MEDIUM SIM: FONDATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le milieu SIM est une gélose semi-solide et différentielle, spécialement conçue pour aider à identifier certaines bactéries, en particulier les Enterobacteriaceae. Il est composé de triptein, peptone, sulfate de fer, sulfate d'ammonium, thiosulfate de sodium et agar.

Ce milieu permet la réalisation de trois tests importants: la production d'hydrogène sulfuré (H ₂ S), la formation d'indole et la motilité, d'où l'acronyme SIM. En raison de sa grande utilité, il ne peut être absent d'un laboratoire de bactériologie.

A. Support SIM commercial B. Test SIM H2S (-), Indole (-) et Motilité (+) et Test SIM H2S (+), Indole (-), Motilité (+). Source: A. Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Contrairement à d'autres milieux, il doit être semi-solide pour que la capacité de mouvement de certaines bactéries soit détectable. En ce sens, ce test fonctionne très bien pour les Enterobacteriaceae, mais pas dans les bâtonnets Gram-négatifs non fermentants, où d'autres méthodes sont préférées, telles que la goutte suspendue.

Le support SIM permet de distinguer certaines propriétés spécifiques qui caractérisent certaines bactéries par rapport à d'autres. Par exemple, Escherichia coli se distingue par H ₂ S (-), Indole (+) et motilité (+), tandis que Proteus mirabilis est H ₂ S (+), indole (-), motilité (+).

Base

C'est un milieu de culture considéré comme différentiel, car son utilisation distingue les microorganismes capables de produire du sulfure d'hydrogène de ceux qui ne le font pas; il met également en évidence ceux qui forment l'indole à partir du tryptophane de ceux qui ne le font pas, et différencie finalement les bactéries mobiles des bactéries immobiles.

Source d'énergie

Comme tout milieu de culture, il contient des éléments qui fournissent les nutriments nécessaires pour que des micro-organismes non exigeants puissent se développer. Ces éléments sont représentés par les peptones et la triptein.

Le développement du microorganisme dans le milieu est essentiel pour pouvoir observer la présence ou l'absence des caractéristiques que ce milieu évalue.

Production de sulfure d'hydrogène

La lettre S de l'acronyme SIM fait référence à la production de sulfure d'hydrogène (H ₂ S). Les bactéries capables de former du sulfure d'hydrogène absorberont le soufre du thiosulfate de sodium.

Une fois le H ₂ S - gaz incolore - formé, il réagit avec le sel de fer présent dans le milieu, formant du sulfure ferreux, bien visible (précipité noir). Les bactéries qui ne forment pas H ₂ S, quittent le milieu de la couleur d'origine (beige).

La présence du précipité noir peut gêner l'interprétation de la motilité. Cependant, la plupart des entérobactéries productrices de H ₂ S sont connues pour être positivement motiles, comme Salmonella, Proteus et Citrobacter. De plus, le précipité noir qui recouvre presque tout le milieu suggère une motilité positive.

Formation d'indole

La deuxième lettre de l'acronyme SIM est "I", qui représente la formation de l'indole.

En ce sens, la triptein, en plus d'être une source de nutriments, remplit une autre fonction fondamentale. Cette peptone est riche en un acide aminé appelé tryptophane, par conséquent, elle peut montrer des bactéries qui produisent de la tryptophanase.

Cette enzyme est responsable du clivage de l'acide aminé tryptophane, avec la formation conséquente d'indole (substance incolore), d'acide pyruvique et d'ammonium.

C'est pourquoi, pour montrer cette réaction, il faut ajouter une substance révélatrice (réactif d'Ehrlich ou réactif de Kovac). L'un ou l'autre réagit avec l'indole, formant une substance en forme d'anneau rouge-fuchsia à la surface de l'agar. Si l'anneau fuchsia apparaît, le test indole est interprété comme positif.

Les bactéries qui ne possèdent pas cette enzyme ne formeront pas l'anneau et cela est interprété comme un test d'indole négatif.

Il est important de souligner que le test d'indole doit être le dernier à être interprété, car une fois le réactif ajouté, le milieu devient trouble, ce qui rend difficile la visualisation de la motilité.

La motilité

Enfin, la lettre «M» du mot SIM signifie motilité. Afin d'évaluer la motilité, ce milieu est stratégiquement semi-solide, car cette caractéristique est essentielle pour pouvoir observer s'il y a ou non mouvement bactérien. Les bactéries qui possèdent des flagelles sont celles qui donnent ce test positif.

