BOUILLON DE THIOGLYCOLLATE: JUSTIFICATION, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2024

Le bouillon de thioglycollate est une consistance fluide moyennement enrichie. Il est connu sous l'acronyme FTM pour son acronyme en anglais Fluid Thioglycollate Medium. Il a été créé par Brewer et modifié en 1944 par Vera, qui y a ajouté de la caséine peptone.

Ce milieu a un faible potentiel d'oxydoréduction, il n'est donc pas recommandé pour le développement de bactéries aérobies strictes, mais il est idéal pour récupérer des bactéries facultatives aérobies, anaérobies strictes et microaérophiles peu exigeantes.

Bouillon de thioglycollate sans indicateur. Montre un écoulement vaginal. Source: Bobjgalindo

La haute performance observée avec ce milieu dans l'isolement et la récupération d'une grande variété de micro-organismes, l'a fait accepter par la pharmacopée américaine (USP), par l'Association officielle des chimistes agricoles (AOAC) et par la pharmacopée européenne (EP).

Ces organisations le recommandent pour les tests de contrôle de stérilité des produits pharmaceutiques et pour l'enrichissement de divers types d'échantillons.

Le cado thioglycolate est composé d'extrait de levure, de digestion pancréatique de caséine, de dextrose anhydre, de L-cystine, de chlorure de sodium, de thioglycollate de sodium, de résazurine et d'agar en petite quantité.

Il existe plusieurs versions de ce milieu, parmi lesquelles: le bouillon de thioglycolate avec indicateur, le bouillon de thioglycolate sans indicateur, le bouillon de thioglycolate avec indicateur enrichi en hémine et vitamine K _1, et le bouillon de thioglycolate avec du carbonate de calcium.

Notamment, le variant de bouillon de thioglycollate enrichi en hémine et en vitamine K sert à améliorer la croissance des anaérobies exigeants, et le variant de bouillon de thioglycolate contenant du carbonate de calcium est utile pour contrer les acides produits pendant la croissance microbienne.

Base

Le bouillon de thioglycollate est considéré comme un milieu d'enrichissement non sélectif car il permet la croissance de la plupart des bactéries non exigeantes. Les besoins nutritionnels sont fournis par l'extrait de levure, la digestion pancréatique et le glucose.

En revanche, ce milieu, bien qu'étant un bouillon, contient une petite quantité d'agar; Cela signifie qu'il a un faible potentiel d'oxydoréduction, du fait qu'il ralentit l'entrée de l'oxygène, de telle sorte que l'oxygène diminue à mesure qu'il pénètre plus profondément dans le tube.

C'est pourquoi ce milieu est idéal pour le développement de bactéries aérobies facultatives, microaérophiles et anaérobies strictes, ces dernières 2 sans qu'il soit nécessaire d'incuber dans ces conditions. Le même milieu régule la quantité d'oxygène à l'intérieur du milieu, étant absent au fond du tube et en quantité suffisante en surface.

De même, le thioglycollate et la L-cystine agissent comme des agents réducteurs, aidant à prévenir l'accumulation de substances nocives pour le développement bactérien, comme le peroxyde. De plus, ces composés contiennent des groupes sulfhydryle (-SH-), neutralisant les effets inhibiteurs des dérivés du mercure, des arsenicaux, entre autres métaux lourds.

Pour sa part, la résazurine est un indicateur de réduction des oxydes. Cette substance est incolore lorsqu'elle est réduite et rose lorsqu'elle est oxydée. Il existe des variantes de bouillon de thioglycollate indicatrices et non indicatrices. Son utilisation dépendra du type d'échantillon et de la préférence du laboratoire.

Pendant ce temps, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du bouillon de thioglycollate et l'utilisation de glucose sous forme anhydre empêche l'excès d'humidité dans le milieu déshydraté.

préparation

Bouillon de thioglycollate avec indicateur

Peser 29,75 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange est laissé au repos pendant environ 5 minutes. Porter à une source de chaleur et remuer fréquemment jusqu'à dissolution complète.

Verser le milieu dans des tubes à essai et autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser refroidir avant utilisation. Vérifiez l'insert de la maison commerciale pour sa conservation. Certains recommandent de les conserver à température ambiante dans un endroit sombre, et d'autres dans un réfrigérateur à l'abri de la lumière.

Le pH du milieu préparé est de 7,1 ± 0,2.

La couleur du milieu déshydraté est beige clair et le milieu préparé est ambre clair avec une certaine opalescence.

Bouillon de thioglycollate avec indicateur enrichi en hémine et vitamine K

Il existe des milieux commerciaux qui contiennent déjà de l'hémine et de la vitamine K ₁, en particulier pour la culture des anaérobies.

