COLORATION À L'HÉMATOXYLINE-ÉOSINE: CARACTÉRISTIQUES, UTILISATIONS, TECHNIQUES - CHIMIE - 2024

L' hématoxyline-éosine est une technique de coloration utilisant la combinaison des colorants hématoxyline et éosine. Cette paire de colorants forme un duo parfait, car l'hématoxyline agit comme un colorant basique et l'éosine est un colorant acide.

La désignation des colorants basiques ou acides ne se réfère pas au pH qu'ils obtiennent en solution, mais parle plutôt de la proportion prédominante en termes de charges anioniques ou cationiques qu'ils possèdent ou par la localisation du groupe chromophore.

Épithélium cylindrique cilié coloré à l'hématoxyline-éosine (HE) Source: Todd Straus et Vladimir Osipov

En ce sens, l'hématoxyline est considérée comme un colorant basique (cationique) et a donc une affinité pour les structures acides, telles que le noyau des cellules. Alors que l'éosine, étant un colorant acide (anionique), a une affinité pour les structures alcalines ou basiques, telles que le cytoplasme cellulaire.

Pour cette raison, cette combinaison de colorants est largement utilisée pour la coloration des tissus, car elle permet de distinguer clairement les noyaux et les cytoplasmes. Les noyaux se colorent en bleu foncé ou violet et le cytoplasme en rose.

La coloration à l'hématoxyline-éosine est l'une des techniques de coloration les plus largement utilisées dans le domaine de l'histologie et de la cytologie, en raison de sa manipulation facile et de son faible coût. Il est utilisé pour visualiser les cellules, les fibres nerveuses épaisses et la présence de certains microorganismes dans les tissus, tels que: les parasites, les champignons et les bactéries, entre autres.

caractéristiques

Hématoxyline

L'hématoxyline est un colorant neutre. Cependant, le composant qui fournit la couleur (chromophore) est situé au centre cationique ou basique de la molécule. D'où son affinité pour les structures acides. Sa formule chimique est C ₁₆ H ₁₄ O ₆ et son nom scientifique est 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Il colore principalement les noyaux des cellules, car ils sont très riches en acides nucléiques. Il peut également colorer les inclusions cytoplasmiques d'origine virale.

Pour que l'hématoxyline se tache, elle doit être à l'état oxydé et liée à un métal. Ce dernier servira à se fixer sur le tissu, c'est-à-dire qu'il agira comme un mordant.

Lorsque l'hématoxyline est oxydée, elle s'appelle hémateine. L'oxydation est obtenue par exposition à l'oxygène (vieillissement) du réactif ou par des substances qui contribuent à son oxydation (oxydation chimique).

Éosine

L'éosine est un colorant qui tache en rouge ou en rose. Il est insoluble dans l'eau bien qu'il existe une version soluble dans l'eau. Généralement, l'éosine est préparée par dissolution dans de l'alcool (95 ° éthanol).

Il colore les cytoplasmes, les fibres musculaires, les organites cytoplasmiques et le collagène, mais ne colore pas les noyaux cellulaires. C'est parce qu'il est chargé négativement, par conséquent, il a une affinité pour les structures chargées positivement.

Il existe deux types d'éosine «Y» et «B». L'éosine «Y» est connue sous le nom d'éosine jaune. Son nom scientifique est la tétrabromo fl uorescéine et sa formule chimique est C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

D'autre part, l'éosine «B» est parfois appelée érythrosine bleuâtre B. Son nom scientifique est la dibromodynitro fl uorescéine et sa formule est C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉. Les deux sont très similaires et la différence entre l'utilisation de l'un ou de l'autre n'est pas vraiment perceptible. Cependant, l'éosine "Y" est la plus populaire.

L'éosine a la propriété de faire la distinction entre une cellule vivante et une cellule morte, car elle n'est capable de traverser la membrane pour colorer son cytoplasme que lorsque les cellules sont mortes, laissant le cytoplasme de la cellule incolore s'il reste en vie.

Applications

Coloration des fibres nerveuses

Les fibres nerveuses épaisses peuvent être colorées et identifiées à l'hématoxyline-éosine. Cependant, il n'est pas utile pour colorer les fibres nerveuses minces, car une coloration à l'argent est nécessaire pour visualiser ces dernières.

Taches de coupe histologique de la peau

Dans la coloration de la couche cornée de la peau, le colorant qui agit est l'éosine, car à ce niveau les cellules n'ont pas de noyau.

Dans la couche granulaire de la peau, l'hématoxyline colore fortement les granules de kératohyaline à l'intérieur des cellules granulaires. Au contraire, la couche épineuse de la peau est faiblement colorée à l'hématoxyline, tandis que la couche basale ou germinale est assez tachée.

L'éosine colore le cytoplasme de toutes les cellules et l'intensité de la couleur peut varier d'une couche à l'autre.

Coloration à l'hématoxyline-éosine d'échantillons de selles

Gómez et al., En 2005, ont démontré que la coloration à l'hématoxyline-éosine était plus efficace pour identifier les cas d'amibiase dus à Entamoeba histolytica et Entamoeba dispar que la méthode de visualisation fraîche (solution saline et lugol) chez les patients atteints de maladie diarrhéique aiguë.

Il s'est également avéré très sensible dans la détection de l'érythrophagocytose (amibes qui ont englouti les érythrocytes).

