- Base
- Bouillon EC
- Bouillon EC modifié à la novobiocine
- préparation
- Bouillon EC
- Bouillon EC modifié à la novobiocine
- Utilisation
- Analyse des coliformes totaux et fécaux
- Contrôle de qualité
- recommandations
- Références
Le bouillon EC ou bouillon Escherichia coli est un milieu de culture liquide sélectif. Ce milieu est recommandé par les Méthodes standard pour le comptage des coliformes totaux et fécaux, en utilisant la technique du nombre le plus probable (NPP) dans les échantillons d'aliments et d'eau, où le principal agent impliqué est Escherichia coli.
Le bouillon EC est composé de triptein, de lactose, de sels biliaires, de phosphate dipotassique, de phosphate monopotassique, de chlorure de sodium et d'eau. Sa formule est stratégiquement conçue pour favoriser la croissance des coliformes totaux et fécaux et empêcher le développement d'autres micro-organismes accompagnants.
Représentation figurative de la préparation du bouillon CE. Source: Pixabay.com
La bactérie Escherichia coli est le principal coliforme fécal présent en tant que contaminant dans l'eau et les sources de nourriture, étant la cause d'importants troubles gastro-intestinaux.
Il est à noter qu'il existe de nombreux sérotypes d'Escherchia coli; Parmi eux, on peut citer entérohémorragique (EHEC), entéro-invasif (EIEC), entéopathogène (EPEC), entérotoxinogène (ETEC) et entéro-agrégatif (EAEC).
Ce médium a la capacité de permettre le développement de tous, mais sans pouvoir les différencier les uns des autres. Cela nécessite des tests supplémentaires.
L'étude microbiologique de l'eau et des aliments par le nombre le plus probable (NPP) pour rechercher les coliformes totaux et fécaux est un protocole qui comprend plusieurs phases; phase de présomption, phase de confirmation et phase d’achèvement. Le bouillon EC est utilisé dans la phase de confirmation.
Base
Bouillon EC
Le milieu EC est basé sur l'apport des éléments nutritionnels nécessaires au développement optimal des coliformes totaux et fécaux, où la bactérie Escherichia coli est incluse.
Ces éléments nutritionnels sont fournis par la triptein, étant une excellente source de peptides et d'acides aminés. De plus, il contient également du lactose, un glucide fermentescible qui fournit de l'énergie et permet de montrer si les bactéries produisent du gaz.
D'autre part, le milieu contient des sels biliaires qui confèrent le caractère sélectif, car il inhibe la croissance des microorganismes Gram positifs qui peuvent être présents dans l'échantillon.
De même, le phosphate dipotassique et le phosphate monopotassique agissent comme un système d'équilibrage du pH. Ce système est nécessaire, car le lactose contenu dans le bouillon a tendance à acidifier le milieu lorsqu'il est fermenté par des microorganismes, mais ceci est compensé par les sels de phosphate.
Par conséquent, ces éléments sont essentiels, car une acidité incontrôlée peut affecter le bon développement des microorganismes recherchés.
De son côté, le chlorure de sodium stabilise le milieu de manière osmotique, tandis que l'eau est le solvant des solutés présents et donne la consistance liquide au milieu.
Bouillon EC modifié à la novobiocine
Okrend et Rose ont créé une variété de bouillon EC, appelé bouillon EC modifié à la novobiocine. La modification a consisté à réduire la concentration en sels biliaires et à ajouter 20 mg / dl de novobiocine.
Cette modification favorise la récupération des souches entérohémorragiques d'Escherichia coli (O157: H7).
Ce sérotype bactérien provoque une colite hémorragique sévère pouvant conduire au syndrome hémolytique et urémique (SHU); qui à son tour peut générer une insuffisance rénale aiguë, avec un taux de mortalité élevé pouvant atteindre jusqu'à 50% chez les personnes âgées.
