ORCEIN: FONDATION ET PRÉPARATION - CHIMIE - 2025

L' orceína est un violet de couleur naturelle, extrait de divers lichens comme l'orchilla ou archill, le lichen fruticeux Rocella tinctoria et Lecanora parella principalement. La Rocella tinctoria se trouve sur le continent africain et américain, bien qu'elle puisse être remplacée par d'autres espèces situées en Europe.

Cette coloration a été largement utilisée dans les études cytogénétiques depuis l'Antiquité. En ce sens, la préparation d'orcéine qui contient de l'acide acétique a été introduite par LaCourt en 1941, c'est pourquoi elle a été initialement appelée technique LaCourt.

Structure chimique de la solution d'orcéine et d'orcéine. Source: Wikipedia.org/ Oguenther sur de.wikipedia (Dr Guenther)

De même, en raison de sa simplicité et de son faible coût, il a été utilisé pour la fabrication de tournesol (une tache extraite des lichens) et dans des études histologiques (coloration des cellules et des tissus).

Plusieurs études ont utilisé cette coloration combinée à d'autres produits chimiques, tels que le picrocarminate d'ammoniaque et l'acide acétique, pour colorer respectivement les fibres élastiques et les chromosomes. À l'heure actuelle, l'orcéine continue d'être utilisée dans les études cytogénétiques sur les animaux et les plantes.

Récemment, Silva et al. 2017 a utilisé avec succès cette tache pour observer les différents changements qui se produisent dans les fibres élastiques de la peau du pouce chez les personnes âgées chiliennes. Cette étude a révélé comment les fibres du pouce se modifient avec le vieillissement.

En ce sens, on a observé que les fibres élastiques étaient de couleur noir brunâtre chez les individus de plus de 80 ans; tandis que chez les plus jeunes (à partir de 60 ans), ils sont vus comme brun rougeâtre. Le cytoplasme et les autres structures cellulaires virent au vert jaunâtre.

Ceci a permis de corroborer la présence et l'état des fibres élastiques, en termes de disposition, quantité et intégrité. D'autre part, il a également été indiqué que l'orcéine est d'une grande aide pour identifier les anévrismes et diagnostiquer l'artérite, entre autres conditions.

Base

L'orcéine fait partie du groupe des colorants oxazine et la coloration est basée sur son affinité pour l'ADN. Le colorant se lie à la charge négative de cette molécule, représentée par le groupe phosphate. C'est pourquoi, les chromosomes sont colorés en violet.

Cependant, le reste des structures de la cellule prend une couleur différente. Plus précisément, dans le cas des fibres élastiques, elles sont colorées en brun rougeâtre, les noyaux cellulaires du bleu au violet foncé, tandis que le collagène ne tache pas.

Pour cette raison, l'orcéine est utilisée pour colorer la chromatine et différencier le sexe chez certaines espèces de mouches. De même, les noyaux et certaines inclusions hépatiques produits par les antigènes de l'hépatite B peuvent être colorés.

Les solutions d'Orcéine ont des fonctions spécifiques dans la coloration. L'orcéine A a pour fonction de ramollir les membranes cellulaires, provoquant leur mort et paralysant le processus de leur division. Pendant ce temps, l'orcéine B est responsable de compléter la coloration par son adhésion aux chromosomes.

préparation

Solution d'acéto-orcéine 1%

Pour préparer une solution à 1% d'acéto-orcéine, 2 grammes d'orcéine sont dissous dans 45 ml d'acide acétique glacial, de préférence chaud, et 55 ml d'eau distillée sont ajoutés à température ambiante.

Ensuite, il est constamment mélangé pour homogénéiser la solution, pour la laisser ensuite reposer jusqu'à ce qu'elle refroidisse. Enfin, il est conservé à 4 ° C dans des bocaux foncés. Cette préparation a été utilisée par Flores 2012, pour observer les phases de maturation des ovocytes de vache.

Dans ce cas, par exemple, la solution d'acéto-orcéine est placée sur le tissu préalablement fixé dans l'acide acétique-éthanol pendant 24 heures. Ce processus de coloration est effectué pendant 30 minutes et le tissu est ensuite décoloré.

De même, il peut être utilisé dans l'identification des organites dans les tissus multicellulaires. Dans ce cas, un frottis de la muqueuse buccale est coloré avec une goutte de la solution d'acéto-orcéine, la lamelle est placée sur la lame et le noyau de la cellule avec ses sous-structures peut être immédiatement observé.

Solution lacto-proponique orcéine 1%

De plus, l'orcéine peut être préparée avec d'autres produits chimiques tels que l'acide lactique et l'acide propionique. Pour ce faire, un gramme d'orcéine est dissous dans une solution prémélangée à température ambiante de 23 ml d'acide lactique et 23 ml d'acide propionique; compléter le volume avec de l'eau distillée jusqu'à 100 ml.

Avec cette solution d'orcéine lacto-propionique, il est possible d'observer les différentes phases de division méiotique des cellules végétales. Dans ce cas, l'échantillon pré-fixé et hydrolysé est placé pendant 15 minutes dans la solution d'orcéine lacto-propionique puis le tissu est étalé sur des lames de microscope.

Dans l'étude Duque 2016 sur les chromosomes polygéniques, il a utilisé une préparation de 2 grammes d'orcéine diluée dans de l'acide acétique et 85% d'acide lactique, diluée avec une solution d'acide acétique à 65%. Enfin, il a examiné les chromosomes des glandes salivaires de Drosophila melanogaster.

Orcéine A et Orcéine B

Il est important de noter qu'en fonction de l'échantillon et de ce qui doit être évalué, la solution d'orcéine appropriée est préparée. Ainsi, par exemple, de l'acide chlorhydrique 1 N est ajouté à la solution d'orcéine A pour observer les cellules en division.

Alors que la solution d'orcéine B est dissoute dans de l'acide acétique à 45%. Cette technique est une méthode de coloration abrégée et est généralement utilisée en complément de la coloration des structures chromosomiques.

Dernières pensées

Depuis des siècles, des lichens tels que Lecanora, Parmelia et Umbilicaria peuvent être trouvés dans des pays du continent américain comme l'Argentine, qui sont de grandes sources d'orcéine. Des régions européennes comme les îles Canaries étaient également à l'époque de grands producteurs d'orchilla.

Celui-ci était exporté vers d'autres villes de ce même continent comme Gênes et des pays comme l'Angleterre, tandis que la Hollande monopolisait la fabrication du tournesol à partir de l'orchilla. Par conséquent, ce lichen a ensuite été réduit jusqu'à ce qu'il soit sur le point de disparaître.

Cela a conduit à remplacer l'orchilla par d'autres plantes aux propriétés colorantes. Cependant, l'émergence de colorants synthétiques a contribué à la fin du commerce de ce lichen source d'orcéine.

Cela a été possible grâce à Cocq, qui en 1812 a décrit la synthèse de l'orcéine, sachant alors qu'elle est synthétisée par un composé phénolique appelé orcinol. Cependant, malgré cela, l'orcéine naturelle est toujours la préférée aujourd'hui.

Cela peut être dû au fait que l'orcinol est un composé à très forte odeur et que son exposition prolongée pourrait entraîner des risques pour la santé, tels que la perte de capacité à détecter les odeurs. Ces dommages à l'hypophyse peuvent passer de temporaires à permanents, plus l'exposition est importante.

Références

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