Coloration des coupes histologiques pour le diagnostic de l'infection

Walwyn et al., En 2004, ont proposé l'utilisation de colorants histologiques pour détecter les micro-organismes responsables de l'infection.

Grâce à la coloration à l'hématoxyline-éosine, ils ont pu visualiser les infections causées par Clostridium, Actinomyces, spirilles ou Candida. Ils ont également observé la présence du parasite Sarcoptes escabiei dans des coupes cutanées et des inclusions virales causées par le cytomégalovirus et l'herpès dans des coupes de divers tissus.

Techniques

Pour les échantillons histologiques

La coloration de la coupe histologique passe par une série d'étapes. La première chose est d'obtenir la coupe histologique. Celui-ci doit être ciré pour obtenir plus tard les coupes (ultra-fines) avec un microtome. La technique comprend les étapes suivantes:

1-Élimination de l'excès de paraffine: pour cela, vous pouvez utiliser du xylol ou Heme-D, immerger pendant 3-5 minutes.

2-Réhydratation de l'échantillon: ceci est réalisé en immergeant l'échantillon dans différentes concentrations d'alcools (éthanol) par ordre décroissant (100 °, 90 °, 70 °). Dans tous les cas pendant 7 minutes.

3-Élimination de l'excès d'alcool: pour cela, il est immergé dans l'eau pendant 7 minutes.

4-Coloration à l'hématoxyline: l'échantillon est immergé pendant 6 à 10 minutes dans un plateau contenant de l'hématoxyline. Le temps d'exposition dépend de la taille et de l'épaisseur de l'échantillon.

5-Elimination de l'hématoxyline en excès: elle est lavée à l'eau pendant 5 minutes puis un passage rapide (10-20 secondes) est effectué sur alcool acide. Plus tard, il est à nouveau lavé à l'eau pendant 5 minutes. Puis il est immergé dans l'éthanol à 96 ° pendant 1 minute.

6-Coloration à l'éosine: pour cela, l'échantillon est immergé pendant 5 minutes dans le bac à éosine.

7-Déshydratation de l'échantillon: pour ce faire, il passe par les plateaux à alcool (éthanol), mais cette fois dans l'ordre croissant. (70 °, 90 °, 100 °). (Pendant 5 secondes, 5 secondes, 1 minute respectivement).

8-Clarification de l'échantillon: pour cela, il est exposé au xylol pendant 5 à 10 minutes et séché pour sceller en permanence avec du baume du Canada ou un autre matériau similaire.

Pour les échantillons de selles recherchant

Un frottis est réalisé sur une lame avec les selles du patient et fixé avec de l'alcool à 80% pendant 5 minutes. La feuille est immergée dans l'hématoxyline pendant 5 minutes et immédiatement lavée à l'eau.

Par la suite, il est rapidement immergé dans de l'alcool acide puis dans de l'eau ammoniacale. Il est lavé à l'eau. Il est coloré pendant 5 minutes à l'éosine. L'échantillon est déshydraté comme expliqué dans l'art antérieur et finalement rincé au xylène.

Préparation des réactifs

- Hématoxyline

Dans un litre d'eau distillée, dissolvez 50 grammes de sulfate de potassium ou d'ammonium et d'aluminium. Une fois complètement dissous, ajoutez 1 gramme d'hématoxyline cristallisée. Une fois complètement dissous, 1 g d'acide citrique est ajouté avec 50 g d'hydrate de chloral et 0,2 g d'iodate de sodium.

Le mélange est bouilli pendant 5 minutes, puis laissé à refroidir et filtré pour éliminer les particules solides restées. Le réactif ainsi préparé peut être utilisé immédiatement.

- Éosine

Il peut être préparé avec une base alcoolique ou avec une base aqueuse.

Éosine alcoolique

Dans 100 ml d'éthanol à 95 °, dissolvez 0,5 gramme d'éosine "Y". Ajoutez ensuite quelques gouttes d'acide acétique glacial.

2% d'éosine aqueuse

Dans 1250 ml d'eau distillée, dissolvez 25 grammes d'éosine "Y" soluble dans l'eau. Ajoutez ensuite quelques gouttes d'acide acétique glacial.

Alcool acide

Mesurer 0,5 ml d'acide chlorhydrique concentré et compléter à 100 ml avec de l'alcool absolu.

Eau ammoniacale

Mesurer 0,5 mL d'ammoniaque concentré et compléter à 100 mL avec de l'eau distillée.

Références

1. Navarrete, G. Histologie de la peau. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Disponible sur: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identification d'Entamoeba histolytica / E. Dispar la technique de l'amibe fraîche par rapport à sa coloration à l'hématoxyline-éosine dans la diarrhée aiguë. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Disponible sur: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Utilité des techniques histologiques pour le diagnostic de l'infection dans les échantillons anatomiques. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Disponible sur: scielo.sld
5. Réactifs PanReac AppliChem ITW. Coloration à l'hématoxyline-éosine. 2017, Espagne. Disponible sur: itwreagents.com
6. Éosine. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 7 novembre 2018, 08:18 UTC. 4 août 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. «Hematoxyline». Wikipedia, l'encyclopédie libre. 3 mai 2019, 11:23 UTC. 4 août 2019, 22:48 wikipedia.org