HÉMOCULTURE: À QUOI ÇA SERT, JUSTIFICATION, PROCÉDURE, RÉSULTATS - LA BIOLOGIE - 2025

L' hémoculture est un test bactériologique qui cherche à détecter la présence de micro-organismes dans le sang. Le sang est un liquide stérile par nature et doit donc être conservé dans des conditions physiologiques, de sorte que la présence de bactéries ou de champignons dans le sang est toujours pathologique.

Lorsque des bactéries ou des champignons se trouvent dans le sang, mais que la multiplication ne dépasse pas l'élimination des microorganismes par le système immunitaire, on parle de bactériémie (pour les bactéries) ou de fongémie (pour les champignons); Mais si les micro-organismes augmentent en nombre de manière incontrôlable, on parle de septicémie.

Flacons d'hémoculture (jaune: aérobiose pédiatrique, vert: aérobiose adulte et rouge: anaérobiose adulte). Source: photographie prise par l'auteur MSc Marielsa Gil.

La bactériémie, la fongémie et la septicémie mettent en danger la vie du patient et doivent donc être traitées immédiatement. C'est pourquoi, en cas de suspicion d'infection dans le sang, les médecins demandent une étude d'hémoculture.

Cette analyse bactériologique permet de savoir s'il existe ou non une infection dans le sang et quel est le microorganisme impliqué. De plus, s'il est positif, un test de sensibilité est effectué pour savoir quel antibiotique ou antifongique pourrait être utilisé dans le traitement.

Si, en revanche, l'hémoculture est négative à 24 heures d'incubation, elle ne doit pas être jetée jusqu'à ce qu'elle atteigne 240 heures de négatif. Cela garantit qu'il n'y a pas de micro-organismes à croissance lente.

Pour qu'une hémoculture soit fiable, des mesures aseptiques extrêmes doivent être adoptées lors du prélèvement de l'échantillon, et pour augmenter la fiabilité et la sensibilité du test, un minimum de deux échantillons doit être prélevé pendant ou près du pic de fièvre.

Pourquoi est-ce?

Le sang est un liquide stérile et lorsque des micro-organismes y sont trouvés, il est 100% pathologique. Cette situation représente un tableau clinique très délicat qui compromet la vie du patient.

L'hémoculture est un test bactériologique important qui détecte la présence de micro-organismes dans la circulation sanguine.

Les microorganismes peuvent atteindre le sang par différentes voies, qui pourraient être des infections extravasculaires telles que: pneumonie, infections intra-abdominales, pyélonéphrite, infections cutanées graves, tissus mous ou arthrite, entre autres.

Ou il peut également s'agir par voie intraveineuse, par exemple, de contamination de cathéters intraveineux ou artériels, d'endocardite, de toxicomanie intraveineuse, d'administration de médicaments ou de solutions contaminés, etc.

La détection et le traitement à temps de l'agent causal de la septicémie sont essentiels pour assurer la survie du patient.

En ce sens, le médecin doit indiquer la réalisation d'une hémoculture lorsqu'il observe des signes et symptômes laissant présager une septicémie, tels que: fièvre (supérieure à 38 ° C) sans foyer infectieux apparent ou, au contraire, hypothermie (<de 36 ° C).

D'autres signes peuvent être: frissons, augmentation du nombre de globules blancs (> 10 000 cellules / mm ³) ou diminution significative des cellules polymorphonucléaires (<1 000 PMN / mm ³). Ainsi que la détérioration de plusieurs organes ou la perte de vitalité soudaine, entre autres signes avant-coureurs.

La bactériémie peut être constante, transitoire ou intermittente. Ceci est important pour l'échantillonnage, car il est nécessaire de le prendre lorsqu'il y a une plus grande probabilité de trouver le micro-organisme en circulation.

Par conséquent, il est recommandé de prélever au moins 2 échantillons à différents endroits. De plus, l'idéal est que l'échantillon soit prélevé en pics fébriles ou lorsque le patient présente des frissons, une hypothermie extrême, des sueurs ou une tachycardie.

Cependant, pour que l'hémoculture soit un outil vraiment utile, l'échantillon doit être prélevé avec un soin extrême. Une mauvaise manipulation ou une mauvaise asepsie au moment du prélèvement peut invalider le test, obtenant de faux positifs.

Base

L'étude consiste à prélever deux ou trois échantillons sanguins de manière aseptique et à les placer dans des flacons spéciaux.

Les dispositifs spéciaux pour la culture d'échantillons sanguins sont appelés flacons d'hémoculture. Ceux-ci sont classés en:

Selon l'âge du patient

-Utilisation pédiatrique

-Pour adultes.

Selon le type de microorganisme

-Flasques pour microorganismes aérobies (bactéries aérobies, bactéries facultatives et champignons).

-Bouteilles de culture sanguine pour microorganismes anaérobies (bactéries anaérobies strictes).

