BOUILLON DE SÉLÉNITE: FOND DE TEINT, PRÉPARATION ET UTILISATIONS - LA BIOLOGIE - 2025

Le sélénite est un milieu de culture liquide sélectif. Il a été conçu par Leifson pour l'enrichissement d'échantillons où la présence de bactéries entéropathogènes du genre Salmonella est suspectée.

Ce milieu est conforme aux exigences de l'American Public Health Association (APHA) et est donc accepté pour l'investigation de la présence de Salmonella dans des échantillons de matières fécales, d'urine, d'aliments liquides ou solides, d'eau, entre autres.

Bouillon de sélénite. Source: Photo prise par l'auteur MSc. Marielsa gil

Sa composition chimique favorise la récupération de ces micro-organismes et inhibe à son tour la croissance des autres. Il est principalement toxique pour la plupart des bactéries appartenant à la famille des entérobactéries. Cependant, il permet également la récupération des souches de Shigella et n'inhibe pas la croissance de Pseudomonas et Proteus.

Il est composé de sélénite d'hydrogène de sodium anhydre, de phosphate de sodium anhydre, de peptones et de lactose. Il existe également une variante à laquelle la cystine est ajoutée, d'où son nom de bouillon sélénite-cystine.

Actuellement, l'utilisation de bouillon sélénite-cystine est préférée, car on obtient un pourcentage plus élevé de récupération de Salmonella, équivalent à celui observé avec d'autres milieux sélectifs dans le même but, tels que le bouillon au tétrathionate de sodium.

Base

Les peptones contenues dans le bouillon servent de nutriments pour le bon développement des micro-organismes. Les souches de Salmonella utilisent des peptones comme source d'azote, de vitamines et d'acides aminés.

Le lactose est le glucide fermentescible, tandis que le sélénite de sodium est la substance inhibitrice qui arrête la croissance des bactéries Gram positives et de la plupart des bactéries présentes dans la flore intestinale, en particulier de la famille des Enterobacteriaceae. Le phosphate de sodium est le tampon qui stabilise le pH du milieu.

Dans le cas de la variante de bouillon de sélénite contenant de la L-cystine, ce composé supplémentaire est un agent réducteur qui minimise la toxicité du sélénite, augmentant la récupération de Salmonella.

préparation

-Bouillon de sélénite

Si vous avez les composants du mélange, vous pouvez peser:

4 g d'hydrogénosélénite de sodium anhydre.

10 g de phosphate de sodium anhydre.

5 g de peptones.

4 grammes de lactose.

Dissoudre les composés dans 1 litre d'eau distillée stérile. Il peut être légèrement chauffé pour se dissoudre complètement.

Certains laboratoires exposent le milieu pendant 10 minutes à la vapeur courante pour le stériliser, car un autoclave ne doit pas être utilisé. Si le milieu est stérilisé, il peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à son utilisation.

Il peut également être préparé non stérile et servi directement de 10 à 15 ml dans des tubes à essai stériles.

Dans ce cas, il faut le laisser reposer et l'utiliser immédiatement. Comme le milieu n'est pas stérile, il ne peut pas être conservé au réfrigérateur pour une utilisation ultérieure.

- Préparation de l'environnement commercial

Si le milieu commercial est disponible, peser 23 g du milieu déshydraté et le dissoudre dans un litre d'eau distillée stérile. Chauffer brièvement pour terminer la dissolution. Ne pas autoclave. Servir de manière aseptique 10 ou 15 ml dans des tubes à essai stériles.

Le pH final du milieu doit être de 7,0 ± 0,2.

Il est à noter que la couleur du milieu déshydraté est beige et la préparation est ambrée claire et translucide.

Variante de bouillon sélénite-cystine

Il contient les mêmes composés que le bouillon de sélénite, mais 10 mg de cystine sont ajoutés. Le reste de la procédure est exactement le même que celui décrit ci-dessus.

Applications

Ce milieu est spécial pour être utilisé dans les études épidémiologiques, dans les cas où la maladie n'est pas à son stade aigu, chez les patients asymptomatiques ou les porteurs sains.

L'isolement du genre Salmonella est généralement difficile, car il ne s'agit généralement que d'échantillons peu contaminants. Étant en petites quantités, il est facilement chevauché par la croissance d'autres genres bactériens qui se trouvent en plus grande quantité.

D'autre part, la matière première avec laquelle les aliments transformés sont fabriqués est souvent exposée à la chaleur, aux processus de déshydratation, à l'utilisation de désinfectants, aux rayonnements et aux conservateurs, entre autres.

Par conséquent, les salmonelles présentes dans la matière première sont maltraitées en soumettant le produit aux procédés industriels mentionnés ci-dessus. De même, dans le cas d'échantillons cliniques tels que les matières fécales, les souches peuvent être faibles si elles proviennent de patients qui ont été traités avec des antibiotiques.

Par conséquent, tout échantillon dans lequel la présence de Salmonella est suspectée doit être préenrichi en bouillon de lactose, puis enrichi en bouillon de sélénite pour optimiser sa récupération dans des milieux sélectifs, tels que la gélose SS, la gélose au xylose, le désoxycholate de lysine (XLD), la gélose entérique Hektoen (HE) et la gélose vert clair, entre autres.

Semé

Pour les échantillons de selles, prélever 1 g d'échantillon et mettre en suspension dans un tube avec 10 à 15 ml de bouillon de sélénite. Si les selles sont liquides, prélever 1 ml et mettre en suspension dans le bouillon. Pour les écouvillons rectaux, évacuez le matériau de l'écouvillon dans le bouillon.

Dans les échantillons d'aliments solides, prélever 1 gr et mettre en suspension dans le bouillon de sélénite.

Dans les aliments liquides, mélanger à parts égales avec le bouillon de sélénite à double concentration.

Pour les échantillons d'urine, centrifuger, jeter le surnageant, prélever tout le sédiment et le mettre en suspension dans le bouillon de sélénite.

Les bouillons sont incubés à 37 ° C pendant 24 heures d'incubation. La croissance bactérienne est mise en évidence par la turbidité. Un tube supplémentaire par échantillon peut également être inclus pour une incubation à 42 ° C. Par la suite, ensemencement de milieux solides sélectifs à partir du bouillon de sélénite.

Contrôle de qualité

Pour contrôler la stérilité, un bouillon de sélénite de chaque lot non ensemencé est incubé à 37 ° C pendant 24 heures. On s'attend à ce qu'il n'y ait pas de turbidité ou de changement de couleur du milieu.

Des souches connues peuvent être utilisées pour contrôler le bon fonctionnement du milieu, telles que:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 et Proteus mirabilis ATCC 43071.

Les résultats attendus sont:

• Pour les trois premières souches bactériennes, la croissance doit être satisfaisante.
• Pour l'inhibition partielle d'Escherichia coli.
• Pour Proteus croissance modérée.

Limites

Le milieu de bouillon de sélénite est toxique pour la peau humaine, donc le contact direct doit être évité.

Références

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