon phosphate pH 7,6). Laisser sécher spontanément puis recouvrir de bleu de méthylène pendant 3 minutes et contre-colorer avec de la safranine. Les rickettsies sont colorées en bleu, contrastant avec le fond rouge.

Coloration Koster modifiée pour

Un frottis est fait et flambé dans le briquet pour la fixation. Ensuite, il est recouvert d'un mélange de 2 parties de safranine aqueuse saturée avec 3 parties de solution 1 mol / L de KOH, pendant 1 minute. Un lavage est effectué avec de l'eau distillée et contre-coloré avec 1% de bleu de méthylène carbolique.

Si l'échantillon contient des bactéries du genre Brucella, elles apparaîtront en orange sur fond bleu.

Coloration de la capsule bactérienne

Un mélange de suspension bactérienne est fait avec de l'encre de Chine et de la safranine est ajoutée. Au microscope, un halo rougeâtre apparaîtra autour de chaque capsule bactérienne avec un fond noir.

Coloration des spores

Une propagation est faite avec la suspension bactérienne. Ensuite, il est fixé à chauffer. Il est recouvert de 5% de vert malachite, brûlant fréquemment jusqu'à l'émission de vapeurs. Le processus est répété pendant 6 à 10 minutes. Enfin, il est lavé à l'eau et contre-coloré avec 0,5% de safranine pendant 30 secondes. Les bacilles se colorent en rouge et les spores en vert.

Coloration de Gram-Hucker

Un frottis est réalisé avec une suspension bactérienne et fixé à la chaleur. Couvrir la lame de cristal violet pendant 1 minute. Ensuite, le lugol est placé sous forme de solution mordante pendant 1 minute. Ensuite, il est blanchi avec de l'alcool acétonique et enfin contre-coloré avec de la safranine pendant 30 secondes.

Les bactéries Gram positives colorent le violet bleuâtre et les bactéries Gram négatives en rouge.

Certains laboratoires ont cessé d'utiliser la technique Gram-Hucker pour adopter la technique Gram-Kopeloff modifiée. Dans ce dernier, la safranine est remplacée par la fuchsine basique. En effet, la safranine colore faiblement les espèces des genres Legionella, Campylobacter et Brucella.

Techniques dans le domaine de l'histologie

Coloration des cellules de Kulchitsky (entérochromaffines)

Les coupes de tissu du tractus gastro-intestinal sont colorées avec du chlorure d'argent. Il est ensuite décoloré avec du thiosulfate de sodium et enfin contre-coloré avec de la safranine.

Les cellules de Kulchitsky se distinguent par la présence de granules brun noirâtre.

Tache d'arthrose

Parce que la safranine a une charge positive, elle se lie très bien aux groupes carboxyle et sulfate des glycosaminoglycanes. Ceux-ci font partie des protéoglycanes qui composent le cartilage articulaire. En ce sens, lors de la coloration avec la safranine O, il est possible d'identifier s'il y a ou non perte de cartilage.

La perte de tissu cartilagineux peut être mesurée à l'aide de l'échelle de Mankin ou également appelée échelle d'arthrose.

La technique est expliquée ci-dessous: la coupe histologique est immergée dans un bac avec la solution d'hématoxyline ferrique de Weigert, puis passée dans de l'alcool acide et lavée à l'eau.

Poursuivez le processus de coloration en immergeant la feuille en vert rapide, elle est lavée avec de l'acide acétique et maintenant elle est immergée dans la safranine O. Pour terminer le processus, elle est déshydratée à l'aide d'alcools à différentes concentrations dans l'ordre croissant. La dernière étape nécessite du xylène ou du xylène pour que l'échantillon se clarifie.

Les lames sont conditionnées avec du baume du Canada ou similaire pour être observées au microscope.

Avec cette technique, les noyaux sont colorés en noir, l'os en vert et le cartilage où se trouvent les protéoglycanes en rouge.

Colorant pour l'identification des macroalgues

Pérez et al ont proposé en 2003 une technique simple et peu coûteuse pour teindre les macroalgues. Les échantillons sont préparés en coupes histologiques à la paraffine. Les coupes sont fixées avec 1% de glycérine, ce qui leur permet de sécher complètement. Il est ensuite placé dans du xylol pour éliminer la paraffine.

La coupe est réhydratée en la passant à travers une série de plateaux contenant de l'éthanol à différents degrés de concentration (ordre décroissant), pendant 2 min dans chacun.

Ensuite, il est coloré pendant 5 minutes avec un mélange 3: 1 de safranine à 1% avec 1% de bleu de toluidine, tous deux préparés avec de l'éthanol à 50%. Trois gouttes d'acide picrique sont ajoutées au mélange, qui agit comme un mordant.

Puis il est déshydraté en passant à nouveau dans les plateaux à alcool, mais cette fois de manière ascendante. Enfin, il est rincé au xylol et l'échantillon est préparé avec du baume du Canada pour être observé.

Toxicité

Heureusement, la safranine est un colorant qui ne représente pas un danger pour ceux qui la manipulent. C'est un colorant inoffensif, non cancérigène et non inflammable.

Le contact direct avec la peau ou les muqueuses peut provoquer une légère rougeur de la zone, sans complications majeures. Pour cela, il est recommandé de laver la zone touchée avec beaucoup d'eau.

Références

1. García H. Colorante safranina O. Technicien en santé, 2012; 1 (2): 83-85. Disponible sur: medigraphic.com
2. Coloration Gil M. Gram: fond de teint, matériaux, technique et utilisations. 2019. Disponible sur: lifeder.com
3. Coloration de Gil M. Spore: justification, techniques et utilisations. 2019. Disponible sur: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, l'encyclopédie libre. 7 mars 2017, 10:39 UTC. 3 août 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Technique de coloration utile dans l'interprétation anatomique de Gracilariopsis tenuifrons et Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponible sur: scielo.org.
6. Église Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relation entre la fonctionnalité des vaisseaux du xylème et la présence de Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Disponible sur: scielo.sld