Certains contiennent un milieu de culture liquide et certains contiennent un milieu de culture solide et liquide en même temps. Ils existent également avec des particules de charbon actif.

Processus

Recommandations d'échantillonnage

- L'échantillon doit être prélevé par un personnel hautement qualifié et formé dans le domaine de la microbiologie.

- L'asepsie ou le nettoyage en profondeur du site de prélèvement des échantillons est sans aucun doute l'étape la plus importante.

- Comme pour tout prélèvement, le personnel de santé doit se conformer pleinement aux mesures de biosécurité pendant le processus (utilisation de gants, blouse, lunettes, entre autres).

- Veillez à ce que tous les outils nécessaires au prélèvement des échantillons soient disponibles.

- Étiqueter les flacons avec le nom complet du patient, la date, le numéro du dossier médical, l'heure de prélèvement de l'échantillon et le numéro de séquence du laboratoire.

-L'idéal est de prélever l'échantillon avant que le patient ne commence un traitement antimicrobien. Il n'est indiqué que dans le cas où le non-fonctionnement du traitement en cours est suspecté. Dans ce cas, l'échantillon doit être prélevé avant le changement de médicament, en utilisant des flacons d'hémoculture avec des inhibiteurs antibiotiques (particules de charbon actif).

- Au moins 2 échantillons doivent être prélevés dans différents sites anatomiques, tels que le bras droit et le bras gauche. En cas d'endocardite suspectée, 3 prélèvements sont recommandés. Deux flacons seront inclus dans chaque échantillon (un pour l'aérobiose et un pour l'anaérobiose).

Quantité d'échantillon

La quantité d'échantillon varie en fonction de l'âge du patient, mais le rapport 1: 5 à 1:10 doit toujours être maintenu par rapport à la dilution du sang / bouillon de culture.

Chez les nouveau-nés, la quantité d'échantillon recommandée est de 1 ml de sang par flacon. Un flacon pédiatrique est utilisé.

Dans le cas des nourrissons entre un mois et un an, il peut être augmenté à 1,5 ml de sang par flacon. Un flacon pédiatrique est utilisé.

Chez les enfants de plus de 2 ans, la quantité d'échantillon appropriée est de 2,5 ml de sang par flacon. Un flacon pédiatrique est utilisé.

Dès l'adolescence, il peut être augmenté à un volume sanguin compris entre 5 et 10 ml par flacon. Un biberon adulte est utilisé.

Enfin, au stade adulte, la quantité nécessaire est de 8 à 10 ml par bouteille. Un biberon adulte est utilisé.

Prise d'échantillon

- L'échantillon de sang peut être veineux ou artériel. Cependant, le sang artériel n'est prélevé que lorsque le prélèvement veineux est impossible.

- Il n'est pas recommandé de prélever un échantillon d'un cathéter veineux central à moins que:

1. Il est impossible de prélever l'échantillon de manière périphérique (veineuse ou artérielle).
2. Patients à risque de saignement.
3. Lorsque le médecin soupçonne une bactériémie due à une contamination du cathéter veineux central.
4. Lorsque la fièvre réapparaît après un arrêt fébrile de 4 à 5 jours, que le patient soit ou non sous traitement antimicrobien.

Asepsie avant prélèvement

- Choisissez les sites anatomiques pour le prélèvement. Généralement, les veines de meilleur calibre sont choisies (veine basilique ou céphalique).

- Selon les Centers for Disease Control (CDC) d'Atlanta (USA), l'opérateur doit se laver les mains avec 2% de chlorhexidine ou 10% de povidone iodée avant le prélèvement, en plus de porter des gants.

-Palpez et localisez la veine à utiliser.

-Nettoyez la zone de ponction de manière rotative, en effectuant des mouvements du centre vers l'extérieur à l'aide de chlorhexidine savonneuse ou d'un savon antiseptique. Rincer avec une solution saline stérile.

Par la suite, appliquez un antiseptique et laissez agir. Exemple de gluconate de chlorhexidine à 0,5% pendant 1 minute ou de povidone iodée à 10% pendant 2 minutes. Pour ce dernier, demandez d'abord si le patient est allergique à l'iode. Si vous êtes allergique, vous pouvez remplacer l'alcool à 70%.

Extraction d'échantillon

- Placer le garrot pour exacerber le flux sanguin et faire germer la veine.

- Ne touchez plus le site de ponction avec votre doigt. Si cela est strictement nécessaire, le doigt doit être lavé de la même manière que la zone de ponction.

-Insérez l'aiguille d'injection ou le cuir chevelu dans la veine et extrayez la quantité de sang nécessaire.

-Ne mettez pas de coton ou de gaze sur l'aiguille lorsque vous la retirez si elle n'est pas stérile.

-Retirez le sceau de sécurité des bouteilles très soigneusement et sans toucher le bouchon. Certains auteurs recommandent de procéder à une désinfection du bouchon avant d'inoculer l'échantillon.