Un test positif sera évident lorsque la turbidité est observée, à la fois dans l'inoculum initial et autour de lui. Tandis que les bactéries non mobiles ne se développent que sur le chemin de l'inoculum initial.

préparation

SIM moyenne

Peser 30 g de milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes puis porté à ébullition en remuant fréquemment jusqu'à dissolution complète.

Répartir le mélange dans des tubes à essai avec des bouchons en coton et autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Retirez le support de tubes de l'autoclave et laissez-le se solidifier en position verticale, de sorte que le milieu ait la forme d'un bloc.

Pour sa conservation, il est conservé au réfrigérateur jusqu'à son utilisation. Le milieu préparé doit avoir un pH final de 7,3 ± 0,2.

Au moment de l'inoculation du milieu, celui-ci doit être à température ambiante. La couleur du milieu est beige.

Réactif de Kovac

Mesurez 150 ml d'alcool amylique, isoamylique ou butylique. (Utilisez l'un des trois mentionnés).

Dissolvez 10 g de p-diméthylaminobenzaldéhyde. Ajoutez ensuite lentement 50 ml d'acide chlorhydrique concentré.

Le réactif prêt à l'emploi est incolore ou jaune clair. Il doit être conservé dans une bouteille ambrée et conservé au réfrigérateur. Ne pas utiliser s'il vire au brun foncé; cela indique qu'il est endommagé. Ce réactif est préféré lorsqu'il s'agit d'entérobactéries.

Réactif d'Erlich

Peser 2 g de p-diméthylaminobenzaldéhyde et dissoudre dans 190 ml d'alcool éthylique absolu et mélanger lentement avec 40 ml d'acide chlorhydrique concentré. Conservez de la même manière le réactif Kovac. Le réactif d'Ehrlich est le plus utilisé pour les bactéries non fermentantes et anaérobies.

Applications

Le milieu SIM est très utilisé dans les laboratoires de bactériologie. Son avantage est que trois caractéristiques essentielles peuvent être observées dans le même tube dans l'identification des entérobactéries.

Semé

La bonne façon de semer ce milieu est d'utiliser l'aiguille, avec laquelle une partie de la colonie pure à étudier est prélevée et insérée au centre du milieu verticalement. Une seule fente doit être effectuée. La crevaison ne doit pas atteindre le fond du tube, la bonne chose est de ne couvrir que les deux tiers de la profondeur.

La répétition de l'inoculum n'est pas recommandée, car cela peut conduire à de fausses interprétations de la motilité positive. Le milieu inoculé est incubé en aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures.

Une fois le temps écoulé, on observe s'il y a eu ou non production de H ₂ S et la motilité est lue. Enfin l'indole est révélé, en ajoutant 3 à 4 gouttes de réactif d'Ehrlich ou de Kovac, mélanger doucement et interpréter.

Source: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.

Contrôle de qualité

A titre de contrôle de stérilité, un ou deux tubes sont incubés sans inoculation dans une étuve à 37 ° C pendant 24 heures. On s'attend à ce qu'après cette période, il n'y ait pas de croissance ou de changement de couleur.

Comme contrôle de qualité, des souches certifiées connues peuvent être utilisées, telles que: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Les résultats attendus sont: Escherichia coli H ₂ S négatif, indole et motilité positive, Enterobacter aerogenes uniquement motilité positive, Salmonella typhimurium H ₂ S et motilité positive, avec indole négatif. Proteus vulgaris tous positifs, tandis que Klebsiella pneumoniae et Shigella sont tous négatifs.

Limites

-Certaines souches de Morganella morganii, entre autres, peuvent produire un pigment brunâtre dans ce milieu en raison de la production de mélanine, cela ne doit pas être confondu avec le précipité de sulfure ferreux. Chez les professionnels inexpérimentés, cette situation peut générer des faux positifs dans l'interprétation du test H ₂ S.

-Les bactéries aérobies strictes ne se développeront qu'à la surface du tube, ce qui rend difficile l'interprétation de la motilité.

Références

1. Laboratoires BD. BBL SIM Medium. 2008. Disponible sur: bd.com
2. Laboratoires Neogen. Moyen SIM. Disponible à: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Moyen SIM. 2009. Disponible sur:
4. Laboratoire Brizuela-Lab. SIM moyenne. Disponible sur:.brizuela-lab.com
5. Laboratoires Britannia. SIM moyenne. 2015. Disponible sur: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.