Si vous ne disposez pas du milieu enrichi pour les anaérobies, vous pouvez préparer le bouillon de base au thioglycollate. Pour cela, 10 mg de chlorhydrate d'hémine et 1 mg de vitamine K _{1 sont ajoutés} pour chaque litre de milieu. Cependant, si du sang ou du sérum est ajouté au bouillon de thioglycollate, l'ajout d'hémine ou de vitamine K n'est pas nécessaire.

Bouillon de thioglycollate avec carbonate de calcium

Il vient dans le commerce et est préparé en suivant les instructions sur l'insert.

Bouillon de thioglycollate sans indicateur

Celui-ci a la même composition que le thioglycollate basique, mais ne contient pas de résazurine.

Peser 30 g de milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Le reste de la préparation est le même que celui décrit dans le bouillon de thioglycolate avec indicateur.

Utilisation

Le bouillon de thioglycollate est utile pour l'enrichissement d'échantillons cliniques, en particulier ceux provenant de sites stériles. Il est également utile pour les échantillons non cliniques, tels que les cosmétiques, les médicaments, etc.

Pour l'inoculation d'échantillons liquides (tels que le LCR, le liquide synovial, entre autres), les échantillons sont d'abord centrifugés puis 2 gouttes du sédiment sont prélevées et placées dans le bouillon de thioglycollate. Incuber à 35 ° C pendant 24 heures. Si pendant ce temps il n'y a pas de croissance (turbidité), il est incubé jusqu'à un maximum de 7 jours.

Si l'échantillon est prélevé avec un écouvillon, les milieux de culture sont d'abord inoculés dans des plaques et enfin l'écouvillon est introduit dans le bouillon, la partie saillante est fendue et le tube est bouché, laissant l'écouvillon à l'intérieur. Incuber à 35 ° C pendant 24 heures, 7 jours maximum.

Pour les échantillons solides, homogénéiser dans une solution saline physiologique (SSF) puis ensemencer le bouillon de thioglycollate avec 2 gouttes de la suspension.

Il peut parfois être utilisé comme milieu de transport pour les échantillons où des anaérobies stricts sont suspectés ou comme bouillon d'enrichissement de secours.

La variante de bouillon de thioglycolate avec du carbonate de calcium est utilisée pour le maintien des souches témoins pendant plus longtemps, car elle a la capacité de neutraliser les acides produits par l'utilisation de glucose; Ces acides sont toxiques pour certaines bactéries.

La croissance dans le bouillon de thioglycollate sera observée par la turbidité du milieu. Il est recommandé de réaliser une coloration de Gram puis de repiquer dans des milieux non sélectifs et sélectifs, en fonction du type d'échantillon et des microorganismes suspectés.

Contrôle de qualité

Pour le contrôle de la stérilité, il est recommandé d'incuber un ou deux bouillons sans inoculation. Le résultat attendu est un bouillon clair, sans changement de couleur, bien qu'il soit normal de voir une légère couleur rose sur la surface du tube.

Pour le contrôle de la qualité, entre 10 et 100 UFC de souches de contrôle certifiées doivent être inoculées, telles que Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Incuber à 30-35 ° C en aérobiose pendant 24 heures jusqu'à un maximum de 3 jours, car ces micro-organismes se développent rapidement.

Un bon développement est attendu dans tous les cas, sauf pour Micrococcus luteus et Bacillus subtilis, où il peut y avoir un développement modéré.

Pour le contrôle de la qualité du bouillon de thioglycollate enrichi en hémine et en vitamine K ₁, les souches témoins Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 et Bacteroides fragilis ATCC 25285 peuvent être utilisées. Le résultat attendu est une croissance satisfaisante.

recommandations

-Occasionnellement, on peut observer que la surface du bouillon de thioglycollate avec indicateur vire au rose; Cela est dû à l'oxydation du milieu. Si la couleur rose couvre 30% ou plus du bouillon total, elle peut être chauffée au bain-marie pendant 5 minutes, refroidie à nouveau et utilisée.

Cela éliminera l'oxygène absorbé, redonnant au support sa couleur d'origine. Cette procédure ne peut être effectuée qu'une seule fois.

-Pour améliorer la croissance des bactéries aérobies, incuber avec le couvercle légèrement desserré. Cependant, il est préférable d'utiliser à cet effet un bouillon d'infusion cerveau-cœur ou un bouillon trypticase soja pour le bon développement d'aérobies stricts.

-Le gel du support ou la surchauffe doit être évité, car les deux conditions endommagent le support.

-La lumière directe endommage le milieu de culture, il doit être conservé à l'abri de la lumière.

Références

1. Laboratoires Britannia. Thioglycollate USP avec indicateur. 2015. Disponible sur: labBritania.com.
2. Laboratoires Chios Sas. 2019. Bouillon de thioglycollate. Disponible sur: quios.com.co
3. Laboratoires BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Disponible sur: bd.com/Europe
4. Milieux BBL préparés dans des tubes pour la culture de microorganismes anaérobies. Milieux thioglycollate. 2013. Disponible sur: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana SA Argentine.