- Distribuez la quantité appropriée de sang dans les flacons. Si l'échantillon est prélevé avec un injecteur, la quantité nécessaire est d'abord versée dans le ballon anaérobie puis dans le ballon aérobie. Si la prise se fait avec le cuir chevelu (papillon), elle est versée dans le sens inverse.

- Mélanger doucement le flacon d'hémoculture par inversion.

- Changez de gants et répétez les étapes précédentes pour le deuxième prélèvement d'échantillons.

-Si le deuxième échantillon est prélevé sur un site différent, cela peut être fait immédiatement, mais s'il provient du même site, vous devez attendre 30 à 90 minutes entre un échantillon et un autre.

- L'échantillon doit être porté au laboratoire le plus rapidement possible, si cela n'est pas possible, il doit être laissé à température ambiante pendant 18 heures maximum.

Cultive

Une fois au laboratoire, les flacons sont incubés à 37 ° C dans les conditions de chaque flacon, c'est-à-dire en aérobiose et en anaérobiose respectivement.

Dans le cadre de la méthode manuelle, la sonnerie doit commencer à 24 heures d'incubation, puis la sonnerie tous les jours. Les anneaux sont réalisés comme suit: d'abord le bouchon du flacon est désinfecté et l'aiguille d'un injecteur stérile est insérée. Le liquide est extrait du ballon et semé sur de la gélose au sang et de la gélose au chocolat.

S'il y a croissance, un Gram est effectué, des repiquages ​​dans des milieux spécifiques, des tests biochimiques et un antibiogramme.

Dans les méthodes automatisées, l'équipement Bact / Alert émet une alarme lorsqu'il détecte qu'un flacon est positif. De la même manière, il doit être tapoté sur de la gélose au sang et de la gélose au chocolat.

Une autre méthode qui gagne du terrain consiste à analyser le ballon après 6 heures d'incubation par spectrométrie de masse. Cette méthode a contribué à augmenter la sensibilité et la rapidité du diagnostic.

Résultats

Tant que le flacon d'hémoculture est négatif, des rapports intermédiaires préliminaires peuvent être remis au médecin traitant. Le rapport indique qu'il est négatif pendant les heures d'incubation. Par exemple, s'il devient négatif jusqu'au quatrième jour, il sera signalé comme suit:

Résultat préliminaire: culture négative à 96 heures d'incubation.

Remarque: l' étude se poursuit pendant 240 heures.

Si l'hémoculture est positive, le médecin traitant est immédiatement informé et un rapport est envoyé avec au moins le gramme de la colonie. Exemple:

Résultat préliminaire: en culture positive à 48 heures d'incubation, on observe des bacilles Gram négatifs et une oxydase négative. Des tests d'identification et de sensibilité sont en cours.

Cette information guide le médecin traitant pour démarrer une thérapie empirique vers l'éventuel microorganisme, en attendant le résultat final du laboratoire.

À la fin de l'étude bactériologique, c'est-à-dire que le micro-organisme a été identifié et que l'antibiogramme est disponible, le rapport final doit être envoyé le plus rapidement possible.

Des précautions particulières doivent être prises si l'organisme cible est Neisseria gonorrhoeae ou Neisseria meningitidis, car ces bactéries sont inhibées en présence de concentrations élevées de polyanéthosulfonate de sodium (SPS).

C'est pourquoi ce composé ne doit pas dépasser 0,025% dans les flacons d'hémoculture.

D'un autre côté, si l'échantillon d'hémoculture est d'abord prélevé dans des tubes Vacutainer, ces tubes ont des concentrations de SPS toxiques pour les méningocoques et les gonocoques, de sorte que le sang doit être transféré en 1 heure dans le système de culture en bouillon.

Comment savoir si une hémoculture est positive ou contaminée

Une hémoculture est considérée comme contaminée lorsqu'il y a croissance dans un seul flacon d'hémoculture sur le total prélevé. Et la suspicion de contamination augmente si le microorganisme isolé est un microbiote cutané normal: exemple: Staphylococcus à coagulase négative, Propionibacterium spp, entre autres.

Cependant, chez les patients immunodéprimés, aucun micro-organisme ne doit être négligé, mais dans ce cas le micro-organisme doit apparaître dans plusieurs échantillons.

En revanche, si la sensibilité aux antibiotiques du même microorganisme isolé dans deux échantillons différents est la même, l'infection est réelle.

Une autre caractéristique est la charge bactérienne, car les hémocultures contaminées se développent tardivement, alors que les infections réelles chez les patients non traités sont généralement positives à 14 heures d'incubation lorsque le microorganisme n'est pas gênant.

En revanche, chez les patients traités avec des antimicrobiens, le microorganisme impliqué peut mettre du temps à se développer car la charge est très faible.

L'apparition de plus d'un micro-organisme peut suggérer une contamination, mais si le même résultat est répété sur plusieurs plans provenant de sites différents, alors c'est réel.

Références

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