En raison de la morbidité et de la mortalité annuelles causées par cette bactérie en raison de la consommation d'aliments contaminés, le Département de l'agriculture des États-Unis (USDA) recommande vivement l'utilisation de ce milieu.
préparation
Bouillon EC
Peser 37,4 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange doit être laissé au repos pendant 5 minutes. Par la suite, dans une source de chaleur, il est fini de se dissoudre en remuant fréquemment.
Une fois dissous, il est distribué dans des tubes à essai préconditionnés avec un tube Durham à l'intérieur. Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
Le pH du milieu doit être de 6,9 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est beige et le milieu préparé est ambre clair.
Les bouillons sont conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation. Au moment de l'utilisation, les bouillons doivent être à température ambiante.
D'autre part, le bouillon EC peut également être préparé à double concentration.
Bouillon EC modifié à la novobiocine
Peser 36,7 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Le reste de la préparation est le même que celui décrit ci-dessus.
Utilisation
Analyse des coliformes totaux et fécaux
Le bouillon EC est idéal pour la phase de confirmation de l'étude des coliformes par la méthode NMP, à la fois dans les échantillons d'eau, ainsi que dans les produits pharmaceutiques et alimentaires.
Les bouillons de lactose turbides produisant du gaz obtenus dans la phase de présomption doivent être réensemencés dans des bouillons verts brillants à 2% de bile et du bouillon EC.
Pour les coliformes totaux, les bouillons EC sont incubés en aérobie pendant 24 à 48 heures à 37 ° C, et pour les coliformes fécaux, ils sont incubés en aérobie pendant 24 à 48 heures à 44 ° C.
Dans les deux cas, il est interprété comme suit: les tubes turbides avec production de gaz sont considérés comme positifs. S'il n'y a pas de production de gaz en 24 heures, l'incubation se poursuit jusqu'à 48 heures.
Les bouillons EC positifs passent à la phase de confirmation complète, qui consiste à réensemencer sur des milieux sélectifs tels que la gélose Mac Conkey, la gélose EMB ou la gélose Endo.
Si le bouillon utilisé est de la CE modifiée à la novobiocine, il est recommandé de réensemencer les tubes positifs sur de la gélose Mac Conkey avec du sorbitol.
Contrôle de qualité
Chaque lot de milieu préparé doit faire l'objet d'un contrôle de qualité. Tout d'abord, la stérilité du milieu doit être évaluée. En ce sens, un ou deux bouillons sont incubés sans inoculation en aérobiose pendant 24 heures à 37 ° C. Le résultat attendu est un bouillon transparent, sans turbidité ni changement de couleur.
Deuxièmement, la croissance des souches connues doit être évaluée, pour cela les bactéries suivantes peuvent être utilisées: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
Dans tous les cas, un développement microbien satisfaisant est attendu, en observant un bouillon trouble avec production de gaz pour E. coli et pas de gaz pour Salmonella.
Les autres souches pouvant être incluses dans le contrôle sont: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ces souches doivent être totalement inhibées.
recommandations
-La mise en place des tubes de Durham est essentielle pour l'étude des coliformes.
-Distribuer le milieu dans les tubes à essai avant la stérilisation, jamais après.
-Ne pas utiliser si le support a plus de 3 mois.
-Ne pas utiliser si un changement des caractéristiques habituelles du milieu est observé.
Références
- Laboratoires Britannia. EC Medium. 2015. Disponible sur: britanialab.com
- E. coli entérohémorragique. Le Centre pour la sécurité alimentaire et la santé publique. 2010. Disponible sur: cfsph.iastate.edu
- Neogen Corporation. Milieu CE. Disponible sur: foodsafety.neogen.com
- Neogen. Milieu EC modifié à la novobiocine. Disponible sur: foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Détection, isolement et caractérisation d'Escherichia coli produisant de la toxine Shiga à partir de viande hachée fraîche provenant de bouchers de Concepción, province de Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Disponible sur: www.scielo.org.