GÉLOSE CZAPEK: JUSTIFICATION, PRÉPARATION, UTILISATIONS ET LIMITES - LA BIOLOGIE - 2024

Le Czapek (CZA) est un milieu solide sélectif spécialement conçu pour la culture de bactéries et de champignons saprophytes. Il a été créé par le botaniste Friedrich Johann Franz Czapek, d'origine polonaise, et le chimiste américain Arthur Wayland Dox; pour cette raison, cette gélose est également connue sous le nom de milieu Czapek-Dox.

Le milieu d'origine était liquide, mais de la gélose a ensuite été ajoutée pour en faire un milieu solide. Le milieu Czapek est composé de nitrate de sodium, de phosphate bipotassique, de sulfate de magnésium, de chlorure de potassium, de sulfate ferreux, de saccharose, de gélose et d'eau distillée.

Gélose Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Source: A. Medmyco / B. Photo: Dr David Midgley. Wikipedia.com

Le pH de la gélose Czapek est de 7,3, mais il existe une variante à laquelle on ajoute 10% d'acide lactique dont le pH reste à 3,5. Ce milieu acide est utilisé pour la culture de microorganismes acidophiles.

D'autre part, certaines maisons commerciales ont modifié la composition de l'agar Czapek en changeant le sulfate de magnésium et le phosphate bipotassique par du glycérophosphate; cette modification empêche la formation du précipité de phosphate de magnésium observé avec la formule classique. De même, il existe une autre variante à laquelle est ajouté un extrait de levure.

Enfin, la gélose Czapek est recommandée par l'American Public Health Association APHA pour l'étude des Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp et Penicillium sp. Ces espèces se caractérisent par le fait qu'elles sont des microorganismes environnementaux et des agents pathogènes opportunistes.

Base

Ce milieu contient du saccharose; Cet hydrate de carbone sert de source de carbone, tandis que le nitrate de sodium est la source d'azote, mais contrairement à d'autres milieux, l'azote fourni est inorganique.

Pour cette raison, le milieu Czapek est considéré comme sélectif, car seuls les micro-organismes capables d'utiliser des composés inorganiques comme seule source d'azote peuvent se développer.

Le phosphate bipotassique est une substance régulatrice de l'osmolarité du milieu. Pour leur part, le sulfate de magnésium, le chlorure de potassium et le sulfate ferreux fournissent des minéraux essentiels à la croissance des microorganismes saprophytes (libres). Cette formule forme un précipité de phosphate de magnésium.

Enfin, l'agar-agar est le composé qui confère la consistance solide au milieu et l'eau est le solvant de tous les composants.

Avec la formule d'agar Czapek modifiée, il n'y a pas de formation de précipité et elle améliore les performances de croissance de certains champignons.

L'acidité extrême de l'Acid Czapek Agar en fait un milieu plus sélectif, ne permettant que la croissance de microorganismes acidophiles, capables d'utiliser de l'azote inorganique. Pendant ce temps, la gélose Czapek-levure améliore les performances de certains champignons.

préparation

Czapek-Dox moyen

Peser 49 g du milieu de culture déshydraté et dissoudre dans l'eau distillée. Chauffez jusqu'à ébullition. Secouez le mélange fréquemment jusqu'à dissolution complète.

-Centres d'agar Czapek

Répartir le mélange dissous dans des tubes et autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Lors du retrait de l'autoclave, homogénéiser avant de poser les tubes et laisser solidifier.

-Plateaux de gélose Czapek

Autoclave le mélange dissous à 121 ° C pendant 15 minutes et laisser refroidir à 50 ° C, homogénéiser et verser 20 ml dans des boîtes de Pétri stériles. Laisser solidifier, retourner et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation.

Le pH doit rester à 7,3 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est blanche et le milieu préparé est ambre clair, légèrement trouble en raison de la présence d'un précipité floculant.

Milieu Czapek à pH acide

Préparer comme déjà décrit, mais en ajoutant 10 ml d'acide lactique stérile à 10% pour chaque litre de milieu préparé. Le milieu Czapek modifié doit être à pH 3,5 ± 0,2.

Médium Czapek modifié

Peser 45,4 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Le reste de la préparation est le même que celui décrit ci-dessus. La couleur du milieu déshydraté est blanche et le milieu préparé est blanchâtre. Le pH final du milieu est de 6,8 ± 0,2.

Milieu Czapek-levure

Aussi appelé Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Il contient les éléments de la gélose Czapek classique plus un extrait de levure.

Utilisation

Le milieu Czapek est utilisé pour rechercher des microorganismes saprophytes dans des échantillons de sol, de légumes, de céréales, d'air, d'insectes, entre autres.

La gélose Czapek à pH acide est utilisée pour la croissance de microorganismes acidophiles, tandis que la gélose Czapek modifiée est particulièrement utile pour la formation de chlamydospores dans les espèces du complexe Candida albicans.

Enfin, la gélose Czapek-levure est très utile pour l'isolement d'Aspergillus et de Penicillium.

Semé

-Gélose Czapek

Pour rechercher des Actinomycètes dans le sol, procédez comme suit: l'échantillon est traité avec de l'eau phénolisée pendant 30 min puis 1 mL de la suspension est semé sur gélose Czapek. Incuber à 28 ° C pendant 5 à 7 jours.

Pour les échantillons de légumes, de céréales et d'insectes, ils sont placés directement sur la gélose. Vous pouvez également faire des dilutions et ensemencer 0,1 ml sur la surface de la gélose.

-Gélose Czapek modifiée

Pour l'ensemencement, une boucle ou une aiguille droite est utilisée, elle est imprégnée de l'écouvillon et la gélose est ensemencée en faisant une ponction jusqu'à ce qu'elle touche la base de la plaque. Incuber pendant 24 heures à 28 ° C et examiner au microscope au-dessus et en dessous de la plaque pour voir si des chlamydospores se sont formées.

Température et durée d'incubation

La température et la durée d'incubation varient en fonction du type de microorganisme à isoler. Les plaques sont généralement incubées pendant une à deux semaines dans une plage de température de 20 à 25 ° C.

Cependant, il existe des conditions spécifiques pour certaines souches. Par exemple, la plupart des espèces du genre Aspergillus poussent de manière optimale à 30 ° C; cependant A. fumigatus pousse à 50 ° C.

Concernant le temps d'incubation une ou deux semaines est normal, cependant, Candida albicans peut se développer en 24 à 48 heures à 25 ° C.

Caractéristiques de certaines colonies sur ce milieu

-Penicillium atrovenetum

Il se développe en 12 jours d'incubation à 27 ° C. Leurs colonies sont petites (25 mm).

Les colonies ont un aspect velouté, avec une bordure blanche définie et une teinte bleu-vert au centre qui devient grise en vieillissant. Le revers de la colonie est orange, ce qui rend le milieu de la même couleur en raison de la production de pigment.

-Aspergillus niger

Il se développe avec du mycélium blanc à jaune et des spores noires.

-Candida albicans

Des colonies beige clair crémeux se développent. Dans la gélose Czapek modifiée, il forme des chlamydospores.

-Aspergillus parasiticus

Un mycélium vert foncé se développe en 7 jours à 25 ° C.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité du milieu de culture, des souches de contrôle certifiées peuvent être plantées, telles que: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger développe un mycélium blanc à jaune et des spores noires en environ 5 jours, tandis que Candida albicans aura une croissance satisfaisante en 24 heures d'incubation à 25 ° C; les colonies sont de couleur crème.

Limites

Certaines études ont révélé que pour la récupération des Actinomycètes, la gélose avec le meilleur rendement est la gélose dextrose de pomme de terre, la gélose Czapek étant en deuxième position, mais pour la récupération d'Aspergillus et de Penicillium, la gélose Czapek est celle qui offre le taux de récupération le plus élevé.

Références

1. Dávila M et coll. Actinomycètes antagonistes contre les champignons phytopathogènes d'importance agricole. Rev. Mex. Science. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponible sur: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Blés Á. Isolement de souches d'Aspergillus niger, produisant de l'ochratoxine A, dans du café vert stocké (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Disponible sur.scielo.org.
3. Contributeurs Wikipedia. Czapek moyen. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 13 janvier 2019, 20h30 UTC. Disponible sur: en.wikipedia.org
4. Laboratoires Conda Pronadisa. Gélose Czapek-Dox modifiée. Disponible sur: condalab.com
5. Microkit des milieux de culture. Gélose Czapek-Dox. Diosponible sur: Medioscultivo.com